不同保存方式对流式细胞术检测阵发性睡眠性血红蛋白尿症室间质量评价样本稳定性的影响

doi:10.3969/j.issn.1673-8640.2024.11.004

检验医学 ›› 2024, Vol. 39 ›› Issue (11): 1048-1052.DOI: 10.3969/j.issn.1673-8640.2024.11.004

不同保存方式对流式细胞术检测阵发性睡眠性血红蛋白尿症室间质量评价样本稳定性的影响

赵强¹, 许秀文², 韩姣姣¹, 宋颖¹, 缪颖波¹, 诸佩超¹, 周维¹, 林诗旸², 童兰斐², 车怡鸣², 金磊², 徐翀¹()

1.上海市临床检验中心临床血液体液学研究室，上海 200126
2.上海健康医学院医学技术学院，上海 200126

收稿日期:2024-02-01 修回日期:2024-05-09 出版日期:2024-11-30 发布日期:2024-11-29
通讯作者: 徐翀
作者简介:徐翀，E-mail：xuchong@sccl.org.cn。
赵强，男，1991年生，学士，初级检验技师，主要从事临床实验室质量管理工作。
基金资助:
上海市卫生健康委员会科研项目(20214Y0482);上海市卫生健康委员会科研项目(202140386);上海健康医学院大学生创新创业活动计划创新训练项目(S202210262036)

Effect of different preservation methods on stability of samples in external quality assessment of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria by flow cytometry

ZHAO Qiang¹, XU Xiuwen², HAN Jiaojiao¹, SONG Ying¹, MIAO Yingbo¹, ZHU Peichao¹, ZHOU Wei¹, LIN Shiyang², TONG Lanfei², CHE Yiming², JIN Lei², XU Chong¹()

1. Shanghai Center for Clinical Laboratory，Shanghai 200126，China
2. Shanghai University of Medicine and Health Science，Shanghai 200126，China

Received:2024-02-01 Revised:2024-05-09 Online:2024-11-30 Published:2024-11-29
Contact: XU Chong

摘要/Abstract

摘要：

目的分析不同保存方式对流式细胞术检测阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）室间质量评价（EQA）样本稳定性的影响，为建立PNH流式细胞术检测的EQA体系奠定基础。方法收集9例PNH阳性新鲜乙二胺四乙酸抗凝血液样本。将每例样本混匀后分成4份，其中3份分别使用国产细胞保存液（A组）、进口细胞保存液（B组）、枸橼酸-枸橼酸钠-葡萄糖（ACD）细胞保存液（C组）进行处理；1份作为对照，不添加细胞保存液（D组）。将处理后的样本充分混匀，每组再各分为5份，分别于2~6 ℃环境中保存1、3、5、7、14 d时，采用美国临床实验室标准化协会（CLSI）H52-A2文件推荐的规范化方法进行流式细胞检测，以确定不同保存方式的样本稳定性。结果与2~6 ℃环境保存1 d比较，A组、B组、D组保存3、5、7、14 d红细胞PNH克隆比例均呈现下降趋势（P<0.05），C组不同保存时间红细胞PNH克隆比例差异无统计学意义（P>0.05）。B组、C组白细胞PNH克隆比例（粒细胞和单核细胞）较稳定；A组、D组保存7、14 d与保存1 d比较，差异有统计学意义（P<0.05）；A组、D组保存3、5 d，B组、C组保存3、5、7、14 d与保存1 d比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。结论在PNH克隆检测中，无论红细胞PNH克隆还是白细胞PNH克隆，用ACD保存样本，均可以满足14 d内EQA样本稳定的要求，能最大限度确保样本的稳定性。

关键词: 阵发性睡眠性血红蛋白尿症, 室间质量评价, 样本, 稳定性

Abstract:

