一种新型冠状病毒核酸检测试剂在4个检测体系中的检出限分析

doi:10.3969/j.issn.1673-8640.2023.03.011

摘要/Abstract

摘要： 目的验证一种新型冠状病毒核酸检测试剂在4个不同检测体系中的检出限，以提升新型冠状病毒核酸检测质量。方法选择1个试剂配套体系和3个非配套体系，使用中国计量科学研究院新型冠状病毒全序列假病毒核糖核酸标准物质验证检出限性能，并对未通过验证的体系进行分析，以查找原因。结果该试剂在4个检测体系中检出限验证均通过，其中非配套体系1检出能力最强，其次为配套体系和非配套体系2。缩短细胞裂解、核酸释放与磁珠结合时间、减少核酸洗涤次数会影响试剂检出限。结论该试剂检出限性能可满足检测需求。相关部门应出台相应仪器的生产标准和校准标准；实验室应关注加样量、非配套体系的优化和仪器设备的维护、保养、校准。

关键词: 新型冠状病毒, 核酸检测, 检测体系, 检出限, 性能验证

Abstract: Objective To verify and analyze the determination limits of a severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 nucleic acid determination reagent in 4 determination systems，and to improve the quality of severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 nucleic acid determination. Methods One matched determination system and 3 unmatched determination systems were selected，and the determination limit performance was verified by the severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 nucleic acid reference material of the National Institute of Metrology，China. The reasons of failed verification systems were analyzed. Results The determination ability of unmatched system 1 was strong，followed by matched system 1 and unmatched system 2. Shortening the time of cell lysis，nucleic acid release and magnetic bead binding and reducing the number of nucleic acid washing affected the determination limit. Conclusions The severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 nucleic acid determination reagent selected in this study could pass the determination limit verification. It is urgent for relevant departments to issue production standards and calibration standards for corresponding instruments. Laboratories should pay attention to sample addition amount，the optimization of unmatched systems and the maintenance and calibration of instruments.

Key words: Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, Nucleic acid determination, Determination system, Determination limit, Performance verification

中图分类号:

R373.1

曾艳芬, 吴泉明, 周欢, 张秋琴, 康艳丽, 李瑶, 陈喜军, 黄建刚, 陈发林. 一种新型冠状病毒核酸检测试剂在4个检测体系中的检出限分析[J]. 检验医学, 2023, 38(3): 261-266.

ZENG Yanfen, WU Quanming, ZHOU Huan, ZHANG Qiuqin, KANG Yanli, LI Yao, CHEN Xijun, HUANG Jiangang, CHEN Falin. Determination limits of a severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 nucleic acid determination reagent in 4 determination systems[J]. Laboratory Medicine, 2023, 38(3): 261-266.

基因名称	标准值/ （拷贝/μL）	扩展不确定度/ （拷贝/μL）
ORF1ab（2720-8554）	85	23
N（28274-29533）	38	14
E（26245-26472）	52	22

基因名称	标准值/ （拷贝/μL）	扩展不确定度/ （拷贝/μL）
ORF1ab（2720-8554）	85	23
N（28274-29533）	38	14
E（26245-26472）	52	22

步骤序号	名称	混合时间/min	吸磁次数/次	混合速度	体积/ μL	温度/ ℃
1	吸磁	1	3	中	400	0
2	磁珠结合液	4	3	快	750	70
3	磁珠洗涤液	1	2	快	600	0
4	洗脱	1	3	中	100	70
5	弃磁	1	0	中	600	0

步骤序号	名称	混合时间/min	吸磁次数/次	混合速度	体积/ μL	温度/ ℃
1	吸磁	1	3	中	400	0
2	磁珠结合液	4	3	快	750	70
3	磁珠洗涤液	1	2	快	600	0
4	洗脱	1	3	中	100	70
5	弃磁	1	0	中	600	0

步骤序号	名称	等待时间/min	混合时间/min	吸磁次数/次	混合速度	体积/μL	温度/ ℃
1	吸磁	0	1	3	中	400	0
2	磁珠结合液	0	15	3	快	750	70
3	磁珠洗涤液1	0	2	2	快	600	0
4	磁珠洗涤液2	0	2	2	中	600	0
5	磁珠洗涤液2	0	2	2	快	600	0
6	洗脱	5	0	0	慢	100	0
7	洗脱	0	5	3	中	100	70
8	弃磁	0	1	0	中	600	0

一种新型冠状病毒核酸检测试剂在4个检测体系中的检出限分析

Determination limits of a severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 nucleic acid determination reagent in 4 determination systems

