改变退火温度对甲基特异性PCR检验指标有效性的影响

检验医学 ›› 2006, Vol. 21 ›› Issue (06): 629-632.

改变退火温度对甲基特异性PCR检验指标有效性的影响

WANG Nannan%王楠楠%李智%于永春%赵敏%段建敏

同济大学附属第十人民医院检验科,上海,200072%兰州大学第二附属医院泌尿外科,甘肃,兰州,730000

收稿日期:2006-06-01 出版日期:2006-06-01 发布日期:2006-06-01
通讯作者: WANG Nannan

The influence on clinical values by optimizing the annealing-temperature of methylation specific PCR

Received:2006-06-01 Online:2006-06-01 Published:2006-06-01

摘要/Abstract

摘要： 目的探讨改变退火温度对甲基特异性聚合酶链反应PCR检验指标有效性的影响.方法将经测序证实的RASSF1A甲基化标本分别作为完全甲基化(100%M)和完全未甲基化的标本(0%M),按1∶3体积比例混合,作梯度PCR扩增,摸索适当的退火温度.选取单一电泳条带的温度为优化的退火温度,并以这些温度检测70例标本[35对,以同一患者的肿瘤组织(K)、癌旁组织(N)为1对],比较其在各温度情况时的扩增效果.结果以上指标依年龄(70岁以上/70岁以下)不同出现不同的变化趋热;似然比分析数值均介于0.1～10之间;70岁以下组阳性预测值大多＞70岁以上组;若定义64℃以上温度为高温段,63.3℃以下温度为低温段,则低温段70岁以下组阴性预测值＞70岁以上组,高温段70岁以上组＞70岁以下组.结论与普通PCR类似,甲基特异性PCR可以通过调整退火温度来改变其检测效能,但温度变化间隔最好不要＜1℃;应用甲基特异性PCR检测RASSF1A甲基化可以作为膀胱肿瘤早期诊断的辅助方法,在较低年龄组的应用价值高于高年龄组,尤其是在排除肿瘤方面.

关键词: DNA甲基化, 聚合酶链反应, 甲基特异性, 预测值, 似然比

中图分类号:

Q503

WANG Nannan;王楠楠;李智;于永春;赵敏;段建敏. 改变退火温度对甲基特异性PCR检验指标有效性的影响[J]. 检验医学, 2006, 21(06): 629-632.

[1]	石迎迎, 潘芬, 孙燕, 王春, 蒋婕, 于方圆, 张天栋, 秦惠宏, 张泓. 巢式多重聚合酶链反应快速诊断儿童脑膜炎/脑炎[J]. 检验医学, 2023, 38(8): 766-770.
[2]	杜晶辉, 贺鑫, 刘晶, 刘瑞岩, 鲍志军, 王俊, 赵岩, 雷曜荣, 刘旻, 刘旭. 新型冠状病毒核酸检测7种振荡混匀方法效果评价[J]. 检验医学, 2023, 38(7): 680-685.
[3]	高锋. 新型肿瘤标志物的临床应用——前景与挑战[J]. 检验医学, 2023, 38(4): 303-306.
[4]	代芳芳, 鲁辛辛, 于艳华, 陈铭, 孙桂珍. HIV/AIDS患者分枝杆菌检出情况分析[J]. 检验医学, 2023, 38(12): 1173-1176.
[5]	徐琪, 潘芬, 孙燕, 石迎迎, 于方圆, 张泓. 肠道定植CRE筛查技术方法学评价[J]. 检验医学, 2022, 37(8): 761-765.
[6]	王筱雨, 色米热·艾尼瓦尔, 李士军. 样本状态对血浆EB病毒DNA检测结果准确性的影响[J]. 检验医学, 2022, 37(7): 615-617.
[7]	万长春, 杨辉, 庄学伟. PCR结合熔解曲线在高血压药物相关基因突变检测中的应用[J]. 检验医学, 2022, 37(7): 646-651.
[8]	陈晗璐, 吴盛海. 血培养阴性血流感染影响因素及实验室检测研究进展[J]. 检验医学, 2022, 37(7): 688-694.
[9]	孙雷, 龙驹, 樊祖茜, 吴素萍, 林桂先, 凌秀明. 双重相对定量SD-qPCR在快速诊断性染色体变异中的应用[J]. 检验医学, 2022, 37(6): 557-560.
[10]	刘文霞, 王玮, 林松洋, 李振红. 不同增强剂对荧光PCR中尿素、血红素和胆酸盐抑制作用消除效果研究[J]. 检验医学, 2022, 37(2): 155-158.
[11]	范瑾, 乔昀, 程斌. 育龄期滴虫性阴道炎患者阴道微生物群分布[J]. 检验医学, 2022, 37(12): 1187-1189.
[12]	李仁强, 罗俊峰, 陈云弟. α-地中海贫血和β-地中海贫血基因突变异尾双链荧光探针杂交法的建立及应用评价[J]. 检验医学, 2022, 37(10): 955-962.
[13]	姚锂凤, 郑巧平, 杨蒙, 罗清琼, 陈旭, 陈福祥. 胶体金免疫层析法快速检测CRE碳青霉烯酶效果评价[J]. 检验医学, 2022, 37(1): 68-71.
[14]	刘宏钱, 宋朝晖, 梁巧米. 多重RT-PCR MassARRAY技术检测27种呼吸道病原体方法的建立和临床应用评价[J]. 检验医学, 2021, 36(9): 939-946.
[15]	陈丽媛, 徐咏, 王辉, 徐晓昕, 谢建生. 胎儿游离DNA无创产前检测次要结果在筛查Klinefelter综合征中的价值[J]. 检验医学, 2021, 36(8): 785-789.