某县医院肠球菌临床分离株耐药性及毒力基因携带情况分析

doi:10.3969/j.issn.1673-8640.2020.12.015

摘要/Abstract

摘要：

目的了解三台县人民医院不同种类肠球菌的耐药状况和毒力基因分布特征。方法采用微量肉汤稀释法检测分离自临床样本的485株屎肠球菌和404株粪肠球菌对20种临床常用抗菌药物的耐药性,采用聚合酶链反应（PCR）检测菌株携带esp、acm、ace、hyl、asa1、gelE、cylA、efaA和cpd 9种毒力基因的携带情况。结果屎肠球菌和粪肠球菌耐药率和耐药谱不同,2种肠球菌均检出对万古霉素和利奈唑胺耐药菌株。耐万古霉素屎肠球菌（VREfm）和耐万古霉素粪肠球菌（VREfs）的检出率分别为9.7%（47/485）和1.2%（5/404）,差异有统计学意义（χ²=28.597,P<0.001）。与万古霉素敏感屎肠球菌比较,VREfm毒力基因esp、acm和hyl检出率明显增高,差异有统计学意义（χ²值分别为28.157、 17.391、18.311,P<0.001）。2种万古霉素耐药肠球菌（VRE）毒力基因携带率均较高,且均至少携带2种毒力基因,但两者毒力基因携带率、携带种类和模式差异不显著。结论三台县人民医院肠球菌临床分离株对临床常用抗菌药物的耐药率均较高,且向高毒力进化,屎肠球菌毒力有所增强,应引起医院高度重视。

关键词: 屎肠球菌, 粪肠球菌, 耐药, 耐万古霉素肠球菌, 毒力基因

Abstract:

Objective To understand the drug resistance and virulence distribution characteristics of different kinds of Enterococci isolated from the clinical specimens in Santai People's Hospital of Mianyang City. Methods Microdilution-based drug sensitivity test was used to determine the drug resistance of 485 isolates of Enterococcus faecium and 404 isolates of Enterococcus faecalis to 20 commonly used antibiotics. The 9 virulence genes（esp,acm,ace,hyl,asa1,gelE,cylA,efaA and cpd） of the isolates were detected by polymerase chain reaction（PCR）. Results Enterococcus faecium and Enterococcus faecalis had various levels of drug resistance to the 20 antimicrotics,and vancomycin-resistant Enterococcus and linezolid-resistant Enterococcus were determined. They have different rates and profiles of antimicrobial resistance. The vancomycin-resistant Enterococcus detection rates of the 2 groups were 9.7%（47/485） and 1.2%（5/404）,respectively（χ²=28.597,P<0.001）. Compared with vancomycin-sensitive Enterococcus faecium,the detection rates of virulence genes,esp,acm and hyl,in vancomycin-resistant Enterococcus faecium were higher（χ²=28.157,17.391 and 18.311,P<0.001）. Both VRE had high carrying rates of virulence genes and carried at least 2 virulence genes,but the carrying rates,types and patterns of virulence genes were not different significantly. Conclusions The clinical isolates of Enterococcus have high drug resistance rates to commonly used antibiotics,and have evolved to be highly virulent. The virulence of Enterococcus faecium has increased,and it is necessary for the hospital to attach importance and strengthen measures to prevent and control them.

Key words: Enterococcus faecium, Enterococcus faecalis, Drug resistance, Vancomycin-resistant Enterococcus, Virulence gene

中图分类号:

R378.99

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图/表 6

参考文献 13

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毒力基因	引物序列（5'~3'）	产物长度/bp	退火温度/℃
esp	F：AGATTTCATCTTTGATTCTTGG	510	56
	R：AATTGATTCTTTAGCATCTGG
acm	F：GGCCAGAAACGTAACCGATA	135	53
	R：AACCAGAAGCTGGCTTTGTC
hyl	F：ACAGAAGAGCTGCAGGAAATG	276	58
	R：GACTGACGTCCAAGTTTCCAA
asa1	F：GCACGCTATTACGAACTATGA	375	56
	R：TAAGAAAGAACATCACCACGA
gelE	F：TATGACAATGCTTTTTGGGAT	213	52
	R：AGATGCACCCGAAATAATATA
cylA	F：ACTCGGGGATTGATAGGC	688	56
	R：GCTGCTAAAGCTGCGCTT
efaA	F：CTACTAACACGTCACGAAATG	499	52
	R：CGTGAGAAAGAAATGGAGGA
ace	F：GGAATGACCGAGAACGATGGC	616	55
	R：GCTTGATGTTGGCCTGCTTCCG
cpd	F：TGGTGGGTTATTTTTCAATTC	782	55
	R：TACGGCTCTGGCTTACTA

