重型β- 地中海贫血患儿异基因造血干细胞移植术后淋巴细胞亚群重建分析

doi:10.3969/j.issn.1673-8640.2019.12.002

摘要/Abstract

摘要：

目的动态监测重型β-地中海贫血患儿异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）术前及术后第1、2、3、6和12个月淋巴细胞亚群比例的变化,探讨淋巴细胞的恢复情况及重建特点。方法选取行allo-HSCT的27例重型β-地中海贫血患儿,其中人类白细胞抗原（HLA）全相合移植术20例, HLA不全相合移植术7例。采用流式细胞术（FCM）动态监测患者移植前及术后1年内CD3⁺T细胞、CD3⁺CD4⁺T细胞、CD3⁺CD8⁺T细胞、CD4⁺/CD8⁺比值、CD19⁺B细胞及CD16⁺CD56⁺自然杀伤（NK）细胞比例的变化。结果与allo-HSCT术前比较,重型β-地中海贫血患儿术后CD16⁺CD56⁺NK细胞比例恢复最快,术后第1、2、3、6个月均高于术前（P<0.05）,第12个月恢复至术前水平（P>0.05）。CD3⁺T细胞比例术后第1个月与术前比较差异无统计学意义（P>0.05）,第2个月起降低且低于术前（P<0.01）,第12个月仍低于术前（P<0.01）。CD3⁺CD8⁺T细胞比例术后第1个月明显高于术前（P<0.01）,随后逐渐下降,至术后第12个月时仍高于术前（P<0.05）。CD3⁺CD4⁺T细胞比例术后明显低于术前（P<0.01）,且呈缓慢回升趋势,至术后第12个月仍明显低于术前（P<0.01）。CD4⁺/CD8⁺比值长期倒置,虽然呈缓慢上升趋势,但仍明显低于术前（P<0.01）。CD19⁺B细胞比例术后第1个月明显低于术前（P<0.01）,术后第2个月恢复至术前水平（P>0.05）,术后第6个月和第12个月明显高于术前（P<0.01、P<0.05）。术前及术后同一时间点男性、女性患儿之间及HLA全相合移植与HLA不全相合移植之间各淋巴细胞亚群比例差异均无统计学意义（P>0.05）。结论重型β-地中海贫血患儿allo-HSCT术后淋巴细胞亚群的免疫重建恢复顺序依次为CD16⁺CD56⁺NK细胞、CD3⁺CD8⁺T细胞、CD19⁺B细胞、CD3⁺T细胞、CD3⁺CD4⁺T细胞。

关键词: 淋巴细胞亚群, 异基因造血干细胞移植, 免疫功能重建, 儿童, 重型β-地中海贫血;

Abstract:

Objective To monitor the development of lymphocyte subsets on the 1st,2nd,3rd,6th and 12th months dynamically after allogeneic hematopoetic stem cell transplantation（allo-HSCT） in children with β-mediterranean anemia,and to observe the immune reconstitution and characteristic of lymphocyte subsets. Methods A total of 27 patients with severe β-mediterranean anemia who underwent allo-HSCT were enrolled. Among them,20 cases received human leukocyte antigen（HLA） matched transplantation,and 7 cases received HLA mismatched transplantation. By flow cytometry,the percentage changes of CD3⁺T cells,CD3⁺CD4⁺T cells,CD3⁺CD8⁺T cells,CD4⁺/CD8⁺ratio,CD19⁺B cells and CD16⁺CD56⁺ natural killer（NK） cells were monitored dynamically in 1 year. Results CD16⁺CD56⁺ NK cells showed the fastest recovery,the percentages on the 1st,2nd,3rd and 6th months were higher than those of pre-operation（P<0.05）,and it returned to the percentages of pre-operation on the 12th month（P>0.05）. The percentage of CD3⁺T cells had no statistical significance on the 1st month compared to pre-operation（P>0.05）,but it started to decrease on the 2nd month（P<0.01）,and on the 12th month it was still lower than that of pre-operation（P<0.01）. The percentage of CD3⁺CD8⁺ T cells on the 1st month was higher than that of pre-operation（P<0.01）,and then it started to decrease but still high on the 12th month（P<0.05）. The percentage of CD3⁺CD4⁺T cells was lower than that of pre-operation（P<0.01）,showing a trend of slow recovery,and was still lower than that of pre-operation,even on the 12th month（P<0.01）. CD4⁺/CD8⁺ ratio inverted in the long term,but it was still lower than that of pre-operation although it continued to show increase（P<0.01）. CD19⁺ B cells decreased on the 1st month（P<0.01）then recovered after the 2nd month（P>0.05）,which were higher than those of pre-operation at the 6th and 12th months（P<0.01,P<0.05）. The immune reconstitution had no statistical significance at each time point between male and female patients（P>0.05）,and so did HLA matched transplantation and mismatched transplantation（P>0.05）. Conclusions The recovery of lymphocyte subsets after β-mediterranean anemia allo-HSCT in children following the regulation：CD16⁺CD56⁺ NK cells, CD3⁺CD8⁺ T cells,CD19⁺ B cells,CD3⁺ T cells and CD3⁺CD4⁺ T cells.

