RP-HPLC-荧光法测定大鼠海马组织中5种氨基酸类神经递质

doi:10.3969/j.issn.1673-8640.2014.01.017

检验医学 ›› 2014, Vol. 29 ›› Issue (1): 69-72.DOI: 10.3969/j.issn.1673-8640.2014.01.017

RP-HPLC-荧光法测定大鼠海马组织中5种氨基酸类神经递质

白钰¹, 张莉², 马晓丽³, 孔彬³, 李新霞³, 李新宇⁴

1.新疆医科大学附属中医医院, 新疆乌鲁木齐 830011;
2.石河子大学医学院, 新疆石河子 832002;
3.新疆医科大学分析测试中心, 新疆乌鲁木齐 830011;
4.兰州军区乌鲁木齐总医院, 新疆乌鲁木齐 830011

收稿日期:2013-04-27 出版日期:2014-01-20 发布日期:2014-01-20
通讯作者: 李新宇, 联系电话:0991-4365034。
作者简介:白钰, 女, 1978年生, 硕士, 主治医师, 主要从事中医内科神经药理研究。
基金资助:
国家自然科学基金资助项目(81260144);天普基金资助项目(01201040)

The determination of 5 amino acid neurotransmitters in hippocampus of rats by RP-HPLC with fluorescence detector

BAI Yu¹, ZHANG Li², MA Xiaoli³, KONG Bin³, LI Xinxia³, LI Xinyu⁴.

1.Traditional Chinese Medicine Hospital of Xinjiang Medical University, Xinjiang Urmqi 830011, China; 2. Shihezi University School of Medicine, Xinjiang Shihezi 832002, China; 3. Analytic and Testing Center of Xinjiang Medical University, Xinjiang Urmqi 830011, China; 4. Lanzhou Military Region Urmqi General Hospital, Xinjiang Urmqi 830011, China

Received:2013-04-27 Online:2014-01-20 Published:2014-01-20

摘要/Abstract

摘要： 目的采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)-荧光检测技术建立一种用于测定脑海马组织中5种氨基酸[天门冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、天冬酰胺(Aspa)、谷胺酰胺(Gln)、甘氨酸(Gly)]类神经递质的方法。方法采用甲醇∶水＝1∶1提取大鼠脑海马组织中多种氨基酸类神经递质。用6-氨基喹啉基-N-羟基-琥珀酰亚胺氨基甲酸酯(AQC)柱前衍生RP-HPLC-荧光法测定海马组织中Asp、Glu、Aspa、Gln、Gly含量。结果 5种氨基酸类神经递质在15 min内完全分离, 分离效果良好;在0.5～100.0 μg/μL范围有较好的线性关系, 相关系数(r)≥0.999 90;Asp、Glu、Aspa、Gln、Gly的检出限分别为0.05、0.068、0.037、0.05、0.02 μg/μL。精密度[相对标准偏差(RSD)]为0.4%～2.5%, 加样回收率为70.27％～128.20％, RSD均＜5%;8只正常大鼠海马组织中Asp、Glu、Aspa、Gln、Gly含量分别为38.98±9.66、126.42±34.06、216.00±0.75、90.44±33.75、(12.95±4.42)μg/g。结果 RP-HPLC-荧光法快速、准确、灵敏度高, 适用于脑组织中氨基酸类神经递质含量的测定。

关键词: 氨基酸, 神经递质, 高效液相色谱, 柱前衍生

Abstract: Objective To establish a method of reverse phase high performance liquid chromatography(RP-HPLC) with fluorescence detector to determine 5 amino acid [aspartate (Asp), glutamate(Glu), asparagine (Aspa), glutamine (Gln) and glycine (Gly)] neurotransmitters. Methods The amino acid neurotransmitters in hippocampus of rats were collected by methanol: water=1∶1. The RP-HPLC with fluorescence detector with 6-aminoquinolyl-N-hydroxysuccinimidyl carbamate (AQC) pre-column derivatization was used to measure the 5 amino acid neurotransmitters in hippocampus of rats. Results The 5 amino acid neurotransmitters were well and completely separated using elution within 15 min. There was a good linear correlation in the range of 0.5-100.0 μg/μL, and the correlation coefficient (r) was≥0. 999 90. The detection limits of Asp, Glu, Aspa, Gln and Gly were 0.05, 0.068, 0.037, 0.05 and 0.02 μg/μL. The precisions [relative standard deviation(RSD)] were 0.4%-2.5%. The recoveries of added amino acids were 70.27%-128.20%(RSD<5%).The contents of Asp, Glu, Aspa, Gln and Gly in hippocampus of normal rats were 38.98±9.66, 126.42±34.06, 216.00±0.75, 90.44±33.75 and (12.95±4.42) μg/g. Results RP-HPLC with fluorescence detector is quick, reliable and sensitive to measure the amino acid neurotransmitters in hippocampus of rats.

Key words: Amino acid, Neurotransmitter, High performance liquid chromatography, Pre-column derivatization

中图分类号:

Q517

白钰, 张莉, 马晓丽, 孔彬, 李新霞, 李新宇. RP-HPLC-荧光法测定大鼠海马组织中5种氨基酸类神经递质[J]. 检验医学, 2014, 29(1): 69-72.

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