毒力基因	引物序列（5'~3'）	产物长度/bp	退火温度/℃
esp	F：AGATTTCATCTTTGATTCTTGG	510	56
	R：AATTGATTCTTTAGCATCTGG
acm	F：GGCCAGAAACGTAACCGATA	135	53
	R：AACCAGAAGCTGGCTTTGTC
hyl	F：ACAGAAGAGCTGCAGGAAATG	276	58
	R：GACTGACGTCCAAGTTTCCAA
asa1	F：GCACGCTATTACGAACTATGA	375	56
	R：TAAGAAAGAACATCACCACGA
gelE	F：TATGACAATGCTTTTTGGGAT	213	52
	R：AGATGCACCCGAAATAATATA
cylA	F：ACTCGGGGATTGATAGGC	688	56
	R：GCTGCTAAAGCTGCGCTT
efaA	F：CTACTAACACGTCACGAAATG	499	52
	R：CGTGAGAAAGAAATGGAGGA
ace	F：GGAATGACCGAGAACGATGGC	616	55
	R：GCTTGATGTTGGCCTGCTTCCG
cpd	F：TGGTGGGTTATTTTTCAATTC	782	55
	R：TACGGCTCTGGCTTACTA

抗菌药物	敏感		中介		耐药
抗菌药物	屎肠球菌	粪肠球菌	屎肠球菌	粪肠球菌	屎肠球菌	粪肠球菌
阿莫西林	179（36.9）	376（93.1）	0（0）	0（0）	306（63.1）^*	28（6.9）
氨苄西林	126（26.0）	366（90.6）	8（1.6）	9（2.2）	351（72.4）^*	29（7.2）
氨苄西林-舒巴坦	173（35.7）	370（91.6）	12（2.5）	16（4.0）	300（61.9）^*	18（4.5）
苯唑西林	109（22.5）	48（11.9）	7（1.4）	10（2.5）	369（76.1）^*	346（85.6）
呋喃妥因	209（43.1）	385（95.3）	178（36.7）	16（4.0）	98（20.2）^*	3（0.7）
复方磺胺甲噁唑	290（59.8）	268（66.3）	6（1.2）	11（2.7）	189（39.0）	125（30.9）
高浓度链霉素	343（70.7）	293（72.5）	0（0）	0（0）	142（29.3）	111（27.5）
高浓度庆大霉素	275（56.7）	239（59.2）	0（0）	9（2.2）	210（43.3）	156（38.6）
红霉素	66（13.6）	111（27.5）	23（4.7）	12（3.0）	396（81.6）^*	281（69.6）
环丙沙星	88（18.1）	218（54.0）	21（4.3）	51（12.6）	376（77.5）^*	135（33.4）
克林霉素	170（35.1）	35（8.7）	10（2.1）	3（0.7）	305（62.9）^*	366（90.6）
奎奴普丁-达福普丁	423（87.2）	85（21.0）	36（7.4）	19（4.7）	26（5.4）^*	300（74.3）
利福平	160（33.0）	184（45.5）	46（9.5）	63（15.6）	279（57.5）^*	157（38.9）
利奈唑胺	474（97.7）	397（98.3）	8（1.6）	0（0）	3（0.6）	7（1.7）
莫西沙星	178（36.7）	295（73.0）	23（4.7）	8（2.0）	284（58.6）^*	101（25.0）
青霉素	94（19.4）	337（83.4）	18（3.7）	31（7.7）	373（76.9）^*	36（8.9）
四环素	221（45.6）	104（25.7）	7（1.4）	10（2.5）	257（53.0）^*	290（71.8）
头孢曲松	159（32.8）	111（27.5）	8（1.6）	12（3.0）	318（65.6）	281（69.6）
万古霉素	437（90.1）	400（99.0）	1（0.2）	1（0.2）	47（9.7）^*	5（1.2）
左氧氟沙星	109（22.5）	267（66.1）	23（4.7）	28（6.9）	353（72.8）^*	109（27.0）

