PCR结合熔解曲线在高血压药物相关基因突变检测中的应用

doi:10.3969/j.issn.1673-8640.2022.07.010

检验医学 ›› 2022, Vol. 37 ›› Issue (7): 646-651.DOI: 10.3969/j.issn.1673-8640.2022.07.010

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PCR结合熔解曲线在高血压药物相关基因突变检测中的应用

万长春¹, 杨辉², 庄学伟³()

1.金湖县人民医院检验科,江苏金湖 211600
2.中日友好医院检验科,北京 100029
3.山东省立第三医院检验科,山东济南 250000

收稿日期:2021-04-23 修回日期:2022-01-09 出版日期:2022-07-30 发布日期:2022-08-26
通讯作者: 庄学伟
作者简介:庄学伟,E-mail： zy708910614@163.com。
万长春,男,1972年生,硕士,副主任技师,主要从事感染性疾病及药物基因诊断相关工作。
基金资助:
山东省自然科学基金资助项目(ZR2020MH321)

Application of polymerase chain reaction melting curve method in determining hypertensive drug-related gene mutations

WAN Changchun¹, YANG Hui², ZHUANG Xuewei³()

1. Department of Clinical Laboratory,Jinhu People's Hospital,Jinhu 211600,Jiangsu,China
2. Department of Clinical Laboratory,China-Japan Friendship Hospital,Beijing 100029,China
3. Department of Clinical Laboratory,Shandong Provincial Third Hospital,Jinan 250000,Shandong,China

Received:2021-04-23 Revised:2022-01-09 Online:2022-07-30 Published:2022-08-26
Contact: ZHUANG Xuewei

摘要/Abstract

摘要：

目的评价聚合酶链反应（PCR）结合熔解曲线（简称溶解曲线法）在高血压药物相关基因突变检测中的应用价值。方法采用PCR熔解曲线法检测100例高血压患者5个高血压药物相关基因的单核苷酸多态性（SNP）位点[细胞色素P450同工酶2D6（CYP2D6）rs1065852、细胞色素P450同工酶2C9（CYP2C9）rs1057910、β1肾上腺素受体（ADRB1）rs1801253、血管紧张素Ⅱ受体1（AGTR1）rs5186、血管紧张素转换酶（ACE）rs1799752],并与DNA测序结果进行比对。对PCR熔解曲线法的准确性、重复性、抗干扰能力进行评价。结果 PCR熔解曲线法与测序法对100例高血压患者的检测结果均一致,符合率为100%;检测5个基因位点Tm值的极值（R）均<0.5 ℃。血红蛋白（Hb）≤2 g/L、胆红素（Bil）≤342 μmol/L、三酰甘油（TG）≤37 mmol/L对PCR熔解曲线法均无影响,Tm值的变异系数（CV）均≤5%。100例高血压患者中,AGTR1（c.1166A>C）及CYP2C9*3（c.1075A>C）纯合突变型各1例,CYP2D6*10基因型频率为39.5%,CYP2C9*3基因型频率为5.5%,ADRB1基因突变型C等位基因频率为62.0%,AGTR1基因突变型C等位基因频率为5.0%,ACE缺失型D等位基的频率为35.0%。结论 PCR熔解曲线法操作简便,对设备要求低,可作为检测降压药物相关基因突变的常规方法。

关键词: 聚合酶链反应熔解曲线法, 高血压药物相关基因, 单核苷酸多态性

Abstract:

Objective To assess the clinical application of polymerase chain reaction（PCR） melting curve method in determining hypertensive drug-related gene mutations. Methods Totally,100 hypertension patients were enrolled,and the single nucleotide polymorphism（SNP） sites of hypertensive drug-related gene mutations,including cytochrome P450 2D6（CYP2D6）rs1065852,cytochrome P450 2C9（CYP2C9）rs1057910,betal-adrenergic receptor-1（ADRB1）rs1801253,angiotensin Ⅱ receptor 1（AGTR1）rs5186 and angiotensin-converting enzyme（ACE）rs1799752,were determined. DNA sequencing was performed. The accuracy,repeatability,anti-interference and the genotype frequency of PCR melting curve method were evaluated. Results The consistency of PCR melting curve method and DNA sequencing was 100%. The extremum values（R） of the Tm about 5 gene sites were all <0.5 ℃. Hemoglobin（Hb）≤2 g/L,bilirubin（Bil）≤342 μmol/L,triglyceride（TG）≤37 mmol/L had no effect on PCR melting curve method. The coefficient of variation（CV）of Tm was ≤5%. In 100 hypertension patients,there was 1 case of AGTR1（c.1166A>C） and 1 case of CYP2C9*3（c.1075A>C）homozygous mutations. The genotype frequencies of CYP2D6*10 and CYP2C9*3 were 39.5% and 5.5%,respectively. The genotype frequencies of C allele of mutant ADRB1,C allele of mutant AGTR1 and D allele of ACE deletion were 62.0%,5.0% and 35.0%,respectively. Conclusions PCR melting curve method is simple and has low requirements for equipments,and it can be used as a routine method for determining anti-hypertensive drug-related gene mutations.

