重组人癌胚抗原的原核表达及其在质控品中的应用

doi:10.3969/j.issn.1673-8640.2016.09.020

摘要/Abstract

摘要：

目的原核表达人癌胚抗原（CEA）,并将重组蛋白作为原材料应用在质控品的开发中。方法利用基因工程方法构建原核表达载体pCold1-cea,通过大肠埃希菌 BL21 （DE3）进行原核表达得到重组人癌胚抗原（rhCEA）。结果得到了rhCEA的包涵体,经纯化及透析复性后得到可溶的、具有免疫活性形式的重组蛋白,并将其利用在质控品的研制中。研制出的质控品在Abbott平台上的检测结果为：高值235.35 ng/mL,中值68.04 ng/mL,低值11.97 ng/mL;在Roche平台上的检测结果为：高值32.27 ng/mL,中值7.99 ng/mL,低值1.35 ng/mL;在Wondfo平台上的检测结果为：高值5 ng/mL,中值和低值未能检出。结论原核表达的rhCEA在不同检测平台上的检测结果相差较大。rhCEA质控品更适用于Abbott平台,而不适合于其他2种平台。

关键词: 原核表达, 癌胚抗原, 包涵体, 质控品

Abstract:

Objective To use prokaryotic cell to express human carcinoembryonic antigen（CEA）,and use it in the development of quality control materials. Methods Gene engineering methods were used to construct prokaryotic expression vector pCold1-cea,and the vector was transferred into Escherichia coli BL21（DE3） to express recombinant human carcinoembryonic antigen（rhCEA）. Results The inclusion bodies of rhCEA were formed in Escherichia coli BL21（DE3） after purification and refolding,which was used into the preparation of quality control materials. The results of quality control materials on Abbott platform were 235.35 ng/mL for high level,68.04 ng/mL for middle level and 11.97 ng/mL for low level. The results on Roche platform were 32.27 ng/mL,7.99 ng/mL and 1.35 ng/mL for high,middle and low levels,respectively. The results on Wondfo platform were 5 ng/mL for high level,and the results for middle and low levels had not been determined. Conclusions Quality control materials prepared by rhCEA have been analyzed in different analysis systems with obvious determination results. The quality control materials are more suitable for Abbott platform than the other 2 platforms.

Key words: Prokaryotic expression, Carcinoembryonic antigen, Inclusion bodies, Quality control materials

中图分类号:

R446.1

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图/表 6

图1 重组质粒pCold1-cea的酶切鉴定注：1为重组质粒被BamHⅠ和HindⅢ酶切后的结果;2为重组质粒pCold1-cea;M为DNA Marker

图2 原核表达rhCEA蛋白的分析及检测注：（a）为目的蛋白表达情况的SDS-PAGE分析,菌株BL21（DE3） pCold1-cea经诱导培养后利用超声进行破碎,分别对破碎后的沉淀（泳道1）、上清（泳道2）、诱导后的菌体总蛋白（泳道3）、未诱导的菌体总蛋白（泳道4）等进行分析;（b）为Western blotting检测目的蛋白的表达,C为BL21（DE3）菌株经诱导培养后的菌体总蛋白,作为阴性对照;5为菌株BL21（DE3） pCold1-cea经诱导培养后的菌体总蛋白;M为预染蛋白Marker;箭头所指为rhCEA重组蛋白的位置

图3 已纯化rhCEA的SDS-PAGE检测注：1为纯化后的rhCEA蛋白;M为蛋白Marker

表1 rhCEA质控品37 ℃稳定性检测结果

37 ℃处理时间（d）	浓度水平（ng/mL）
37 ℃处理时间（d）	低	中	高
0^*	11.97	68.04	235.35
3	11.45	68.76	237.16
5	11.82	67.54	233.79
7	12.17	66.83	229.39
9	11.37	67.42	224.53
11	11.44	67.73	227.47

表2 rhCEA质控品开瓶稳定性检测结果

25 ℃处理时间（h）	浓度水平（ng/mL）
25 ℃处理时间（h）	低	中	高
0	11.97	68.04	235.35
4	11.25	68.38	236.13
8	11.43	67.54	233.97
24	11.01	68.06	233.79
48	11.26	67.89	234.34
96	10.63	67.92	232.45

表3 rhCEA质控品及朗道免疫复合质控品在不同平台上的检测结果

检测平台	rhCEA质控品浓度水平（ng/mL）			朗道免疫复合质控品浓度水平（ng/mL）
检测平台	低	中	高	低	中	高
Abbott	11.97	68.04	235.35	3.53	22.10	50.70
Roche	1.35	7.99	32.27	2.73	16.90	37.70
Wondfo	…	…	5.00	3.70	29.30	70.50

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