ABO等位基因调控区突变致抗原弱表达原因分析

doi:10.3969/j.issn.1673-8640.2021.06.013

摘要/Abstract

摘要：

目的对1例ABO血型血清学鉴定困难的患儿进行基因分型,查找突变基因,分析血型鉴定困难的原因。方法采用微柱凝胶法对患儿进行血清学鉴定,分别选用ABO-Rh血型确认卡（DG GelConfirm卡）、中性卡（DG GelNeutral卡）及抗球蛋白卡（DG GelCoombs卡）进行血清学血型鉴定、抗球蛋白试验和抗体筛查试验,采用聚合酶链反应（PCR）结合直接测序方法检测患儿ABO基因增强子、启动子、第1~7号外显子及其相邻的内含子区域,寻找变异位点。结果患儿红细胞与抗A反应为弱凝集（++）、与抗B不凝集,血清与A1细胞和B细胞反应均为强凝集（++++）、与O细胞不凝集,其表型为A_weak,抗球蛋白试验和抗体筛查试验均为阴性。A基因增强子CBF/NF-Y微卫星出现4个43 bp串联,比正常情况多3个串联。结论患儿A等位基因增强子出现的4个43 bp串联是引起其A抗原弱表达的原因。

关键词: ABO血型, 基因型, 基因调控区, 增强子

Abstract:

Objective To analyze the reason of 1 case of the discrepancy of ABO blood group and find out the mutation gene through carrying out genotyping. Methods Serologic blood group was identified by microcolumn gel method,and antibodies were screened and determined with DG GelConfirm cards,DG GelNeutral cards,DG GelCoombs cards. The enhancer,promoter,exon 1-exon 7 and their adjacent intron region of ABO gene were amplified by polymerase chain reaction（PCR）,the PCR products were directly sequenced to identify the gene mutation. Results The patient's red blood cells showed weak agglutination with anti-A（++）,noagglutination with anti-B. The patient's serum showed strong agglutination with A1 cell（++++）,B cell（++++）,noagglutination with O cells（A_weak）. The direct antiglobulin test,indirect antiglobulin test and antibody screening were all negative. Totally,4 short 43 bp tandem repeat units in enhancer region was 3 more than the normal A allele. Conclusions The 4 short 43 bp tandem repeat units in enhancer region of A allele is the cause of the weak expression of A antigen.

Key words: ABO blood group, Genotype, Regulatory region, Enhancer

中图分类号:

R446.1

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图/表 5

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引物名称	引物序列（5'→3'）	扩增片段长度/bp
Promoter-E1^①	F：CGGGAGACAGGGTGTCAAG	731
	R：TCGGGCGGTAGGTGCTGAA
Enhancer	F：CCCCATCCATAGTCAGATAAGC	724
	R：AAAGCAGCCAGCCAGTGTT
ABO-E2	F：GAGAAGGAGGGTGAGTGATG	323
	R：AGTGAGATGAGCCTGTTGC
ABO-E3	F：GTCCCAGAACCAAGAGTGA	616
	R：TCCAGAGGTATCCAGGTGA
ABO-E4	F：AAGACCAACATCCCAAGAA	624
	R：GAGCCACAGGAGGAAAGAG
ABO-E5	F：TGCTTACCTGCATCCCACGCT	572
	R：TCAAGGAAACCGCCCTCTAAT
ABO-E6	F：CATTTGCCTCTGGTTGGTTT	522
	R：CTGGAGAAGGAGCTGGGTTT
ABO-E7	F：TCTGCTGCTCTAAGCCTTCC	878
	R：CCCGTTCTGCTAAAACCAAG

引物名称	引物序列（5'→3'）	扩增片段长度/bp
Promoter-E1^①	F：CGGGAGACAGGGTGTCAAG	731
	R：TCGGGCGGTAGGTGCTGAA
Enhancer	F：CCCCATCCATAGTCAGATAAGC	724
	R：AAAGCAGCCAGCCAGTGTT
ABO-E2	F：GAGAAGGAGGGTGAGTGATG	323
	R：AGTGAGATGAGCCTGTTGC
ABO-E3	F：GTCCCAGAACCAAGAGTGA	616
	R：TCCAGAGGTATCCAGGTGA
ABO-E4	F：AAGACCAACATCCCAAGAA	624
	R：GAGCCACAGGAGGAAAGAG
ABO-E5	F：TGCTTACCTGCATCCCACGCT	572
	R：TCAAGGAAACCGCCCTCTAAT
ABO-E6	F：CATTTGCCTCTGGTTGGTTT	522
	R：CTGGAGAAGGAGCTGGGTTT
ABO-E7	F：TCTGCTGCTCTAAGCCTTCC	878
	R：CCCGTTCTGCTAAAACCAAG

样本来源	第1~7号外显子突变位点	调控区变异	基因型
患儿	106G>T,188G>A,189C>T,261delG,297A>G	CBF/NF-Y微卫星区有4个43 bp串联,其中第1个43 bp重复序列中的第nt41位为C,另外3个43 bp重复序列的第nt41位均为G	—
患儿父	261delG,467C>T	无变异	A102/O01
患儿母	106G>T,188G>A,189C>T,220C>T,261delG,297A>G,526C>G,646T>A,657C>T681G>A,703G>A,771C>T,796C>A,803G>C,829G>A,930G>A,1096G>A	无变异	B101/O02

样本来源	第1~7号外显子突变位点	调控区变异	基因型
患儿	106G>T,188G>A,189C>T,261delG,297A>G	CBF/NF-Y微卫星区有4个43 bp串联,其中第1个43 bp重复序列中的第nt41位为C,另外3个43 bp重复序列的第nt41位均为G	—
患儿父	261delG,467C>T	无变异	A102/O01
患儿母	106G>T,188G>A,189C>T,220C>T,261delG,297A>G,526C>G,646T>A,657C>T681G>A,703G>A,771C>T,796C>A,803G>C,829G>A,930G>A,1096G>A	无变异	B101/O02

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