乙型肝炎病毒X基因真核表达载体的构建

检验医学 ›› 2012, Vol. 27 ›› Issue (11): 921-924.

乙型肝炎病毒X基因真核表达载体的构建

李晓斐

青岛市传染病医院检验科山东青岛 266033

收稿日期:2012-09-18 修回日期:2012-08-02 出版日期:2012-11-30 发布日期:2012-11-14
作者简介:李晓斐，男，1957年生，学士，副主任技师，主要从事分子生物学研究。

Establishment of hepatitis B virus X gene eukaryotic expression vector

Department of Clinical Laboratory，Qingdao Infection Diseases Hospital，Shandong Qingdao 266033，China

Received:2012-09-18 Revised:2012-08-02 Online:2012-11-30 Published:2012-11-14

摘要/Abstract

摘要： 目的　构建含有乙型肝炎病毒（HBV）X基因的真核表达载体，并对其表达进行鉴定。方法　用聚合酶链反应（PCR）方法扩增X基因序列，对pcDNA6（＋）载体及X基因PCR产物双酶切并转化大肠杆菌DH5α，筛选阳性克隆，并对其进行双酶切和测序鉴定，构建HBV X基因真核表达载体pcDNA6（＋）-HBx。以多聚乙烯酰胺（PEI）法将其转染到HepG2细胞，Western Blot鉴定目的蛋白。结果　pcDNA6-HBx酶切后，琼脂糖电泳可见到HBx基因片段，经序列测定其含有完整的X基因片段；Western Blot结果显示pcDNA6（＋）-HBx能在HepG2细胞中表达X蛋白。结论　成功构建了真核表达载体pcDNA6（＋）-HBx，并能在HepG2细胞中表达X蛋白，为进一步研究HBV X基因与慢性乙型肝炎及肝癌的关系提供便利条件。

关键词: 乙型肝炎病毒, X基因, 真核表达

Abstract: Objective　To establish hepatitis B virus（HBV）X gene eukaryotic expression vector and identify its expression. Methods　Polymerase chain reaction（PCR）was used to amplify X gene sequence，and the pcDNA6（＋）vector and X gene PCR product double enzyme digestion transformed into Escherichia coli DH5 alpha.The positive clones were screened，and the double enzyme digestion and DNA sequencing were used to establish HBV X gene eukaryotic expression vector pcDNA6（＋）-HBx.By polyetherimide（PEI）method，the transformation into HepG2 cells was performed，and Western blot identification of target protein was carried out. Results　After pcDNA6-HBx enzyme digestion，agarose gel electrophoresis found HBx gene fragment，and sequencing results showed containing the complete X gene fragment.Western blot results showed that the pcDNA6（＋）-HBx in HepG2 cells expressed X protein. Conclusions　The eukaryotic expression vector pcDNA6（＋）-HBx is established successfully，and there is X protein expression in HepG2 cells. It provides convenience for the further study of HBV X gene with chronic hepatitis and hepatocellular carcinoma.

Key words: Hepatitis B virus, X gene, Eukaryotic expression

李晓斐. 乙型肝炎病毒X基因真核表达载体的构建[J]. 检验医学, 2012, 27(11): 921-924.

LI Xiaofei. Establishment of hepatitis B virus X gene eukaryotic expression vector[J]. , 2012, 27(11): 921-924.

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