目的 通过敲低微小RNA(microRNA, miRNA)-221和miRNA-222的表达上调组织金属蛋白酶抑制剂3(TIMP3)的方法来研究人乳腺癌MCF-7细胞系的增殖和迁移能力。方法 根据miRBase数据库中Homo sapiens(hsa)-miRNA-221和hsa-miRNA-222的寡核苷酸序列和一段无义序列分别设计并重组成质粒:反义抑制miRNA-221(antisense-miRNA-221, AS-miRNA-221)、反义抑制miRNA-222(antisense-miRNA-222, AS-miRNA-222)、共同反义抑制miRNA-221/222(antisense-miRNA-221/222, AS-miRNA-221/222)和无义抑制(Scramble), 并将其分别利用脂质体LipofectamineTM2000转染进人乳腺癌MCF-7细胞中, 经G418筛选后建立稳定表达的对照细胞株[未转染正常细胞(Control组)和无义抑制细胞(Scramble组)]和低表达miRNA-221、miRNA-222细胞株(即AS-miRNA-221组、AS-miRNA-222组和AS-miRNA-221/222组)。转染24 h后于荧光显微镜下观察转染效率;采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测各组细胞中miRNA-221和miRNA-222的表达量, 采用逆转录PCR检测各组细胞中质粒载体上携带的抗性neo基因的表达情况, 以此来验证转染是否成功;分别采用实时荧光定量PCR、免疫印迹法检测TIMP3 和金属蛋白酶17(ADAM17)的表达差异;采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测并绘制生长曲线, 观察低表达miRNA-221、miRNA-222各组细胞的生长能力;采用划痕修复实验观察转染后细胞的迁移能力。结果 转染24 h之后, 在荧光显微镜下观察到各转染组细胞的绿色荧光蛋白表达较多, 即转染效率较高。检测转染后各组细胞中neo基因、miRNA-221和miRNA-222的表达。与Control组比较, Scramble组、AS-miRNA-221组、AS-miRNA-222组、AS-miRNA-221/222组neo基因表达明显升高;与Scramble组比较, AS-miRNA-221组、AS-miRNA-222组、AS-miRNA-221/222组miRNA-221和miRNA-222的表达量明显降低, 即证实转染了反义抑制miRNA-221/222的低表达稳定细胞株构建成功。与Scramble组比较, AS-miRNA-221组、AS-miRNA-222组、AS-miRNA-221/222组细胞TIMP3 mRNA表达升高, 而其调控的ADAM17水平降低。生长曲线显示低表达miRNA-221、miRNA-222各组细胞的生长能力明显受到抑制。划痕修复实验结果显示低表达miRNA-221、miRNA-222各组细胞的迁移能力降低。结论 通过敲低miRNA-221、miRNA-222、上调TIMP3表达可以抑制人乳腺癌细胞系MCF-7的增殖和迁移能力。