铜绿假单胞菌16S rRNA甲基化酶基因和氨基糖苷修饰酶基因的研究

doi:10.3969/j.issn.1673-8640.2015.06.017

检验医学 ›› 2015, Vol. 30 ›› Issue (6): 613-616.DOI: 10.3969/j.issn.1673-8640.2015.06.017

铜绿假单胞菌16S rRNA甲基化酶基因和氨基糖苷修饰酶基因的研究

彭敬红¹, 侯彦强¹, 谢多双², 刘军¹, 郑蓉³

1. 上海交通大学附属第一人民医院松江分院检验科,上海 201600
2. 湖北医药学院附属太和医院院感科,湖北十堰 442000
3. 湖北医药学院附属太和医院妇科,湖北十堰 442000

收稿日期:2014-08-07 出版日期:2015-06-30 发布日期:2015-07-03
作者简介:null
作者简介:彭敬红,女,1968年生,博士,副主任技师,主要从事微生物检验和细菌耐药机制研究。

通讯作者:郑蓉,联系电话:0719-8801880。
基金资助:
湖北省教育厅重点课题资助项目(D20112106);上海市松江区科学技术攻关项目(13SJGGYY17)

Studies of 16S rRNA methylase gene and aminoglycoside modifying enzyme gene in Pseudomonas aeruginosa

PENG Jinghong¹, HOU Yanqiang¹, XIE Duoshuang², LIU Jun¹, ZHENG Rong³

1. Department of Clinical Laboratory, Songjiang Branch, the First People's Hospital Affiliated to Shanghai Jiaotong University, Shanghai 201600, China
2. Department of Nosocomial Infection Control, Taihe Hospital, Hubei University of Medicine, Hubei Shiyan 442000, China
3. Department of Gynecology, Taihe Hospital, Hubei University of Medicine, Hubei Shiyan 442000, China

Received:2014-08-07 Online:2015-06-30 Published:2015-07-03

摘要/Abstract

摘要： 目的

了解氨基糖苷类抗菌药物耐药的铜绿假单胞菌16S rRNA甲基化酶基因和氨基糖苷修饰酶基因的携带情况,探讨铜绿假单胞菌对氨基糖苷类药物的耐药机制。

方法

收集临床分离的氨基糖苷类抗菌药物耐药的铜绿假单胞菌35株,采用VITEK 2 Compact 全自动微生物分析系统进行鉴定及体外药物敏感性试验,聚合酶链反应(PCR)检测arm-A、rmt-A、rmt-B、rmt-C、rmt-D 5种16S rRNA甲基化酶基因和aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6')-Ⅰb、aac(6')-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ 6种氨基糖苷修饰酶基因。

结果

对氨基糖苷类药物耐药的铜绿假单胞菌同时对多种其他抗菌药物耐药,仅碳青霉烯类的亚胺培南耐药率较低,为5.7%。21 株检出rmt-B 16S rRNA甲基化酶基因,占60.0%;30株检出氨基糖苷修饰酶基因,占85.7%,其中28 株检出aac(3)-Ⅱ基因,占80.0%,18株检出ant(3″)-Ⅰ基因,占51.4%,其余8种基因未检出。

结论

在铜绿假单胞菌对氨基糖苷类抗菌药物耐药的菌株中,检测出rmt-B 16S rRNA甲基化酶基因和aac(3)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ氨基糖苷修饰酶基因,铜绿假单胞菌多重耐药现象严重。

关键词: 铜绿假单胞菌, 16S rRNA甲基化酶基因, 氨基糖苷修饰酶基因, 耐药性

Abstract: Objective

To investigate 16S rRNA methylase gene and aminoglycoside modifying enzyme gene in aminoglycoside-resistant clinical isolates of Pseudomonas aeruginosa, and to investigate the mechanism of drug resistance to aminoglycosides.

