纳米颗粒增强透射免疫比浊法检测乳酸脱氢酶同工酶3方法的建立及性能评价

doi:10.3969/j.issn.1673-8640.2017.02.016

检验医学 ›› 2017, Vol. 32 ›› Issue (2): 138-142.DOI: 10.3969/j.issn.1673-8640.2017.02.016

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纳米颗粒增强透射免疫比浊法检测乳酸脱氢酶同工酶3方法的建立及性能评价

董奕裕¹, 吴奕征², 沈丽丽³, 陈群³

1. 浙江省荣军医院检验科,浙江嘉兴 314000
2. 浙江大学医学院临床医学系,浙江杭州 310029
3. 浙江省荣军医院内科,浙江嘉兴 314000

收稿日期:2016-02-03 出版日期:2017-03-30 发布日期:2017-03-30
作者简介:null
作者简介：董奕裕,男,1968年生,硕士,主管技师,主要从事临床免疫检测工作。
基金资助:
嘉兴市科技局计划项目（2013AY21065）

Establishment and performance of nano particle-enhanced turbidimetric immunoassay for determining serum lactate dehydrogenase isoenzyme 3

DONG Yiyu¹, WU Yizheng², SHEN Lili³, CHEN Qun³

1. Department of Clinical Laboratory,Rongjun Hospital of Zhejiang,Jiaxing 314000,Zhejiang,China
2. Department of Clinical Medicine,Zhejiang University School of Medicine,Hangzhou 310029,Zhejiang,China
3. Department of Internal Medicine,Rongjun Hospital of Zhejiang,Jiaxing 314000,Zhejiang,China

Received:2016-02-03 Online:2017-03-30 Published:2017-03-30

摘要/Abstract

摘要：

目的建立纳米颗粒增强透射免疫比浊法（PETIA）测定乳酸脱氢酶同工酶3（LDH3）的分析方法。方法确定最适反应条件,包括抗体浓度、胶乳微球粒径、交联剂[1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDAC）/N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）]浓度、缓冲液种类及pH值、反应时间,并建立检测血清LDH₃的PETIA方法。按美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）EP5-A2文件要求,评价方法的精密度、线性范围、回收率、抗干扰能力和分析灵敏度,并初步建立参考区间。结果 PETIA最适反应条件：抗体浓度为0.1 mg/mL、胶乳微球粒径为120 nm、交联剂（EDAC/NHS）浓度为10 mg/mL、缓冲液为磷酸盐缓冲液（PBS）、pH值为7.8时偶联率最佳,室温（25 ℃）和低温（4 ℃）放置24 h偶联率保持不变。采用建立的PETIA检测LDH3低值（16.5 U/L）、中值（65.0 U/L）和高值（155.0 U/L）的批内变异系数（CV）分别为5.77%、4.02%、3.77%,批间CV分别为6.59%、4.44%、3.93%;线性范围为3.6~200.0 U/L;平均回收率为102.1%;900 U/L类风湿因子、500 μmol/L胆红素、9 mmol/L甘油三酯、5 g/L血红蛋白、5 g/L维生素C均无明显干扰;分析灵敏度为3.6 U/L;参考区间为13.5~75.9 U/L。结论建立的PETIA测定LDH₃具有方法简单、快速、灵敏等优点,且结果准确,可用于全自动生化分析仪,能够满足临床检验的要求。

关键词: 乳酸脱氢酶同工酶3, 纳米颗粒增强透射免疫比浊法, 性能评价

Abstract:

Objective To establish nano particle-enhanced turbidimetric immunoassay（PETIA） for determining serum lactate dehydrogenase isoenzyme 3（LDH₃）.Methods The optimal reaction conditions [antibody concentration,latex particle size,1-ethyl-3-（3-dimethylaminopropyl）carbodiimide（EDAC）/ N-hydroxysuccinimido（NHS） concentration,the kind and pH value of buffer solution and reaction time] were determined. PETIA for determining serum LDH₃ was established. According to the National Committee for Clinical Laboratory Standards EP5-A2,the precision,linear range,recovery rate,anti-interference ability and analytic sensitivity were evaluated,and the initial reference interval was established.Results The optimal reaction conditions were antibody concentration 0.1 mg/mL,latex particle size 120 nm,EDAC/ NHS concentration 10 mg/mL,phosphate buffered saline（PBS） with pH value 7.8 and coupling rate remaining unchanged under room temperature（25 ℃）and low temperature（4 ℃） for 24 h. For LDH3 with low value（16.5 U/L）,median value（65.0 U/L） and high value（155.0 U/L）,the within-run coefficients of variation（CV） were 5.77%,4.02% and 3.77%,and the between-run CV were 6.59%,4.44% and 3.93%. The linear range was 3.6-200.0 U/L. The average recovery rate was 102.1%. The factors of 900 U/L rheumatoid factor,500 μmol/L bilirubin,9 mmol/L triglyceride,5 g/L hemoglobin,5 g/L vitamin C had no interference for PETIA in the determination of LDH3. The analytic sensitivity was 3.6 U/L. The reference interval was 13.5-75.9 U/L. Conclusions PETIA for the determination of LDH3 is simple,rapid,sensitive and accurate,and it can be used in automatic biochemical analyzers,which can meet the requirements of clinical determination.

Key words: Lactate dehydrogenase isoenzyme 3, Nano particle-enhanced turbidimetric immunoassay, Performance evaluation

中图分类号:

Q554

董奕裕, 吴奕征, 沈丽丽, 陈群. 纳米颗粒增强透射免疫比浊法检测乳酸脱氢酶同工酶3方法的建立及性能评价[J]. 检验医学, 2017, 32(2): 138-142.

DONG Yiyu, WU Yizheng, SHEN Lili, CHEN Qun. Establishment and performance of nano particle-enhanced turbidimetric immunoassay for determining serum lactate dehydrogenase isoenzyme 3[J]. Laboratory Medicine, 2017, 32(2): 138-142.

图/表 3

参考文献 8

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LDH3	批内			批间
LDH3	x （U/L）	s（U/L）	CV（%）	x （U/L）	s（U/L）	CV（%）
低值	15.6	0.9	5.77	16.7	1.1	6.59
中值	62.2	2.5	4.02	63.1	2.8	4.44
高值	153.7	5.8	3.77	155.3	6.1	3.93

LDH3	批内			批间
LDH3	x （U/L）	s（U/L）	CV（%）	x （U/L）	s（U/L）	CV（%）
低值	15.6	0.9	5.77	16.7	1.1	6.59
中值	62.2	2.5	4.02	63.1	2.8	4.44
高值	153.7	5.8	3.77	155.3	6.1	3.93

样本号	测定值（U/L）	理论值（U/L）	回收率（%）
1	17.6	16.5	106.7
2	40.4	38.5	104.9
3	75.4	77.5	97.3
4	115.2	120.5	95.6
5	162.3	155.5	104.4
6	218.9	210.7	103.9

样本号	测定值（U/L）	理论值（U/L）	回收率（%）
1	17.6	16.5	106.7
2	40.4	38.5	104.9
3	75.4	77.5	97.3
4	115.2	120.5	95.6
5	162.3	155.5	104.4
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纳米颗粒增强透射免疫比浊法检测乳酸脱氢酶同工酶3方法的建立及性能评价

Establishment and performance of nano particle-enhanced turbidimetric immunoassay for determining serum lactate dehydrogenase isoenzyme 3

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图/表 3

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