高浓度胆红素对流式细胞术外周血淋巴细胞亚群检测的干扰和消除方法

doi:10.3969/j.issn.1673-8640.2022.12.013

检验医学 ›› 2022, Vol. 37 ›› Issue (12): 1169-1173.DOI: 10.3969/j.issn.1673-8640.2022.12.013

高浓度胆红素对流式细胞术外周血淋巴细胞亚群检测的干扰和消除方法

薛燕¹, 许俐¹, 党利亨¹, 王朝¹, 崔亚琼¹, 王萍¹, 王宁¹, 张新杰¹, 刘洋²()

1.天津市儿童医院（天津大学儿童医院）天津市儿科研究所天津市儿童出生缺陷防治重点实验室，天津 300134
2.天津市儿童医院（天津大学儿童医院）新生儿内科，天津 300134

收稿日期:2022-02-09 修回日期:2022-07-11 出版日期:2022-12-30 发布日期:2023-02-02
通讯作者: 刘洋，E-mail：etyyly@163.com。
作者简介:薛燕，女，1991年生，硕士，实习研究员，主要从事流式细胞术检测工作。
基金资助:
天津市卫生健康科技项目(KJ20166);天津市科技计划项目(21JCYBJC00370)

Interference of high levels of bilirubin on lymphocyte subset determination in peripheral blood by flow cytometry and its elimination methods

XUE Yan¹, XU Li¹, DANG Liheng¹, WANG Chao¹, CUI Yaqiong¹, WANG Ping¹, WANG Ning¹, ZHANG Xinjie¹, LIU Yang²()

1. Tianjin Key Laboratory of Birth Defects for Prevention and Treatment，Tianjin Pediatrics Research Institute，Tianjin Children's Hospital（Children's Hospital of Tianjin University），Tianjin 300134，China
2. Department of Newborn Medicine，Tianjin Children's Hospital（Children's Hospital of Tianjin University），Tianjin 300134，China

Received:2022-02-09 Revised:2022-07-11 Online:2022-12-30 Published:2023-02-02
Contact: LIU Yang，E-mail：etyyly@163.com。

摘要/Abstract

摘要：

目的探讨高浓度胆红素对流式细胞术（FCM）外周血淋巴细胞亚群检测的干扰和消除方法。方法选取51例血清总胆红素（TB）>200 μmol/L且进行淋巴细胞亚群检测的患儿，将直接胆红素（DBil）升高的6例患儿纳入高DBil组，将间接胆红素（IBil）升高的45例患儿纳入高IBil组。以6名健康体检儿童（对照组）无黄疸血液样本为对照样本，将高DBil血浆加入对照样本中，制备成干扰样本。采用配对差异实验分析胆红素对FCM检测淋巴细胞亚群的干扰，并评估胆红素干扰的剂量。评估洗涤-染色-裂解法和染色-裂解-洗涤法对胆红素干扰的消除作用。结果采用FCM检测淋巴细胞亚群，高IBil组样本无影响，高DBil组样本均出现异硫氰酸荧光素（FITC）标记的CD3^-与CD3⁺细胞群荧光表达分界不清。采用染色-裂解法处理干扰样本后，出现FITC标记的CD3^-与CD3⁺细胞群荧光表达分界不清。DBil≤150 μmol/L对FCM检测无影响，DBil≥200 μmol/L对FCM检测的干扰较大。采用洗涤-染色-裂解法和染色-裂解-洗涤法处理均可消除DBil的干扰。经染色-裂解-洗涤法处理的干扰样本与对照样本比较，淋巴细胞亚群检测结果差异均无统计学意义（P>0.05），2种样本之间CD3⁺、CD3⁺CD8⁺、CD3⁺CD4⁺、CD3^-CD16/56⁺、CD3^-CD19⁺细胞百分比和CD4/CD8比值呈显著正相关（r值分别为0.977、0.994、0.95、0.941、0.996、0.965，P<0.05）。结论高浓度DBil会干扰FITC的荧光信号，导致FCM检测FITC标记的CD3^-与CD3⁺细胞群荧光表达分界不清。采用染色-裂解-洗涤法处理可最大程度地消除DBil的干扰。

关键词: 胆红素, 流式细胞术, 淋巴细胞亚群, 干扰, 消除方法

Abstract:

