黄连解毒汤6种主要成分高效液相色谱检测方法的建立和应用

doi:10.3969/j.issn.1673-8640.2024.05.010

摘要/Abstract

摘要：

目的建立检测黄连解毒汤中6种主要成分的高效液相色谱（HPLC）方法。方法采用Zorbax Eclipse Plus C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以0.03 mg·mL^-1磷酸二氢钾-乙腈（V∶V=7∶3）为流动相，等度洗脱，流速为1.0 mL·min^-1，检测波长为345 nm，柱温为37 ℃，进样量为20 μL，建立检测黄连解毒汤6种主要成分（京尼平苷、小檗碱、黄连碱、药根碱、黄芩苷、巴马汀）的HPLC方法。绘制HPLC检测6种成分的标准曲线，并进行方法学评价（线性、加样回收率、准确度和精密度、稳定性）。采用建立的HPLC方法检测黄连解毒汤样本。结果 HPLC检测京尼平苷、小檗碱、黄连碱、药根碱、黄芩苷、巴马汀的线性范围分别为25.00~800.00、32.00~1 024.00、20.00~640.00、20.30~650.00、13.13~420.00、25.00~800.00 μg·mL^-1，精密度和准确度均<2%，加样回收率分别为105.30%、102.88%、103.51%、107.76%、96.29%、99.34%。稳定性实验结果显示，室温放置24 h、反复冻融3 次、2~8 ℃保存1周、-80 ℃冻存1个月，京尼平苷、小檗碱、黄连碱、药根碱、黄芩苷、巴马汀的峰面积相对标准偏差（RSD）均<2%，检测结果均稳定。采用HPLC检测黄连解毒汤的主要成分，浓度从高到低依次为药根碱（2 799.00 μg·mL^-1）、小檗碱（2 358.03 μg·mL^-1）、京尼平苷（1 793.34 μg·mL^-1）、巴马汀（945.30 μg·mL^-1）、黄连碱（192.00 μg·mL^-1）、黄芩苷（171.00 μg·mL^-1）。结论建立的同时检测黄连解毒汤6种主要成分的HPLC方法快速、简便、重复性好、准确度高，可为后续黄连解毒汤的相关研究和临床应用奠定基础。

关键词: 黄连解毒汤, 药根碱, 小檗碱, 京尼平苷, 巴马汀, 黄连碱, 黄芩苷, 高效液相色谱

Abstract:

Objective To establish a high performance liquid chromatography（HPLC） for the determination of 6 main components in Huang-Lian-Jie-Du decoction. Methods The chromatography was performed on a Zorbax Eclipse Plus C18 column（250 mm×4.6 mm，5 μm） with 0.03 mg·mL^-1 potassium dihydrogen phosphate acetonitrile（V∶V = 7∶3） as the mobile phase. The flow rate was 1.0 mL·min^-1，and the determination wavelength was 345 nm. The column temperature was 37 ℃，and the sample size was 20 μL. The HPLC was established for the determination of the 6 main components of Huang-Lian-Jie-Du decoction（genipin，berberine，coptisine，jateorhizine，baicalin and palmatine）. The standard curves of 6 components determined by HPLC were drawn，and the methodological evaluation（linear evaluation，recovery rate，accuracy and precision，stability） was carried out. The established HPLC was used to determine the samples of Huang-Lian-Jie-Du decoction. Results The linear ranges of genipin，berberine，coptisine，jateorhizine，baicalin and palmatine were 25.00-800.00，32.00-1 024.00，20.00-640.00，20.30-650.00，13.13-420.00 and 25.00-800.00 μg·mL^-1，respectively. The precision and accuracy were <2%. The recoveries were 105.30%，102.88%，103.51%，107.76%，96.29% and 99.34%，respectively. The stability test results showed that the peak area relative standard derivations（RSD） of genipin，berberine，coptisine，jateorhizine，baicalin and palmatine were all <2% after 24 h at room temperature，3 times frozen and thawing，2-8 ℃ for 1 week，and -80 ℃ for 1 month，and the determination results were all stable. The main components of Huang-Lian-Jie-Du decoction were determined by HPLC. The concentrations from high to low were jateorhizine（2 799.00 μg·mL^-1），berberine（2 358.03 μg·mL^-1），genipin（1 793.34 μg·mL^-1），palmatine（945.30 μg·mL^-1），coptisine （192.00 μg·mL^-1） and baicalin（171.00 μg·mL^-1）. Conclusions The established HPLC for the determination of the main components of Huang-Lian-Jie-Du decoction is rapid，simple，reproducible and accurate，which lays a foundation for the subsequent research and clinical application of Huang-Lian-Jie-Du decoction.