Methods

A total of 35 isolates of aminoglycoside-resistant clinical isolates of Pseudomonas aeruginosa were collected, and the identification and susceptibility testing in vitro were performed by VITEK 2 Compact automatic microbial analysis system. Five kinds of 16S rRNA methylase genes(arm-A, rmt-A, rmt-B, rmt-C and rmt-D) and 6 kinds of aminoglycoside modifying enzyme genes [aac(3)-Ⅰ, aac(3)-Ⅱ, aac (6')-Ⅰb, aac(6')-Ⅱ, ant (3″)-Ⅰand ant (2″)-Ⅰ] were detected by polymerase chain reaction (PCR).

Results

Aminoglycoside-resistant Pseudomonas aeruginosa showed being multi-drug resistant to a variety of antibiotics. Only the resistance rate to imipenem was low (5.7%). There were 21 isolates of Pseudomonas aeruginosa carried rmt-B 16S rRNA methylase gene, accounting for 60.0%, and 30 isolates of Pseudomonas aeruginosa carried aminoglycoside modifying enzyme genes, accounting for 85.7%, among them, 28 isolates carried aac(3)-Ⅱ aminoglycoside modifying enzyme genes, accounting for 80.0%, and 18 isolates carried ant (3″)-Ⅰ aminoglycoside modifying enzyme genes, accounting for 51.4%. The other 8 isolates were not detected any genes.

Conclusions

Aminoglycoside-resistant isolates of Pseudomonas aeruginosa carry rmt-B 16S rRNA methylase gene and aac(3)-Ⅱ and ant (3″)-Ⅰ aminoglycoside modifying enzyme genes. Furthermore, the multi-drug resistances of Pseudomonas aeruginosa are serious.

Key words: Pseudomonas aeruginosa, 16S rRNA methylase gene, Aminoglycoside modifying enzyme gene, Drug resistance

中图分类号:

R378.99

彭敬红, 侯彦强, 谢多双, 刘军, 郑蓉. 铜绿假单胞菌16S rRNA甲基化酶基因和氨基糖苷修饰酶基因的研究[J]. 检验医学, 2015, 30(6): 613-616.

PENG Jinghong, HOU Yanqiang, XIE Duoshuang, LIU Jun, ZHENG Rong. Studies of 16S rRNA methylase gene and aminoglycoside modifying enzyme gene in Pseudomonas aeruginosa[J]. Laboratory Medicine, 2015, 30(6): 613-616.

图/表 3

参考文献 13

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基因名称	引物序列	产物长度 (bp)
aac(3)-Ⅰ	P1:ACCTACTCCCAACATCAGCC P2:ATATAGATCTCACTACGCGC	169
aac(3)-Ⅱ	P1:ACTGTGATGGGATACGCGTC P2:CTCCGTCAGCGTTTCAGCTA	237
aac(6')-Ⅰb	P1:ATGACTGAGCATGACCTTGC P2:TTAGGCATCACTGCGTGTTC	519
aac(6')-Ⅱ	P1:TTCATGTCCGCGAGCACCCC P2:GACTCTTCCGCCATCGCTCT	178
ant(3″)-Ⅰ	P1:TGATTTGCTGGTTACGGTGAC P2:CGCTATGTTCTCTTGCTTTTG	284
ant(2″)-Ⅰ	P1:GAGCGAAATCTGCCGCTCTGG P2:CTGTTACAACGGACTGGCCGC	320
arm-A	P1:ATGGATAAGAATGATGTTGTTAAG P2:TTATTTCTGAAATCCACTAGTAATTA	774
rmt-A	P1:CCTAGCGTCCATCCTTTCCTC P2:AGCGATATCCAACACACGATGG	315
rmt-B	P1:ATGAACATCAACGATGCCCTC P2:TTATCCATTCTTTTTTATCAAGTATAT	756
rmt-C	P1:ATGAAAACCAACGATAATTATC P2:TTACAATCTCGATACGATAAAATAC	846
rmt-D	P1:ATGAGCGAACTGAAGGAAAAACTGCT P2:TCATTTTCGTTTCAGCACGTAAAACAG	744

