焦磷酸测序检测分析BRAF基因突变方法的建立

doi:10.3969/j.issn.1673-8640.2018.12.016

检验医学 ›› 2018, Vol. 33 ›› Issue (12): 1127-1131.DOI: 10.3969/j.issn.1673-8640.2018.12.016

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焦磷酸测序检测分析BRAF基因突变方法的建立

周钢¹, 钟焱²

1. 中南大学湘雅医院临床药理研究所,湖南长沙 410078
2. 长江卫生职业学院,湖南长沙 410100

收稿日期:2017-11-17 出版日期:2018-12-26 发布日期:2018-12-27
作者简介:null
作者简介：周钢,男,1973年生,硕士,实验师,主要从事肿瘤遗传学、药理学研究。

Pyro-sequencing analysis for the detection of BRAF gene mutation

ZHOU Gang¹, ZHONG Yan²

1. Department of Clinical Pharmacology,Xiangya Hospital,Central South University,Changsha 410078,Hunan,China
2. Changsha Health Vocational College,Changsha 410100,Hunan,China

Received:2017-11-17 Online:2018-12-26 Published:2018-12-27

摘要/Abstract

摘要：

目的建立鼠类肉瘤病毒癌基因同源物B1（BRAF）基因V600E（T>A）突变位点的焦磷酸测序（PYRO）方法。方法提取100例结直肠癌患者的gDNA,采用Qigene pyro24 测序仪进行BRAF基因的PYRO,并通过重复性试验和Sanger测序法验证方法的正确性。结果建立了BRAF基因V600E突变位点的PYRO方法,经重复性试验和Sanger测序验证,结果准确可靠,100例结直肠癌患者的标本中共检测出6例有基因突变。结论建立的BRAF基因突变的PYRO方法具有快速、简便、灵敏度和准确性高的优点,适用于科研和临床批量检测。

关键词: 焦磷酸测序, 鼠类肉瘤病毒癌基因同源物B1, 结直肠癌, 基因突变

Abstract:

Objective To establish a pyro-sequencing analysis（PYRO） for the detection of V-raf murine sarcoma viral oncogene homolog B1（BRAF） gene mutation.Methods The gDNA was extracred from 100 colorectal cancer patients'tissue samples. PYRO BRAF for gene was performed through Qigene pyro24. The accuracy was validated by repeat test and Sanger sequencing.Results The PYRO for the detection of BRAF gene mutation was established. Repeat test and Sanger sequencing showed that the accuracy and reliability were good. The detected gene mutation in 100 colorectal cancer patients' tissue samples accounted for 6%.Conclusions The established PYRO for the detection of BRAF gene mutation is rapid,simple,sensitive and accurate.

Key words: Pyro-sequencing, V-raf murine sarcoma viral oncogene homolog B1, Colorectal cancer, Gene mutation

中图分类号:

R446.1

周钢, 钟焱. 焦磷酸测序检测分析BRAF基因突变方法的建立[J]. 检验医学, 2018, 33(12): 1127-1131.

ZHOU Gang, ZHONG Yan. Pyro-sequencing analysis for the detection of BRAF gene mutation[J]. Laboratory Medicine, 2018, 33(12): 1127-1131.

图/表 4

参考文献 14

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引物	引物名称	引物序列（5'~3'）
PCR扩增引物	BrafPyro F	TCCTTTACTTACTACACCTCA
5'生物素标记的PCR扩增引物	BrafPyorBioR	TCCAGACAACTGTTCAAA
PYRO引物	Braf pyroS	GTGATTTTGGTCTAGC

引物	引物名称	引物序列（5'~3'）
PCR扩增引物	BrafPyro F	TCCTTTACTTACTACACCTCA
5'生物素标记的PCR扩增引物	BrafPyorBioR	TCCAGACAACTGTTCAAA
PYRO引物	Braf pyroS	GTGATTTTGGTCTAGC

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Pyro-sequencing analysis for the detection of BRAF gene mutation

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