Key words: Polymerase chain reaction melting curve method, Hypertensive drug-related gene, Single nucleotide polymorphism

中图分类号:

R446.7

万长春, 杨辉, 庄学伟. PCR结合熔解曲线在高血压药物相关基因突变检测中的应用[J]. 检验医学, 2022, 37(7): 646-651.

WAN Changchun, YANG Hui, ZHUANG Xuewei. Application of polymerase chain reaction melting curve method in determining hypertensive drug-related gene mutations[J]. Laboratory Medicine, 2022, 37(7): 646-651.

图/表 4

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样本	AGTR1 rs5786	CYP2C9*3 rs1057910	ACE rs1799752	CYP2D6*10 rs1065852	ADRB1 251801253
样本1
Tm1	0.00	0.33	0.00	0.00	0.00
Tm2	—	—	—	—	0.00
样本2
Tm1	0.32	0.33	0.00	0.00	0.00
Tm2	—	—	—	—	0.00
样本3
Tm1	0.00	0.33	0.00	0.00	0.32
Tm2	—	—	—	—	—
样本4
Tm1	0.00	0.00	0.00	0.00	0.32
Tm2	—	0.33	—	—	0.33
样本5
Tm1	0.00	0.33	0.00	0.00	0.00
Tm2	—	—	0.00	0.00	—

样本	AGTR1 rs5786	CYP2C9*3 rs1057910	ACE rs1799752	CYP2D6*10 rs1065852	ADRB1 251801253
样本1
Tm1	0.00	0.33	0.00	0.00	0.00
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样本2
Tm1	0.32	0.33	0.00	0.00	0.00
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Tm1	0.00	0.33	0.00	0.00	0.32
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样本4
Tm1	0.00	0.00	0.00	0.00	0.32
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样本5
Tm1	0.00	0.33	0.00	0.00	0.00
Tm2	—	—	0.00	0.00	—

基因位点	Tm1		Tm2
基因位点	检测值 /℃	CV/%	检测值/℃	CV/%
AGTR1 rs5186
Hb	53.28±0.08	0.14	63.38±0.20	0.32
Bil	53.52±0.23	0.43	62.92±0.29	0.47
TG	53.43±0.53	1.00	63.08±0.35	0.56
CYP2C9*3 rs1057910
Hb	57.43±0.29	0.51	—	—
Bil	57.42±0.13	0.22	—	—
TG	57.48±0.33	0.58	—	—
ACE rs1799752
Hb	—	—	58.65±0.44	0.76
Bil	—	—	59.02±0.21	0.35
TG	—	—	58.70+0.41	0.70
CYP2D6*10 rs1065852
Hb	58.67±0.43	0.73	67.77±0.13	0.19
Bil	58.63±0.23	0.38	67.68±0.45	0.67
TG	58.98±0.18	0.30	67.62±0.48	0.70
ADRB1 rs1081253
Hb	55.70±0.13	0.24	—	—
Bil	55.67±0.28	0.49	—	—
TG	55.92±0.19	0.34	—	—

基因位点	Tm1		Tm2
基因位点	检测值 /℃	CV/%	检测值/℃	CV/%
AGTR1 rs5186
Hb	53.28±0.08	0.14	63.38±0.20	0.32
Bil	53.52±0.23	0.43	62.92±0.29	0.47
TG	53.43±0.53	1.00	63.08±0.35	0.56
CYP2C9*3 rs1057910
Hb	57.43±0.29	0.51	—	—
Bil	57.42±0.13	0.22	—	—
TG	57.48±0.33	0.58	—	—
ACE rs1799752
Hb	—	—	58.65±0.44	0.76
Bil	—	—	59.02±0.21	0.35
TG	—	—	58.70+0.41	0.70
CYP2D6*10 rs1065852
Hb	58.67±0.43	0.73	67.77±0.13	0.19
Bil	58.63±0.23	0.38	67.68±0.45	0.67
TG	58.98±0.18	0.30	67.62±0.48	0.70
ADRB1 rs1081253
Hb	55.70±0.13	0.24	—	—
Bil	55.67±0.28	0.49	—	—
TG	55.92±0.19	0.34	—	—

基因位点	纯合野生	杂合子	纯合突变	突变型等位基因频率
AGTR1（c.1166A>C）rs5186	91.0	8.0	1.0	5.0
CYP2C9*3（c.1075A>C）rs1057910	90.0	9.0	1.0	5.0
ACE（I/D）rs1799752	41.0	48.0	11.0	35.0
CYP2D6*10（c.100C>T）rs1065852	45.0	31.0	24.0	39.5
ADRB1（c.1165G>C）rs1801253	2.0	5.0	48.0	62.0

PCR结合熔解曲线在高血压药物相关基因突变检测中的应用

Application of polymerase chain reaction melting curve method in determining hypertensive drug-related gene mutations

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