Objective To investigate the effect of different preservation methods on the stability of samples in external quality assessment （EQA）of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria（PNH）by flow cytometry，and to lay the foundation for establishing an EQA system for PNH flow cytometry determination. Methods Totally，9 PNH positive fresh ethylenediaminetetracetic acid anticoagulated samples were collected. For each sample，the sample was mixed and then classified into 4 parts. The 3 parts of them were treated with 3 different cell preservation solutions，domestic company's cell preservation solution（Group A），foreign company's cell preservation solution（Group B）and acid-citrate-dextrose（ACD）cell preservation solution （Group C）. The remaining 1 part was used as control without adding cell preservation solution （Group D）. After the samples were treated，they were thoroughly mixed and divided into 5 parts and placed at 2-6℃. The sample stability under different preservation methods for 1，3，5，7 and 14 d was determined by standard flow cytometry recommended by the Clinical and Laboratory Standards Institute（CLSI） H52-A2. Results Compared with that at 2-6℃ for 1 d，the red blood cell PNH clone ratio exhibited a decreasing trend in Group A，B and D at 3，5，7 and 14 d（P<0.05），while Group C showed no statistical significance（P>0.05）. The white blood cell PNH clone ratio remained stable in Group B and C. There was statistical significance between 7，14 d and 1 d for Group A and D（P<0.05），and there was no statistical significance for Group A and D at 3 and 5 d as well as for Group B and C at 3，5，7 and 14 d compared to 1 d （P>0.05）. Conclusions In PNH determination，whether it is red blood cell PNH clone or white blood cell PNH clone，the samples with ACD preservation can meet the requirement of EQA sample stability within 14 d，ensuring the sample stability to the maximum extent possible.

Key words: Paroxysmal nocturnal hemoglobinuria, External quality assessment, Sample, Stability

中图分类号:

R446.1

赵强, 许秀文, 韩姣姣, 宋颖, 缪颖波, 诸佩超, 周维, 林诗旸, 童兰斐, 车怡鸣, 金磊, 徐翀. 不同保存方式对流式细胞术检测阵发性睡眠性血红蛋白尿症室间质量评价样本稳定性的影响[J]. 检验医学, 2024, 39(11): 1048-1052.

ZHAO Qiang, XU Xiuwen, HAN Jiaojiao, SONG Ying, MIAO Yingbo, ZHU Peichao, ZHOU Wei, LIN Shiyang, TONG Lanfei, CHE Yiming, JIN Lei, XU Chong. Effect of different preservation methods on stability of samples in external quality assessment of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria by flow cytometry[J]. Laboratory Medicine, 2024, 39(11): 1048-1052.

图/表 8

参考文献 11

[1]	中华医学会血液学分会红细胞疾病(贫血)学组. 阵发性睡眠性血红蛋白尿症诊断与治疗中国专家共识[J]. 中华血液学杂志, 2013, 34(3):276-279.
[2]	Clinical and Laboratory Standards Institute,中华医学会血液学分会红细胞学组. Red blood cell diagnostic testing using flow cytometry[S]. H52-A2,CLSI, 2014.
[3]	中国生物工程学会细胞分析专业委员会, 中国免疫学会血液免疫分会临床流式细胞术学组,中华医学会血液学分会红细胞学组. 阵发性睡眠性血红蛋白尿症流式细胞术检测中国专家共识(2021年版)[J]. 中华血液学杂志, 2021, 42(4):281-287.
[4]	中华人民共和国中央人民政府. 中华人民共和国国务院令第739号医疗器械监督管理条例[EB/OL]. (2021-02-09)[2021-06-01]. https://www.gov.cn/gongbao/content/2021/content_5595920.htm.
[5]	袁晓英, 王亚哲, 石韦华, 等. 流式检测PNH克隆的方法学探讨及临床筛检和意义[J]. 中国生物工程杂志, 2019, 39(9):33-40.
[6]	中华人民共和国国家卫生健康委员会. 卫医发〔2006〕73号医疗机构临床实验室管理办法[EB/OL].(2006-02-27)[2023-02-27]. http://www.nhc.gov.cn/wjw/gfxwj/201304/f4d5cbc861fd43bb928d6ea124f87a19.shtml.
[7]	FLETCHER M, WHITBY L, WHITBY A, et al. Current international flow cytometric practices for the detection and monitoring of paroxysmal nocturnal haemoglobinuria clones:a UK NEQAS survey[J]. Cytometry B Clin Cytom, 2017, 92(4):266-274.
[8]	RICHARDS S J, WHITBY L, CULLEN M J, et al. Development and evaluation of a stabilized whole-blood preparation as a process control material for screening of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria by flow cytometry[J]. Cytometry B Clin Cytom, 2009, 76(1):47-55.
[9]	吴丽娟. 流式细胞术临床应用[M]. 北京: 人民卫生出版社, 2020.
[10]	DIKS A M, BONROY C, TEODOSIO C, et al. Impact of blood storage and sample handling on quality of high dimensional flow cytometric data in multicenter clinical research[J]. J Immunol Methods, 2019,475:112616.
[11]	SĘDEK Ł, KULIS J, SŁOTA Ł, et al. The influence of fixation of biological samples on cell count and marker expression stability in flow cytometric analyses.[J]. Cent Eur J Immunol, 2020, 45(2):206-213. DOI PMID