基因名称	引物序列	产物长度 (bp)
aac(3)-Ⅰ	P1:ACCTACTCCCAACATCAGCC P2:ATATAGATCTCACTACGCGC	169
aac(3)-Ⅱ	P1:ACTGTGATGGGATACGCGTC P2:CTCCGTCAGCGTTTCAGCTA	237
aac(6')-Ⅰb	P1:ATGACTGAGCATGACCTTGC P2:TTAGGCATCACTGCGTGTTC	519
aac(6')-Ⅱ	P1:TTCATGTCCGCGAGCACCCC P2:GACTCTTCCGCCATCGCTCT	178
ant(3″)-Ⅰ	P1:TGATTTGCTGGTTACGGTGAC P2:CGCTATGTTCTCTTGCTTTTG	284
ant(2″)-Ⅰ	P1:GAGCGAAATCTGCCGCTCTGG P2:CTGTTACAACGGACTGGCCGC	320
arm-A	P1:ATGGATAAGAATGATGTTGTTAAG P2:TTATTTCTGAAATCCACTAGTAATTA	774
rmt-A	P1:CCTAGCGTCCATCCTTTCCTC P2:AGCGATATCCAACACACGATGG	315
rmt-B	P1:ATGAACATCAACGATGCCCTC P2:TTATCCATTCTTTTTTATCAAGTATAT	756
rmt-C	P1:ATGAAAACCAACGATAATTATC P2:TTACAATCTCGATACGATAAAATAC	846
rmt-D	P1:ATGAGCGAACTGAAGGAAAAACTGCT P2:TCATTTTCGTTTCAGCACGTAAAACAG	744

抗菌药物	耐药率	中介率	敏感率
氨苄西林	100.0	0.0	0.0
氨苄西林-舒巴坦	100.0	0.0	0.0
哌拉西林-他唑巴坦	65.7	0.0	34.3
头孢唑啉	100.0	0.0	0.0
头孢替坦	97.1	0.0	2.9
头孢他啶	80.0	2.9	17.1
头孢曲松	100.0	0.0	0.0
头孢吡肟	34.3	57.1	8.6
氨曲南	51.5	31.4	17.1
亚胺培南	5.7	2.9	91.4
阿米卡星	97.1	0.0	2.9
庆大霉素	100.0	0.0	0.0
妥布霉素	100.0	0.0	0.0
环丙沙星	82.9	14.2	2.9
左氧氟沙星	82.9	5.7	11.4
复方磺胺甲噁唑	97.1	0.0	2.9

抗菌药物	耐药率	中介率	敏感率
氨苄西林	100.0	0.0	0.0
氨苄西林-舒巴坦	100.0	0.0	0.0
哌拉西林-他唑巴坦	65.7	0.0	34.3
头孢唑啉	100.0	0.0	0.0
头孢替坦	97.1	0.0	2.9
头孢他啶	80.0	2.9	17.1
头孢曲松	100.0	0.0	0.0
头孢吡肟	34.3	57.1	8.6
氨曲南	51.5	31.4	17.1
亚胺培南	5.7	2.9	91.4
阿米卡星	97.1	0.0	2.9
庆大霉素	100.0	0.0	0.0
妥布霉素	100.0	0.0	0.0
环丙沙星	82.9	14.2	2.9
左氧氟沙星	82.9	5.7	11.4
复方磺胺甲噁唑	97.1	0.0	2.9

模式	耐药基因			株数	构成比 (%)
模式	aac(3)-Ⅱ			ant(3″)-Ⅰ	rmt-B
1	+	+	+	11	31.4
2	+	-	+	8	22.9
3	+	+	-	5	14.3
4	+	-	-	4	11.4
5	-	+	+	2	5.7
6	-	-	-	5	14.3

铜绿假单胞菌16S rRNA甲基化酶基因和氨基糖苷修饰酶基因的研究

Studies of 16S rRNA methylase gene and aminoglycoside modifying enzyme gene in Pseudomonas aeruginosa

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