Objective To investigate the interference of high levels of bilirubin on lymphocyte subset determination in peripheral blood by flow cytometry（FCM） and its elimination methods. Methods Totally，51 patients with serum total bilirubin（TB） >200 μmol/L and undergoing lymphocyte subset determination were enrolled，which included 6 cases of elevated direct bilirubin（DBil）（DBil group） and 45 cases of elevated indirect bilirubin（IBil）（IBil group）. The non-jaundiced samples from 6 healthy children（control samples）were collected，and plasmas with high DBil were added to the control samples to prepare for interference samples. Paired difference experiments were used to analyze the interference of bilirubin on lymphocyte subsets determined by FCM and to assess the dose of bilirubin interference. The effects of washing-staining-lysis method and staining-lysis-washing method on bilirubin interference elimination were assessed. Results In elevated IBil group，lymphocyte subset determination was not interfered. But in elevated DBil group，the fluorescence expressions of fluorescein isothiocyanate（FITC）-labeled CD3^- cells and CD3⁺ cells were not clearly demarcated. For interference samples treated by staining-lysis method，the fluorescence expressions of FITC-labeled CD3^- cells and CD3⁺ cells were also not clearly demarcated. When DBil≤150 μmol/L，no effect on FCM was found. When DBil≥200 μmol/L，the interference was greater. Such interference could be eliminated to the greatest extent by both washing-staining-lysis method and staining-lysis-washing method. Staining-lysis-washing method was more operable，and no significant difference was found in lymphocyte subsets between interference samples and control samples（P>0.05），and the percentages of CD3⁺，CD3⁺CD8⁺，CD3⁺CD4⁺，CD3^-CD16/56⁺，CD3^-CD19⁺ cells and CD4/CD8 ratios between the 2 samples were positively correlated（r=0.977，0.994，0.950，0.941，0.996 and 0.965，P<0.05）. Conclusions High level of DBil can interfere with the fluorescence expressions of FITC-labeled CD3^- cells and CD3⁺ cells in lymphocyte subset determination in peripheral blood by FCM. Staining-lysis-washing method can eliminate such interference to the greatest extent.

Key words: Bilirubin, Flow cytometry, Lymphocyte subset, Interference, Elimination method

中图分类号:

R446.1

薛燕, 许俐, 党利亨, 王朝, 崔亚琼, 王萍, 王宁, 张新杰, 刘洋. 高浓度胆红素对流式细胞术外周血淋巴细胞亚群检测的干扰和消除方法[J]. 检验医学, 2022, 37(12): 1169-1173.

XUE Yan, XU Li, DANG Liheng, WANG Chao, CUI Yaqiong, WANG Ping, WANG Ning, ZHANG Xinjie, LIU Yang. Interference of high levels of bilirubin on lymphocyte subset determination in peripheral blood by flow cytometry and its elimination methods[J]. Laboratory Medicine, 2022, 37(12): 1169-1173.

图/表 7

图1 高IBil组淋巴细胞亚群分析散点图

图2 高DBil组经染色-裂解法处理后FITC标记的CD3-与 CD3+细胞群荧光表达情况

图3 对照样本和经染色-裂解法处理后的干扰样本FITC标记的CD3-与CD3+细胞群荧光表达情况注：（a）对照样本；（b）干扰样本

图4 不同浓度DBil样本经染色-裂解处理后，FITC标记的CD3-与CD3+细胞群荧光表达情况注：（a）DBil为0 μmol/L；（b）DBil为100 μmol/L；（c）DBil为150 μmol/L；（d）DBil为200 μmol/L；（e）DBil为250 μmol/L；（f）DBil为500 μmol/L。

图5 高DBil组样本经洗涤-染色-裂解法处理后，FITC标记的CD3-与 CD3+细胞群荧光表达情况

图6 干扰样本经染色-裂解-洗涤法处理后，FITC标记的CD3-与 CD3+细胞群荧光表达情况

表1 干扰样本经染色-裂解-洗涤方法处理与对照样本经染色-裂解方法处理的淋巴细胞亚群百分比比较

样本	例数	CD3⁺细胞/%	CD3⁺CD8⁺细胞/%	CD3⁺CD4⁺细胞/%	CD3^-CD16⁺/56⁺细胞/%	CD3^-CD19⁺细胞/%	CD4/CD8比值
对照样本	6	64.4±7.4	26.5±12.5	33.6±5.5	23.4±10.7	10.6±4.2	1.54±0.71
干扰样本	6	65.0±7.7	27.2±11.5	33.3±4.4	24.3±10.6	10.0±4.7	1.43±0.60
t值		-0.807	-1.090	0.363	0.782	0.293	1.355
P值		0.457	0.325	0.732	0.470	0.781	0.233

参考文献 8

1	屈晨雪, 王建中. 流式细胞分析的规范化和标准化[J]. 中华检验医学杂志, 2021, 44(12):1105-1108.
2	中华人民共和国卫生部. WS/T 360—2011 流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群指南[S]. 北京: 中华人民共和国卫生部, 2011.
3	NOUGIER C, JOUSSELME E, SOBAS F, et al. Effects of hemolysis,bilirubin,and lipemia interference on coagulation tests detected by two analytical systems[J]. Int J Lab Hematol, 2020, 42(1):88-94. DOI URL
4	欧元祝, 龚敬凯, 林斐然, 等. 血红蛋白、胆红素、乳糜对干化学法和酶速率法检测血氨的干扰研究[J]. 检验医学, 2021, 36(11):1146-1150.
5	田禾, 黄山, 张程, 等. 流式微球检测超敏C反应蛋白方法学的建立及性能评价[J]. 检验医学与临床, 2012, 9(10):1153-1154.
6	CROCE A C, FERRIGNO A, BOTTIROLI G, et al. Fluorescence excitation properties of bilirubin in solution and in serum[J]. J Photochem Photobiol B, 2021, 215:112121. DOI URL
7	CROCE A C, FERRIGNO A, SANTIN G, et al. Bilirubin:an autofluorescence bile biomarker for liver functionality monitoring[J]. J Biophotonics, 2014, 7(10):810-817. DOI URL
8	史晓敏, 任娜, 孙悦, 等. 新生儿高胆红素血症对血清乙肝病毒表面抗原化学发光法检测的影响及消除方法初探[J]. 中华检验医学杂志, 2019, 42(1):51-56.