抗菌药物	敏感		中介		耐药
抗菌药物	屎肠球菌	粪肠球菌	屎肠球菌	粪肠球菌	屎肠球菌	粪肠球菌
阿莫西林	179（36.9）	376（93.1）	0（0）	0（0）	306（63.1）^*	28（6.9）
氨苄西林	126（26.0）	366（90.6）	8（1.6）	9（2.2）	351（72.4）^*	29（7.2）
氨苄西林-舒巴坦	173（35.7）	370（91.6）	12（2.5）	16（4.0）	300（61.9）^*	18（4.5）
苯唑西林	109（22.5）	48（11.9）	7（1.4）	10（2.5）	369（76.1）^*	346（85.6）
呋喃妥因	209（43.1）	385（95.3）	178（36.7）	16（4.0）	98（20.2）^*	3（0.7）
复方磺胺甲噁唑	290（59.8）	268（66.3）	6（1.2）	11（2.7）	189（39.0）	125（30.9）
高浓度链霉素	343（70.7）	293（72.5）	0（0）	0（0）	142（29.3）	111（27.5）
高浓度庆大霉素	275（56.7）	239（59.2）	0（0）	9（2.2）	210（43.3）	156（38.6）
红霉素	66（13.6）	111（27.5）	23（4.7）	12（3.0）	396（81.6）^*	281（69.6）
环丙沙星	88（18.1）	218（54.0）	21（4.3）	51（12.6）	376（77.5）^*	135（33.4）
克林霉素	170（35.1）	35（8.7）	10（2.1）	3（0.7）	305（62.9）^*	366（90.6）
奎奴普丁-达福普丁	423（87.2）	85（21.0）	36（7.4）	19（4.7）	26（5.4）^*	300（74.3）
利福平	160（33.0）	184（45.5）	46（9.5）	63（15.6）	279（57.5）^*	157（38.9）
利奈唑胺	474（97.7）	397（98.3）	8（1.6）	0（0）	3（0.6）	7（1.7）
莫西沙星	178（36.7）	295（73.0）	23（4.7）	8（2.0）	284（58.6）^*	101（25.0）
青霉素	94（19.4）	337（83.4）	18（3.7）	31（7.7）	373（76.9）^*	36（8.9）
四环素	221（45.6）	104（25.7）	7（1.4）	10（2.5）	257（53.0）^*	290（71.8）
头孢曲松	159（32.8）	111（27.5）	8（1.6）	12（3.0）	318（65.6）	281（69.6）
万古霉素	437（90.1）	400（99.0）	1（0.2）	1（0.2）	47（9.7）^*	5（1.2）
左氧氟沙星	109（22.5）	267（66.1）	23（4.7）	28（6.9）	353（72.8）^*	109（27.0）

抗菌药物	敏感		中介		耐药
抗菌药物	屎肠球菌	粪肠球菌	屎肠球菌	粪肠球菌	屎肠球菌	粪肠球菌
青霉素	1（2.1）	3（60）	0（0）	0（0）	46（97.9）	2（40）
氨苄西林	1（2.1）	2（40）	0（0）	0（0）	46（97.9）	3（60）
高浓度庆大霉素	21（44.7）	5（100）	0（0）	0（0）	26（55.3）	0（0）
高浓度链霉素	41（87.2）	5（100）	0（0）	0（0）	6（12.8）	0（0）
环丙沙星	1（2.1）	4（80）	0（0）	0（0）	46（97.9）	1（20）
左氧氟沙星	1（2.1）	4（80）	0（0）	0（0）	46（97.9）	1（20）
红霉素	1（2.1）	1（20）	0（0）	1（20）	46（97.9）	3（60）
克林霉素	1（2.1）	1（20）	0（0）	0（0）	46（97.9）	4（80）
奎奴普丁-达福普丁	46（97.9）	0（0）	1（2.1）	1（20）	0（0）	4（80）
利奈唑胺	46（97.9）	2（33.3）	0（0）	3（60）	1（2.1）	0（0）
四环素	38（80.9）	3（33.3）	0（0）	1（20）	9（19.1）	1（20）
替加环素	47（100）	5（100）	0（0）	0（0）	0（0）	0（0）
呋喃妥因	2（4.3）	5（100）	35（47.4）	0（0）	10（23.3）	0（0）