RichHTML

PDF (PC)

可视化

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

图/表 9

参考文献 5

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

体系	ORF1ab基因		N基因		E基因		结论
体系	Ct^①值	判定结果	Ct^①值	判定结果	Ct^①值	判定结果	结论
配套体系							未通过
1	36.15	阳性	38.87	阳性	—	阴性
2	35.14	阳性	37.55	阳性	36.90	阳性
3	36.04	阳性	40.03	阳性	38.16	阳性
4	35.97	阳性	38.64	阳性	—	阴性
5	38.61	阳性	38.88	阳性	—	阴性
非配套体系1							通过
1	38.24	阳性	36.03	阳性	34.32	阳性
2	39.04	阳性	35.07	阳性	33.93	阳性
3	37.91	阳性	35.71	阳性	35.12	阳性
4	38.11	阳性	37.64	阳性	33.98	阳性
5	37.86	阳性	35.91	阳性	34.16	阳性
非配套体系2							未通过
1	—	阴性	38.38	阳性	37.11	阳性
2	—	阴性	38.39	阳性	—	阴性
3	40.42	阳性	38.51	阳性	36.96	阳性
4	38.28	阳性	36.32	阳性	—	阴性
5	39.02	阳性	—	阴性	36.41	阳性
非配套体系3							未通过
1	—	阴性	38.29	阳性	37.77	阳性
2	41.36	阳性	38.32	阳性	38.17	阳性
3	37.82	阳性	38.37	阳性	38.33	阳性
4	—	阴性	—	阴性	—	阴性
5	37.76	阳性	—	阴性	38.96	阳性

体系	ORF1ab基因		N基因		E基因		结论
体系	Ct值	判定结果	Ct值	判定结果	Ct值	判定结果	结论
配套体系							通过
1	35.29	阳性	36.03	阳性	35.18	阳性
2	35.67	阳性	36.37	阳性	38.39	阳性
3	35.90	阳性	36.50	阳性	35.71	阳性
4	35.14	阳性	35.85	阳性	35.65	阳性
5	34.84	阳性	37.40	阳性	34.84	阳性
非配套体系2							通过
1	36.90	阳性	36.83	阳性	38.52	阳性
2	36.86	阳性	38.61	阳性	38.75	阳性
3	39.07	阳性	38.47	阳性	37.84	阳性
4	40.17	阳性	37.25	阳性	41.83	阳性
5	36.87	阳性	40.95	阳性	38.74	阳性
非配套体系3							未通过
1	—	阴性	—	阴性	37.52	阳性
2	41.36	阳性	37.11	阳性	37.39	阳性
3	37.82	阳性	36.86	阳性	37.89	阳性
4	—	阴性	38.21	阳性	36.54	阳性
5	37.76	阳性	37.31	阴性	35.98	阳性

项目	ORF1ab基因		N基因		E基因		结论
项目	Ct值	判定结果	Ct值	判定结果	Ct值	判定结果	结论
第3次验证实验（提取程序2）							通过
1	36.85	阳性	36.59	阳性	35.37	阳性
2	35.76	阳性	37.67	阳性	35.98	阳性
3	36.33	阳性	38.54	阳性	36.21	阳性
4	36.56	阳性	35.03	阳性	36.46	阳性
5	37.31	阳性	37.78	阳性	35.92	阳性
项目	ORF1ab基因		N基因		E基因		结论
项目	Ct值	判定结果	Ct值	判定结果	Ct值	判定结果	结论
第4次验证实验（步骤2，15 min）							未通过
1	36.30	阳性	37.09	阳性	35.86	阳性
2	35.26	阳性	36.57	阳性	35.36	阳性
3	35.82	阳性	38.14	阳性	35.13	阳性
4	35.89	阳性	35.65	阳性	35.94	阳性
5	36.91	阳性	—	阴性	35.23	阳性
第5次验证实验（仪器预热至70 ℃，步骤3重复3次）							未通过
1	38.29	阳性	37.26	阳性	38.77	阳性
2	38.32	阳性	37.17	阳性	38.21	阳性
3	38.37	阳性	38.33	阳性	—	阳性
4	—	阳性	—	阳性	40.15	阳性
5	39.43	阳性	38.56	阳性	39.86	阳性