[1]	赵静, 李永勤, 李艳, 范伟光, 杨学刚. HIV/AIDS合并机会性感染患者IP-10、SAA、hs-CRP、PCT、CD4⁺ T细胞计数检测的意义[J]. 检验医学, 2023, 38(8): 725-729.
[2]	刘亚楠, 夏敏, 胡韶华, 郑月, 张泓. 淋巴细胞亚群、炎症因子和氨基末端B型钠尿肽原联合检测诊断川崎病[J]. 检验医学, 2023, 38(6): 532-537.
[3]	倪佳佳, 龙钰, 张丽, 杨青青, 刘义庆, 寇纯嘉, 李静怡, 李舒祺, 张海清. 生物素、异嗜性抗体、甲状腺激素自身抗体干扰甲状腺功能检测1例报道[J]. 检验医学, 2023, 38(6): 599-602.
[4]	杨丽媛, 戴碗琴, 汪小桐, 娄晓丽, 王玥, 侯彦强. 外周血中性粒细胞对γ干扰素释放试验结果的影响[J]. 检验医学, 2023, 38(5): 484-488.
[5]	李莲, 黄晓玲, 姚娟. 高浓度肌酸致血清肌酐酶法检测结果假性升高病例分析[J]. 检验医学, 2023, 38(5): 497-501.
[6]	刘俊闪, 郭明发, 孙佳, 史利欢, 刘炜, 段勇涛. 微量残留病监测在ETV6/RUNX1阴性和阳性急性B淋巴细胞白血病患儿预后中的意义[J]. 检验医学, 2023, 38(3): 209-214.
[7]	盖林林, 李海波, 褚锦锦, 孙家梅, 闫心怡, 杜金珂, 代文清, 徐栋花. 化学发光法干扰素-γ释放试验在肺结核辅助诊断中的价值[J]. 检验医学, 2023, 38(3): 257-260.
[8]	杨晓, 李恩灵, 吴丽霞, 戴颖欣, 王之青, 黄昊, 郑冰. 胞质型抗核抗体对间接免疫荧光法检测抗中性粒细胞胞质抗体的影响[J]. 检验医学, 2023, 38(12): 1135-1140.
[9]	代芳芳, 鲁辛辛, 于艳华, 陈铭, 孙桂珍. HIV/AIDS患者分枝杆菌检出情况分析[J]. 检验医学, 2023, 38(12): 1173-1176.
[10]	张亚旭, 崔延伟, 刘紫烟. 核酸分子杂交-流式细胞术检测HPV E6/E7 mRNA初步研究[J]. 检验医学, 2023, 38(1): 46-50.
[11]	谭美玉, 殳洁, 宣彬彬, 周丽达, 李红, 侯尚伟, 盛慧明. SARS-CoV-2疫苗接种对人体抗体产生和免疫功能的影响[J]. 检验医学, 2022, 37(8): 729-734.
[12]	孟舒婷, 周卫平, 戴绘芬, 董德平, 董业峰, 葛仁美, 王惠民. 蒙特卡洛法对校准曲线法测定总胆红素浓度的不确定度评定[J]. 检验医学, 2022, 37(7): 674-679.
[13]	陶朝欣, 孙洁, 张玉娜, 白明明, 张校辉, 许丽亚, 邢江涛, 郝冀洪, 张牡霞. 血小板膜糖蛋白Ⅸ轻度缺乏巨大血小板综合征1例报道[J]. 检验医学, 2022, 37(7): 702-704.
[14]	李华, 王伟亮, 谢贝, 杨瑜, 孟繁荣, 王楠, 刘志辉, 张言斌. 流式细胞术鉴定结核分枝杆菌利福平异质性耐药可行性分析[J]. 检验医学, 2022, 37(6): 577-582.
[15]	刘训涛, 王霞, 赵飞, 郭迪媛, 张斌. 异常表达CD13的B细胞恶性肿瘤患者形态学和流式细胞术检测结果分析[J]. 检验医学, 2022, 37(5): 499-501.

高浓度胆红素对流式细胞术外周血淋巴细胞亚群检测的干扰和消除方法

Interference of high levels of bilirubin on lymphocyte subset determination in peripheral blood by flow cytometry and its elimination methods

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