检验医学 ›› 2006, Vol. 21 ›› Issue (06): 633-636.
张莉君%王先良%张迟%孙晞%徐顺清
ZHANG Lijun%WANG Xianliang%ZHANG Chi%SUN Xi%XU Shunqing
摘要： 目的 改进聚合酶链反应(PCR),并检验改进后的方法在甲基化检测中的可行性.方法 培养人乳腺癌细胞株MCF-7,提取基因组DNA,利用亚硫酸氢盐测序法,用常规、降落及改进PCR分别扩增,比较扩增效果,PCR产物纯化回收后,TA克隆入载体pGEM-T,转化大肠杆菌(E.coli DH5α),筛选阳性克隆,经PCR扩增鉴定后获得阳性重组质粒,测序比对.结果 改进后PCR与常规、降落PCR相比,扩增效率增高,二聚体及非特异性扩增减少;测序结果显示,MCF-7细胞基因组DNA中,RASSFlA基因启动子CpG岛是高甲基化的,E-cadherin基因启动子CpG岛未呈现高甲基化状态.结论 改进后方法提高了以PCR为基础的甲基化分析的可行性,更适用于基因甲基化状态的检测,并为扩增富含CG的基因启动子区域提供参考.
中图分类号:
