检验医学 ›› 2024, Vol. 39 ›› Issue (1): 87-94.DOI: 10.3969/j.issn.1673-8640.2024.01.016
DAI Hongjian1, CUI Haining2, LI Yanfeng2, CUI Hongmei1()
摘要:
目的 探讨miR-155-5p对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖、迁移和侵袭的调控作用和机制。方法 收集人口腔癌细胞系CAL-27、HN4、HN6、SCC4、TCA8113和正常口腔上皮角质细胞系HOK,检测miR-155-5p表达。根据转染质粒的不同分为miR-NC组(转染miR-155-5p模拟物阴性对照)和miR-155-5p组(转染miR-155-5p模拟物)、anti-NC组(转染miR-155-5p抑制物阴性对照)、anti-miR-155-5p组(转染miR-155-5p抑制物)、Vector组(转染空质粒载体)、pc-ARID2组(转染ARID2过表达质粒)、miR-NC+Vector组(共转染阴性对照和空质粒载体)、miR-155-5p+Vector组(共转染miR-155-5p模拟物和空质粒载体)和miR-155-5p+pc-ARID2组(共转染miR-155-5p模拟物和ARID2过表达质粒)。采用CCK-8实验、克隆形成实验检测细胞增殖情况,分别采用划痕实验和侵袭实验检测CAL-27细胞、HN4细胞的迁移、侵袭情况,采用免疫印迹法检测ARID2蛋白的表达情况。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-155-5p与ARID2的靶向关系。结果 与正常口腔上皮角质细胞系HOK比较,OSCC细胞系(SCC4、HN6、HN4、CAL-27、TCA8113)miR-155-5p表达均显著上调(P<0.01)。与anti-NC组比较,anti-miR-155-5p组miR-155-5p相对表达量显著降低(P<0.01),增殖活性、克隆形成数、划痕闭合率和侵袭细胞数均显著降低(P<0.01)。与miR-NC组比较,miR-155-5p组ARID2蛋白表达显著下调(P<0.01),增殖活性、克隆形成数、划痕闭合率和侵袭细胞数均显著升高(P<0.01);anti-miR-155-5p组ARID2蛋白表达显著上调(P<0.01),增殖活性、克隆形成数、划痕闭合率和侵袭细胞数均显著降低(P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验证实,与共转染miR-NC和pmiR-ARID2野生型质粒(pmiR-ARID2-wt)比较,共转染miR-155-5p mimic和pmiR-ARID2突变型质粒(pmiR-ARID2-wt)后荧光素酶活性显著降低(P<0.01)。与Vector组比较,pc-ARID2组ARID2 mRNA表达显著上调(P<0.01),增殖活性、克隆形成数、划痕闭合率和侵袭细胞数均显著降低(P<0.01)。与miR-NC+Vector组比较,miR-155-5p+Vector组增殖活性、克隆形成数、侵袭细胞数和划痕闭合率均显著升高(P<0.01);与miR-155-5p+Vector组比较,miR-155-5p+pc-ARID2组增殖活性、克隆形成数、侵袭细胞数和划痕闭合率均显著降低(P<0.01)。结论 OSCC细胞中miR-155-5p表达上调,并可通过靶向抑制ARID2表达促进OSCC细胞增殖、迁移和侵袭,进而发挥致癌基因作用。
中图分类号: