耐碳青霉烯类抗菌药物大肠埃希菌耐药机制的研究

doi:10.3969/j.issn.1673-8640.2016.01.013

摘要/Abstract

摘要： 目的了解河南省人民医院耐碳青霉烯类抗菌药物大肠埃希菌的耐药特点和耐药机制。方法收集临床送检合格样本分离到的细菌,采用BD Phoenix 100微生物分析系统进行细菌鉴定及体外药物敏感性分析,依照美国临床实验室标准化协会（CLSI）标准筛选出耐碳青霉烯类大肠埃希菌。采用改良Hodges和美罗培南（MEM）-乙二胺四乙酸（EDTA）-Na₂双纸片协同试验进行表型筛选。聚合酶链反应（PCR）检测耐药基因bla_KPC、bla_NDM、bla_VIM、bla_IMP、bla_OXA_-48。对bla_KPC阳性菌株进行接合转移试验。结果从1 238株大肠埃希菌中筛选到8株耐碳青霉烯类菌株,7株对亚胺培南（IPM）、MEM均耐药,有1株仅对MEM耐药。8株改良Hodges试验均为阳性,6株双纸片协同试验阳性。2株携带bla_KPC_-2,3株携带bla_IMP_-4。bla_KPC_-2可以发生接合转移。结论首次在河南省人民医院发现产bla_IMP_-4的大肠埃希菌,其耐碳青霉烯类抗菌药物的机制主要为携带bla_KPC_-2和bla_IMP_-4,bla_KPC_-2基因可以通过质粒水平传播。

关键词: 大肠埃希菌, 碳青霉烯酶, 耐药机制

Abstract:

Objective To investigate the drug resistance characteristics and mechanism of carbapenem-resistant Escherichia coli in Henan Provincial People's Hospital. Methods The identification and antimicrobial susceptibility in vitro of the isolates from qualified clinical specimens were analyzed by BD Phoenix 100 microorganism analysis system. The isolates of carbapenem-resistant Escherichia coli were screened according to the Clinical and Laboratory Standards Institute （CLSI） standard. Modified Hodges test and meropenem（MEM）-ethylene diamine tetraacetic acid （EDTA）-Na₂ double-disk synergy test were used for phenotypic screening of the isolates. By polymerase chain reaction（PCR）,the resistance genes,bla_KPC,bla_NDM,bla_VIM,bla_IMP and bla_OXA_-48,in the isolates were detected. The transferability of bla_KPC in the bla_KPC-positive isolates was studied by conjugation test. Results A total of 8 carbapenem-resistant Escherichia coli were screened from the 1 238 isolates. In the 8 isolates,7 isolates were resistant to imipenem （IPM）and MEM,but 1 isolate was only resistant to MEM. All the 8 isolates were positive in the modified Hodges test, and 6 isolates were positive in the MEM-EDTA double-disk synergy test. There were 2 isolates carrying bla_KPC_-2 and 3 isolates carrying bla_IMP_-4. Conjugation test indicated that bla_KPC_-2 could be transferred to Escherichia coli. Conclusions Carbapenem-resistant Escherichia coli carrying bla_IMP_-4 is firstly reported in the hospital. The resistance mechanism of carbapenem-resistant Escherichia coli in the hospital is mainly carrying bla_KPC_-2 and bla_IMP_-4,and the bla_KPC_-2 gene could be horizontally transmitted by plasmid.

Key words: Escherichia coli, Carbapenem, Drug resistance mechanism

中图分类号:

R378.2

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图/表 6

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引物名称	序列（5'-3'）	片段（bp）	参考文献
KPCF	CATTCAAGGGCTTTCTTGCTGC	538	[9]
KPCR	ACGACGGCATAGTCATTTGC
NDMF	CACCTCATGTTTGAATTCGCC	984	[10]
NDMR	CTCTGTCACATCGAAATCGC
IMP-1F	TGAGCAAGTTATCTGTATTC	740	[11]
IMP-1R	TTAGTTGCTTGGTTTTGATG
VIM-1F	TTATGGAGCAGCAACCGATGT	920	[11]
VIM-1R	CAAAAGTCCCGCTCCAACGA
OXA-48F	TTGGTGGCATCGATTATCGG	744	[11]
OXA-48R	GAGCACTTCTTTTGTGATGGC

引物名称	序列（5'-3'）	片段（bp）	参考文献
KPCF	CATTCAAGGGCTTTCTTGCTGC	538	[9]
KPCR	ACGACGGCATAGTCATTTGC
NDMF	CACCTCATGTTTGAATTCGCC	984	[10]
NDMR	CTCTGTCACATCGAAATCGC
IMP-1F	TGAGCAAGTTATCTGTATTC	740	[11]
IMP-1R	TTAGTTGCTTGGTTTTGATG
VIM-1F	TTATGGAGCAGCAACCGATGT	920	[11]
VIM-1R	CAAAAGTCCCGCTCCAACGA
OXA-48F	TTGGTGGCATCGATTATCGG	744	[11]
OXA-48R	GAGCACTTCTTTTGTGATGGC

菌株	科室	年龄（岁）	性别	样本	IPM （μg/mL）	MEM （μg/mL）	Hodges 试验	双纸片协同试验	bla_KPC_-2 基因	bla_IMP_-4 基因
ECO1	ICU	80	男	血液	>32	>32	+	–	+	–
ECO2	神经内科	83	男	痰液	>32	>32	+	–	+	–
ECO3	儿科	9个月	男	尿液	>32	>32	+	+	–	–
ECO4	儿科	9个月	男	血液	>32	>32	+	+	–	–
ECO5	ICU	64	女	痰液	8	>32	+	+	–	+
ECO6	ICU	66	男	痰液	>32	>32	+	+	–	+
ECO7	呼吸科	70	女	痰液	>32	>32	+	+	–	–
ECO8	CCU	50	女	痰液	2	>32	+	+	–	+

菌株	科室	年龄（岁）	性别	样本	IPM （μg/mL）	MEM （μg/mL）	Hodges 试验	双纸片协同试验	bla_KPC_-2 基因	bla_IMP_-4 基因
ECO1	ICU	80	男	血液	>32	>32	+	–	+	–
ECO2	神经内科	83	男	痰液	>32	>32	+	–	+	–
ECO3	儿科	9个月	男	尿液	>32	>32	+	+	–	–
ECO4	儿科	9个月	男	血液	>32	>32	+	+	–	–
ECO5	ICU	64	女	痰液	8	>32	+	+	–	+
ECO6	ICU	66	男	痰液	>32	>32	+	+	–	+
ECO7	呼吸科	70	女	痰液	>32	>32	+	+	–	–
ECO8	CCU	50	女	痰液	2	>32	+	+	–	+

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