中毒颗粒人工镜检定量方法的建立及临床应用

doi:10.3969/j.issn.1673-8640.2021.012.012

摘要/Abstract

摘要：

目的建立定量检测外周血中性粒细胞中毒颗粒的方法,明确染色因素对中毒颗粒镜下识别的影响,并探讨中毒颗粒在鉴别细菌感染性疾病中的价值。方法建立中毒颗粒人工定量方法,选取5例新鲜静脉全血样本,根据不同染色条件分为5组,计算各组中毒颗粒定量结果,比较各组中毒指数和中毒积分。另分别选取62例细菌感染患者（感染组）和50名体检健康者（正常对照组）的血液样本,制备血涂片,对中性粒细胞中的中毒颗粒程度进行分级,并进行比较。采用受试者工作特征（ROC）曲线评价中毒积分和中毒指数诊断感染性疾病的效能。结果正常对照组中毒指数和中毒积分分别为2.0（1~5）%和2（1~5）分,均明显低于感染组[48.7（22.2~84.5）%和58.0（12.0~131.1）分]（P<0.000 1）。当中毒指数临界值为6%时,诊断细菌感染性疾病的敏感性和特异性分别为88.7%和86.0%;当中毒积分临界值为6分时,敏感性和特异性分别为83.9%和86.0%。结论建立的外周血涂片中毒颗粒人工镜检定量方法可反映患者细菌感染情况,可作为临床判断细菌感染的指标。

关键词: 中毒颗粒, 中性粒细胞, 定量检测, 血涂片, 染色条件, 细菌感染

中图分类号:

R446.11

张文萍, 张仲明, 罗燕婷, 杨燕梅, 余志勇, 曲久鑫. 中毒颗粒人工镜检定量方法的建立及临床应用[J]. 检验医学, 2021, 36(12): 1253-.

图/表 7

表1 染色时间与染色比例选择及血涂片染色数量

染色时间/min	背景偏红（1:18）	正常推荐（2:18）	背景偏蓝（4:18）
1+2（染色较浅）	A组		D组
1+4（正常推荐）		C组
3+8.5（染色较深）	B组		E组

表2 单个中性粒细胞中毒颗粒分级标准

等级	中毒颗粒大小及含量	严重程度	中毒积分/分
0级	细胞质未见中毒颗粒,或中毒颗粒偶见	正常/（-）	0
1级	细胞质中毒颗粒数量较少（≤25%）,散落于细胞质各处	轻度/（+）	1
2级	细胞质中毒颗粒数量较多（25%~50%）,颗粒密度中等	中度/ 2（+）	2
3级	细胞质中毒颗粒以粗颗粒居多（50%~75%）,颗粒密度大	重度/ 3（+）	3
4级	粗大中毒颗粒满布于细胞质（>75%）,颗粒密度很大	极重度/ 4（+）	4

图1 各级含中毒颗粒中性粒细胞显微镜下形态注：（a）0级,未见或偶见中毒颗粒;（b）1级,中毒颗粒数量较少（≤25%）,散落于胞浆各处;（c）2级,中毒颗粒数量较多（25%~50%）,密度中等;（d）3级,中毒颗粒以粗颗粒居多（50%~75%）,密度大;（e）4级,粗大中毒颗粒满布于胞浆（>75%）,密度较大。

图2 不同染色条件下中性粒细胞中毒颗粒着色情况注：（a）A组（1:18-1+2）,由于染液比例较低,且染色时间较短,细胞质与细胞核颜色较浅,中毒颗粒不明显;（b）B组（1:18-3+8.5）,染色时间较A组长,细胞质与细胞核颜色加深,中毒颗粒与细胞质颜色有一定区分度;（c）C组（2:18-1+4）,正常染液比例和染色时间,染料说明书推荐镜检染色方法;（d）D组（4:18-1+2）,染液比例较高,细胞质与细胞核颜色较C组深,颗粒感明显,可能造成中毒颗粒的假阳性;（e）E组（4:18-3+8.5）,染料比例较高,染色时间长,细胞整体深染,容易造成中毒颗粒假阳性判断。