[1]	中华人民共和国卫生健康委员会. 国家卫生健康委关于修订新型冠状病毒肺炎英文命名事宜的通知:国卫医函〔2020〕70号[EB/OL].(2020-02-22)[2022-09-01]. http://www.nhc.gov.cn/yzygj/s7653p/202002/33393aa53d984ccdb1053a52b6bef810.shtml.
[2]	张瑞, 李金明. 如何减少新型冠状病毒核酸检测的假阴性[J]. 中华医学杂志, 2020, 100(11):801-804.
[3]	国务院应对新型冠状病毒肺炎疫情联防联控机制医疗救治组. 关于印发医疗机构新型冠状病毒核酸检测工作手册(试行第二版)的通知:联防联控机制医疗发〔2020〕313号[EB/OL].(2020-12-28)[2022-09-01]. http://www.nhc.gov.cn/yzygj/s7659/202012/b89bcd0813da41788688eb14787b3c72.shtml.
[4]	JJF1874—2020 (自动)核酸提取仪校准规范[S]. 北京: 国家市场监督管理总局, 2020.
[5]	李金明. 实时荧光PCR技术[M]. 北京: 科学出版社, 2016.

[1]	赵若楠, 盛哲, 叶志成, 杨丹, 余先智. 上海某儿科医院新型冠状病毒肺炎疫情前后腹泻患儿A组轮状病毒流行特征[J]. 检验医学, 2023, 38(9): 890-892.
[2]	杨雪, 朱俊, 蒋玲丽, 王青, 胡晓波. 上海地区9种新型冠状病毒核酸检测试剂盲样检测结果一致性分析[J]. 检验医学, 2023, 38(8): 776-780.
[3]	杜晶辉, 贺鑫, 刘晶, 刘瑞岩, 鲍志军, 王俊, 赵岩, 雷曜荣, 刘旻, 刘旭. 新型冠状病毒核酸检测7种振荡混匀方法效果评价[J]. 检验医学, 2023, 38(7): 680-685.
[4]	肖秀美, 梁超, 刘彩红, 李晓光. 新型冠状病毒中和抗体与特异性抗体检测结果一致性分析[J]. 检验医学, 2023, 38(4): 352-356.
[5]	李育敏, 付晓歌, 龚海娜, 郭东月, 曾子朗, 姚洁仪, 邓巧梅, 李双, 张秀明. 新型冠状病毒核酸检测假阴性和假阳性案例分析[J]. 检验医学, 2023, 38(4): 378-381.
[6]	李卫滨, 李瑞斌, 张胜行. 新型冠状病毒变异株生物学特性及其检测方法[J]. 检验医学, 2023, 38(4): 394-398.
[7]	项瑾, 刘爱平, 胡尧, 吴之源, 曹国君, 关明. 新型冠状病毒肺炎患者抗核抗体谱分析和血清加热灭活对检测的影响[J]. 检验医学, 2023, 38(12): 1141-1146.
[8]	成宇, 徐臻, 陆柳, 丁梦蕾, 虞珊珊, 宗明, 范列英. 新型冠状病毒肺炎患者血清抗ACE-2抗体表达及其影响因素分析[J]. 检验医学, 2023, 38(12): 1147-1152.
[9]	刘洁, 刘业琼, 柯文才. 新型冠状病毒奥密克戎变异株感染早期病毒载量与实验室常规检测指标分析[J]. 检验医学, 2023, 38(12): 1202-1205.
[10]	杨丹平, 王宏, 王灿, 陈卫, 杨爱平. 新型冠状病毒抗原检测诊断效能和临床应用评价[J]. 检验医学, 2023, 38(1): 28-31.
[11]	杨思敏, 轩乾坤, 羽晓瑜, 温冬华, 李广波. 国产某品牌大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌及3种碳青霉烯耐药基因试剂性能验证[J]. 检验医学, 2023, 38(1): 56-59.
[12]	姚晓宾, 许青霞, 王桢, 魏丹丹, 郑培明, 李刚. 新型冠状病毒区域筛查实验室结果上报经验分享[J]. 检验医学, 2023, 38(1): 76-77.
[13]	岳彩蝶, 李军燕, 丁爱军, 谢力, 曾韦锟. SARS-CoV-2抗原快速检测方法的研究进展[J]. 检验医学, 2023, 38(1): 87-93.
[14]	王善龙. 气膜方舱实验室大规模新型冠状病毒核酸筛查工作经验总结[J]. 检验医学, 2022, 37(9): 868-871.
[15]	卢丽娟, 徐锦. 关于腺病毒是否为近期儿童不明原因肝炎病原的思考[J]. 检验医学, 2022, 37(8): 705-709.