TaqMan-MGB荧光定量PCR检测人载脂蛋白A5基因方法的建立及评价

检验医学 ›› 2012, Vol. 27 ›› Issue (5): 400-403.

TaqMan-MGB荧光定量PCR检测人载脂蛋白A5基因方法的建立及评价

陈娟,张葵,李雷,魏红霞

1.东南大学医学院，江苏南京 210008；2.南京大学医学院附属南京鼓楼医院检验科，江苏南京 210008

收稿日期:2012-03-19 出版日期:2012-05-30 发布日期:2012-05-10
通讯作者: 张　葵，联系电话：025-83105360。
作者简介:陈　娟，女，1981年生，硕士，主要从事糖代谢与心血管疾病关系研究。
基金资助:
南京市科技发展重点项目(zkx09030)

Development and evaluation of Real-time PCR and TaqMan-MGB Probe assay for detecting of apolipoprotein A5 gene

1.Medical College of Southeast University， Jiangsu Nanjing 210008, China；2.Department of Clinical Laboratory, Drum Tower Hospital Affiliated to Medical School of Nanjing University， Jiangsu Nanjing 210008, China

Received:2012-03-19 Online:2012-05-30 Published:2012-05-10

摘要/Abstract

摘要： 目的　建立以TaqMan-MGB荧光探针为特点的荧光定量聚合酶链反应（PCR），用于检测人载脂蛋白A5（apo A5）基因。方法　针对人apo A5基因设计特异性引物和TaqMan-MGB荧光探针，以重组克隆质粒pPCR-Script-apo A5为DNA模板，在荧光定量PCR 仪上建立TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法和标准曲线，进行灵敏度、重复性、特异性实验。结果　建立的定量标准曲线阈值循环数（Ct）与模板拷贝数呈良好线性关系（r=0.998）；最低检测浓度为 10³拷贝/μL；扩增效率(E)为110.2%，且重复性好。结论　成功建立检测人apo A5基因的TaqMan-MGB荧光定量PCR。该法具有较好的灵敏度、特异性及重复性。

关键词: 聚合酶链反应, 载脂蛋白A5, 2型糖尿病

Abstract: Objective　To establish fluorescence quantitation polymerase chain reaction (PCR) based on TaqMan-MGB probe for detecting apolipoprotein A5（apo A5）gene. Methods　The assay, which was based on specific primers and TaqMan-MGB probe from apo A5 gene, was performed to reconstruct DNA fragment of pPCR-Script-apoA5. The fluorescence quantitation PCR with TaqMan-MGB probe and the standard curve were established. The sensitivity， specificity and repeatability of the TaqMan-MGB probe fluorescence quantitation PCR were determined. Results　A fine linear relationship between the threshold cycle (Ct) values of the developed standard curve and the copy number of template was observed (r=0.998). The sensitivity of the assay was 10³ copies/μL, the amplification efficiency of assay was 110.2%, and the repeatability was good.Conclusions　The fluorescence quantitation PCR based on TaqMan-MGB probe for detecting the apo A5 gene is successfully developed with high sensitivity，specificity and repeatability.

Key words: Polymerase chain reaction, Apolipoprotein A5, Type 2 diabetes mellitus

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