组别	保存1 d	保存3 d	保存5 d	保存7 d	保存14 d
A组	70.401±34.744	64.198±33.884*	65.523±34.358*	61.690±32.185*	54.649±32.377*
B组	65.200±33.539	51.331±29.314*	47.683±29.440*	38.931±26.266*	29.686±19.375*
C组	57.112±43.088	57.644±43.952	52.868±42.016	53.254±42.226	51.588±39.418
D组	70.473±34.238	62.960±33.352*	60.210±31.797*	51.048±27.943*	35.708±20.655*

组别	保存1 d	保存3 d	保存5 d	保存7 d	保存14 d
A组	70.401±34.744	64.198±33.884*	65.523±34.358*	61.690±32.185*	54.649±32.377*
B组	65.200±33.539	51.331±29.314*	47.683±29.440*	38.931±26.266*	29.686±19.375*
C组	57.112±43.088	57.644±43.952	52.868±42.016	53.254±42.226	51.588±39.418
D组	70.473±34.238	62.960±33.352*	60.210±31.797*	51.048±27.943*	35.708±20.655*

组别	保存1 d	保存3 d	保存5 d	保存7 d	保存14 d
A组	66.977±35.867	67.220±36.010	67.337±35.998	65.227±35.336*	63.278±34.394*
B组	66.213±35.563	67.011±35.854	66.769±35.811	66.781±35.745	65.093±34.928
C组	54.104±45.767	54.352±46.212	53.872±46.047	53.286±45.640	53.858±46.278
D组	67.168±36.032	66.666±35.753	66.964±36.032	65.137±35.504*	63.106±34.604*

组别	保存1 d	保存3 d	保存5 d	保存7 d	保存14 d
A组	66.977±35.867	67.220±36.010	67.337±35.998	65.227±35.336*	63.278±34.394*
B组	66.213±35.563	67.011±35.854	66.769±35.811	66.781±35.745	65.093±34.928
C组	54.104±45.767	54.352±46.212	53.872±46.047	53.286±45.640	53.858±46.278
D组	67.168±36.032	66.666±35.753	66.964±36.032	65.137±35.504*	63.106±34.604*

组别	保存1 d	保存3 d	保存5 d	保存7 d	保存14 d
A组	65.164±33.305	64.683±33.291	65.077±33.650	60.107±31.268*	59.456±31.363*
B组	60.230±31.482	61.666±32.723	61.696±32.912	60.606±32.756	59.884±31.603
C组	53.612±42.901	52.660±42.252	52.996±42.055	51.680±41.086	51.124±41.849
D组	63.106±34.604	63.781±33.800	62.680±33.389	57.080±32.478*	56.903±33.966*

