瞬时受体电位通道5时间分辨荧光免疫分析法的建立和验证

doi:10.3969/j.issn.1673-8640.2018.05.017

检验医学 ›› 2018, Vol. 33 ›› Issue (5): 447-451.DOI: 10.3969/j.issn.1673-8640.2018.05.017

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瞬时受体电位通道5时间分辨荧光免疫分析法的建立和验证

陆扬帆¹, 黄飚², 马鑫¹

1.江南大学药学院,江苏无锡 214000
2.江苏省原子医学研究所,江苏无锡 214063

收稿日期:2017-05-15 出版日期:2018-05-20 发布日期:2018-05-30
作者简介:null
作者简介：陆扬帆,女,1992年生,硕士,主要从事乳腺癌化疗耐药研究。

通信作者：马鑫,联系电话：0510-85914599。
基金资助:
国家高技术研究发展计划（863计划）（2015AA020948）

Establishment and validation of a time-resolved fluoroimmunoassay for transient receptor potential channel 5

LU Yangfan¹, HUANG Biao², MA Xin¹

1. School of Pharmaceutical Sciences,Jiangnan University,Wuxi 214000,Jiangsu,China
2. Jiangsu Institute of Nuclear Medicine,Wuxi 214063,Jiangsu,China

Received:2017-05-15 Online:2018-05-20 Published:2018-05-30

摘要/Abstract

摘要：

目的以瞬时受体电位通道5（TRPC5）作为乳腺癌肿瘤耐药标志物,建立乳腺癌耐药体外诊断方法。方法采用时间分辨荧光技术建立TRPC5时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA）,以TRPC5-血蓝蛋白（KLH）为免疫原免疫新西兰大白兔制备抗TRPC5抗体;黏蛋白（MUC1）抗体包被免疫磁珠处理样本;TRPC5多肽包被96孔板为固相抗原,与游离TRPC5共同竞争有限的抗TRPC5抗体;用Eu³⁺-羊抗兔抗体进行示踪。结果 TRPC5 TRFIA的敏感性为1 ng/mL,精确度测量范围为5~500 ng/mL,各孔计数值变异系数（CV）为5.5%,平均回收率为94.6%,运用TRFIA检测,3个效应点检测值ED80、ED50、ED20分别为（4.68±0.13）、（321.66±2.77）和（714.42±4.07）ng/mL,经过临床样本检测发现化疗耐药患者的样本检测结果与化疗耐受尚可患者相比,差异有统计学意义（P<0.000 1）。结论 TRPC5 TRFIA可对乳腺癌化疗耐药及化疗尚可患者进行区分,具有临床应用意义,值得进一步研究。

关键词: 瞬时受体电位通道5, 时间分辨荧光免疫分析法, 乳腺癌, 化疗耐药

Abstract:

Objective Transient receptor potential channel 5（TRPC5） can be as a marker of breast cancer drug resistance. To establish a method for the diagnosis of breast cancer in vitro drug resistance. Methods Time-resolved fluoroimmunoassay（TRFIA）was established for TRPC5. Anti-TRPC5 antibody was prepared by immunizing New Zealand white rabbits with TRPC5-keyhole limpet hemocyanin （KLH） as an immunogen. Mucin 1 （MUC1） antibody coated immunomagnetic beads to process samples. TRPC5 peptides, coated with 96-well plates as solid-phase antigens, competed with free TRPC5 antigen. Eu³⁺-goat anti-rabbit antibody was used as a tracer. Results The sensitivity was 1 ng/mL for TRPC5 TRFIA. The range was 5-500 ng/mL. The coefficient of variation（CV）was 5.5%. The mean recovery rate was 94.6%. The ED80,ED50 and ED20 of TRFIA were（4.68±0.13）,（321.66±2.77） and （714.42±4.07）ng/mL,respectively. There was statistical significance for the results of chemotherapy-resistant patients and chemotherapy-tolerant patients（P<0.000 1）. Conclusions TRPC5 TRFIA has a certain degree of differentiation between breast cancer chemotherapy resistance or not. It has clinical significance and is worth further study.

Key words: Transient receptor potential channel 5, Time-resolved fluoroimmunoassay, Breast cancer, Chemotherapy resistance

中图分类号:

R446.61

陆扬帆, 黄飚, 马鑫. 瞬时受体电位通道5时间分辨荧光免疫分析法的建立和验证[J]. 检验医学, 2018, 33(5): 447-451.

LU Yangfan, HUANG Biao, MA Xin. Establishment and validation of a time-resolved fluoroimmunoassay for transient receptor potential channel 5[J]. Laboratory Medicine, 2018, 33(5): 447-451.

图/表 8

参考文献 11

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组别	1	2	3	4	5	6	x	CV（%）
1	1 047 562	1 028 169	1 121 664	1 135 837	1 056 903	1 005 637	1 065 962	4.9
2	1 163 358	1 151 077	1 177 126	1 120 490	1 124 884	1 240 175	1 162 851	3.8
3	1 121 710	1 106 639	1 105 110	1 072 046	1 058 466	1 147 603	1 101 929	3.0
4	1 084 164	1 182 513	1 183 555	1 203 036	1 183 232	1 214 754	1 175 209	4.1
x				1 126 488
CV（%）				5.5

组别	1	2	3	4	5	6	x	CV（%）
1	1 047 562	1 028 169	1 121 664	1 135 837	1 056 903	1 005 637	1 065 962	4.9
2	1 163 358	1 151 077	1 177 126	1 120 490	1 124 884	1 240 175	1 162 851	3.8
3	1 121 710	1 106 639	1 105 110	1 072 046	1 058 466	1 147 603	1 101 929	3.0
4	1 084 164	1 182 513	1 183 555	1 203 036	1 183 232	1 214 754	1 175 209	4.1
x				1 126 488
CV（%）				5.5

样本	TRPC5 添加量（ng/mL）	TRPC5 TRFIA测量值（ng/mL）	TRPC5 TRFIA测定回收率（%）
1	10	11.01	110.12
2	50	47.28	94.57
3	100	85.51	85.51
4	500	466.48	93.30
5	800	716.57	89.57

样本	TRPC5 添加量（ng/mL）	TRPC5 TRFIA测量值（ng/mL）	TRPC5 TRFIA测定回收率（%）
1	10	11.01	110.12
2	50	47.28	94.57
3	100	85.51	85.51
4	500	466.48	93.30
5	800	716.57	89.57

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瞬时受体电位通道5时间分辨荧光免疫分析法的建立和验证

Establishment and validation of a time-resolved fluoroimmunoassay for transient receptor potential channel 5

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