Key words: Huang-Lian-Jie-Du decoction, Jateorhizine, Berberine, Genipin, Palmatine, Coptisine, Baicalin, High performance liquid chromatography

中图分类号:

R446.1

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图/表 5

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项目	准确度/%	精密度（RSD）/%	项目	准确度/%	精密度（RSD）/%
京尼平苷			药根碱
25 μg·mL^-1	1.27	1.96	20.30 μg·mL^-1	0.67	1.93
100 μg·mL^-1	0.75	1.04	81.25 μg·mL^-1	1.10	1.75
400 μg·mL^-1	0.03	1.27	325.00 μg·mL^-1	1.46	1.39
小檗碱			黄芩苷
32 μg·mL^-1	0.69	1.70	13.125 μg·mL^-1	1.49	1.49
128 μg·mL^-1	0.43	1.78	52.500 μg·mL^-1	0.64	0.64
512 μg·mL^-1	0.65	0.63	210.000 μg·mL^-1	0.98	0.98
黄连碱			巴马汀
20 μg·mL^-1	0.70	1.92	25 μg·mL^-1	1.93	1.93
80 μg·mL^-1	0.25	1.07	100 μg·mL^-1	1.75	1.75
320 μg·mL^-1	0.30	1.14	400 μg·mL^-1	1.39	1.39

项目	准确度/%	精密度（RSD）/%	项目	准确度/%	精密度（RSD）/%
京尼平苷			药根碱
25 μg·mL^-1	1.27	1.96	20.30 μg·mL^-1	0.67	1.93
100 μg·mL^-1	0.75	1.04	81.25 μg·mL^-1	1.10	1.75
400 μg·mL^-1	0.03	1.27	325.00 μg·mL^-1	1.46	1.39
小檗碱			黄芩苷
32 μg·mL^-1	0.69	1.70	13.125 μg·mL^-1	1.49	1.49
128 μg·mL^-1	0.43	1.78	52.500 μg·mL^-1	0.64	0.64
512 μg·mL^-1	0.65	0.63	210.000 μg·mL^-1	0.98	0.98
黄连碱			巴马汀
20 μg·mL^-1	0.70	1.92	25 μg·mL^-1	1.93	1.93
80 μg·mL^-1	0.25	1.07	100 μg·mL^-1	1.75	1.75
320 μg·mL^-1	0.30	1.14	400 μg·mL^-1	1.39	1.39

成分	室温放置			冻融			2~8 ℃ 保存1周	-80 ℃ 保存1个月
成分	2 h	8 h	1 d	1次	2次	3次	2~8 ℃ 保存1周	-80 ℃ 保存1个月
京尼平苷	1.23	1.21	0.97	1.79	1.82	1.33	1.25	1.31
小檗碱	0.98	1.35	1.87	0.63	0.63	1.75	1.29	1.33
黄连碱	1.84	0.79	1.06	1.23	1.31	1.50	0.97	1.20
药根碱	1.02	1.64	1.94	1.22	1.09	2.00	1.52	1.33
黄芩苷	0.97	1.20	1.33	1.78	1.60	1.33	1.29	0.98
巴马汀	1.62	0.31	1.95	1.69	1.29	1.30	0.97	1.49

成分	室温放置			冻融			2~8 ℃ 保存1周	-80 ℃ 保存1个月
成分	2 h	8 h	1 d	1次	2次	3次	2~8 ℃ 保存1周	-80 ℃ 保存1个月
京尼平苷	1.23	1.21	0.97	1.79	1.82	1.33	1.25	1.31
小檗碱	0.98	1.35	1.87	0.63	0.63	1.75	1.29	1.33
黄连碱	1.84	0.79	1.06	1.23	1.31	1.50	0.97	1.20
药根碱	1.02	1.64	1.94	1.22	1.09	2.00	1.52	1.33
黄芩苷	0.97	1.20	1.33	1.78	1.60	1.33	1.29	0.98
巴马汀	1.62	0.31	1.95	1.69	1.29	1.30	0.97	1.49