图3 不同染色条件下中毒指数和中毒积分定量结果偏差图注：（a）中毒指数;（b）中毒积分;A组样本中毒颗粒定量结果显著低于C组（参考值）;B组中毒颗粒定量结果偏差不一;C组为正常染色条件（参考值）;D组、E组中毒颗粒定量结果显著高于C组（参考值）; 样本1; 样本2; 样本3; 样本4; 样本5。

图4 中毒指数与中毒积分诊断细菌感染性疾病的ROC曲线注：中毒积分; 中毒指数; 参考线。

图5 中毒指数与中毒积分的相关性注：r2=0.89。

参考文献 15

[1]	黄美琼, 张广清, 葛晶晶, 等. 感染性疾病患儿血清降钙素原、CRP及WBC的变化及临床意义[J]. 国际检验医学杂志, 2015, 36(12):1670-1671.
[2]	杨剑敏, 叶辉, 张泓. CRP和SAA在儿童上呼吸道感染中的鉴别诊断价值[J]. 检验医学, 2016, 31(8):679-680.
[3]	胡型忠, 徐克, 林晓, 等. 中性粒细胞新参数NEUT-X、NEUT-Y在细菌感染中的应用价值研究[J]. 中华医院感染学杂志, 2012, 22(5):1095-1098.
[4]	ZIMMERMANN M, CREMER M, HOFFMANN C, et al. Granularity index of the sysmex XE-5000 hematology analyzer as a replacement for manual microscopy of toxic granulation neutrophils in patients with inflammatory diseases[J]. Clin Chem Lab Med, 2011, 49(7):1193-1198.
[5]	KIM Y S, PARK H H, RHEE H W, et al. Neutrophils with toxic granulation show high fluorescence with bis(Zn²+- dipicolylamine) complex[J]. Ann Clin Lab Sci, 2009, 39(2):114-119.
[6]	AL-GWAIZ L A, BABAY H H. The diagnostic value of absolute neutrophil count,band count and morphologic changes of neutrophils in predicting bacterial infections[J]. Med Princ Pract, 2007, 16(5):344-347. DOI URL
[7]	苏爱月. 血液分析仪检测中性粒细胞分析[J]. 基层医学论坛, 2011, 72(35):1149-1150.
[8]	陈碧, 李绵绵, 王晓欧, 等. 中性粒细胞参数与感染性疾病关系的初步探讨[J]. 中国卫生检验杂志, 2018, 28(17):2126-2127.
[9]	洪骏, 唐海霞, 戴雯, 等. 中性粒细胞中毒颗粒与降钙素原联合检测对细菌性肺炎诊断的意义[J]. 东南国防医药, 2015, 17(2):146-148.
[10]	VAN DE VYVER A, DELPORT E F, ESTERHUIZEN M, et al. The correlation between C-reactive protein and toxic granulation of neutrophils in the peripheral blood[J]. S Afr Med J, 2010, 100(7):442-444. DOI URL
[11]	蔡妍, 章金灿, 杨惠钿, 等. 中性粒细胞中毒颗粒与C反应蛋白的相关性研究[J]. 实用医学杂志, 2013, 29(19):3231-3234.
[12]	刘玉成, 罗春丽. 临床检验基础[M]. 5版. 北京: 人民卫生出版社, 2012.
[13]	牛冬梅, 王锋, 洪骏, 等. 中性粒细胞中毒颗粒与炎症性贫血[J]. 临床检验杂志, 2012, 30(6):440-441.
[14]	LEE H T, PARK P W, SEO Y H, et al. Performance evaluation of Mindray CAL 8000(BC-6800 and SC-120) hematology analyzer and slidemaker/stainer[J]. J Clin Lab Anal, 2017, 31(4):e22065. DOI URL
[15]	李英, 张金花, 费中海, 等. SC-120全自动推片染色机在血细胞形态检查中的应用研究[J]. 国际检验医学杂志, 2019, 40(1):121-124.