不同保存方式对流式细胞术检测阵发性睡眠性血红蛋白尿症室间质量评价样本稳定性的影响

Effect of different preservation methods on stability of samples in external quality assessment of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria by flow cytometry

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[1]	钱诚凯, 陈蓉. 2017—2022年临床微生物室间质量评价结果分析[J]. 检验医学, 2024, 39(2): 189-191.
[2]	马艳, 周春妹, 黄声雷, 王蓓丽, 潘柏申, 郭玮. 24 h卫星血培养可改进急诊病原微生物培养流程[J]. 检验医学, 2024, 39(10): 993-998.
[3]	安崇文, 陈剑, 逄璐, 许冬. 免疫固定电泳检测室内质量控制样品的研制和评价[J]. 检验医学, 2024, 39(1): 37-42.
[4]	杨雪, 朱俊, 蒋玲丽, 王青, 胡晓波. 上海地区9种新型冠状病毒核酸检测试剂盲样检测结果一致性分析[J]. 检验医学, 2023, 38(8): 776-780.
[5]	杜晶辉, 贺鑫, 刘晶, 刘瑞岩, 鲍志军, 王俊, 赵岩, 雷曜荣, 刘旻, 刘旭. 新型冠状病毒核酸检测7种振荡混匀方法效果评价[J]. 检验医学, 2023, 38(7): 680-685.
[6]	张为民, 李婷, 张琛, 谢楠, 赵飞, 吴霞, 孟庆昊, 李敏, 高选, 杨斯桀. Youden图在精子浓度室间质量评价中的应用[J]. 检验医学, 2023, 38(2): 167-171.
[7]	刘庆阳, 袁建明, 夏进军, 姜风英, 王秋波, 王晓明. 基于GEO数据库和临床样本验证CXCL9作为类风湿关节炎生物标志物的研究[J]. 检验医学, 2023, 38(12): 1121-1129.
[8]	周维, 诸佩超, 宋颖, 缪颖波, 赵强, 徐翀. 抗Xa因子活性室间质量评价调查品制备及应用[J]. 检验医学, 2023, 38(12): 1183-1185.
[9]	郭明日, 李玉明, 李妍, 孙海柏. 微阵列芯片法和多同源基因序列测序在非结核分枝杆菌菌种鉴定中的差异[J]. 检验医学, 2023, 38(10): 909-914.
[10]	张敏敏, 陈蓉, 王庆忠, 徐蓉, 刘学杰, 崔琳, 罗云桃, 夏启航, 钱诚凯, 王敬华. 沙眼衣原体室间质量控制质控品的制备及其应用[J]. 检验医学, 2023, 38(1): 78-80.
[11]	褚敏君, 李小娟, 黄海林, 李珏, 麻明彪, 杜廷义, 王海平. 延迟放瓶对2种自动化血培养系统苛养菌培养的影响[J]. 检验医学, 2022, 37(3): 209-212.
[12]	袁应选, 袁琳, 汪珍, 陈超. 化学发光法检测超高值样本最佳稀释比例的获取方法[J]. 检验医学, 2022, 37(3): 246-248.
[13]	邓山鹰, 裴雨晴, 张春莹, 谢恒, 蒙强, 马莹. 2013—2020年四川大学华西医院寄生虫形态学室间质量评价结果分析[J]. 检验医学, 2022, 37(2): 188-193.
[14]	杨雪, 居漪, 欧元祝, 朱宇清, 徐翀, 蒋玲丽, 王青, 周靖. 上海市检验结果互认定量项目室间质量评价结果分析[J]. 检验医学, 2022, 37(12): 1129-1134.
[15]	张琛, 李婷, 孟庆昊, 谢楠, 张为民, 赵飞, 李敏, 高选, 杨斯桀. 以丙三醇为稳定剂的精浆检测质控品性能评价[J]. 检验医学, 2022, 37(12): 1200-1203.