Key words: Lymphocyte subset, Allogeneic hematopoetic stem cell transplantation, Immune reconstitution, Children, Severe β-mediterranean anemia;

中图分类号:

R446.1

陈诗杨, 付笑迎, 徐刚, 林镇湖, 罗美珠, 麦惠容, 陈运生, 刘四喜. 重型β- 地中海贫血患儿异基因造血干细胞移植术后淋巴细胞亚群重建分析[J]. 检验医学, 2019, 34(12): 1066-1071.

CHEN Shiyang, FU Xiaoying, XU Gang, LIN Zhenhu, LUO Meizhu, MAI Huirong, CHEN Yunsheng, LIU Sixi. Monitoring lymphocyte subsets after β-mediterranean anemia allogeneic hematopoetic stem cell transplantation in children[J]. Laboratory Medicine, 2019, 34(12): 1066-1071.

图/表 3

参考文献 16

[1]	徐宏贵,方建培. 造血干细胞移植治疗β地中海贫血[J]. 中国实用儿科杂志,2014,29(11):818-822.
[2]	许吕宏,方建培. 儿童血液疾病研究进展[J]. 中国实用儿科杂志,2013,28(5):344-346.
[3]	张瀚文,朱宝生. 地中海贫血的治疗进展及预防[J]. 中国妇幼保健,2016,31(3):666-668.
[4]	李华晖. 重型地中海贫血患者同胞造血干细胞移植后移植物抗宿主病相关危险因素分析[D]. 南宁:广西医科大学,2017.
[5]	LI C,WU X,FENG X,et al.A novel conditioning regimen improves outcomes in β-thalassemia major patients using unrelated donor peripheral blood stem cell transplantation[J]. Blood,2012,120(19):3875-3881.
[6]	OEVERMANN L,LANG P,FEUCHTINGER T,et al.Immune reconstitution and strategies for rebuilding the immune system after haploidentical stem cell transplantation[J]. Ann N Y Acad Sci,2012,1266:161-170.
[7]	杨楠,谷振阳,高春记. 造血干细胞移植后自然杀伤细胞的重建及其临床意义[J]. 解放军医学院学报,2016,37(11):1186-1189.
[8]	谭亚敏. 异基因造血干细胞移植后急性移植物抗宿主病防治策略及其关键T细胞和细胞因子研究[D]. 杭州:浙江大学,2014.
[9]	SCHLENKE P,SHEIKHZADEH S,WEBER K,et al.Immune reconstitution and production of intracellular cytokines in T lymphocyte populations following autologous peripheral blood stem cell transplantation[J]. Bone Marrow Transplant,2001,28(3):251-257.
[10]	卫蓓文,唐暐,彭奕冰,等. 全相合异基因造血干细胞移植后免疫重建的研究[J]. 检验医学,2014,29(9):925-929.
[11]	WIDMER C C,BALABANOV S,SCHANZ U,et al.Transient paraproteinemia after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation is an underexplored phenomenon associated with graft versus host disease[J]. Oncotarget,2017,8(63):106333-106341.
[12]	DIETZ A C,WAYNE A S.Cells to prevent/treat relapse following allogeneic stem cell transplantation[J]. Hematology Am Soc Hematol Educ Program,2017,2017(1):708-715.
[13]	陈纯,魏菁,方建培,等. 同胞供者全相合脐血移植治疗重型β地中海贫血的细胞免疫重建分析[J]. 中国免疫学杂志,2008,24(10):896-898.
[14]	林遐. 异基因造血干细胞移植术后中枢T细胞免疫重建的初步研究[D]. 广州:南方医科大学,2015.
[15]	黄炎青,杨益莲,丁家华,等. 造血干细胞移植后患者淋巴细胞免疫重建的研究[J]. 现代医学,2015,43(6):732-736.
[16]	朱明霞,万文丽,李海申,等. 造血干细胞移植后的早期免疫重建[J]. 北京大学学报(医学版),2016,48(3):515-522.

时间点	例数	CD3⁺ T细胞	CD3⁺CD4⁺ T细胞	CD3⁺CD8⁺ T细胞	CD4⁺/CD8⁺ 比值	CD19⁺ B细胞	CD16⁺CD56⁺ NK细胞
术前	27	69.31±11.74	37.53±8.88	27.44±11.43	1.42（1.16~1.96）	18.30（11.50~21.88）	12.30±6.94
术后第1个月	27	71.44±7.97	14.62±8.58^**	52.78±19.93^**	0.28（0.15~0.42）^**	2.17（0.54~20.34）^**	17.48±9.53^*
术后第2个月	27	56.75±16.79^**	11.53±5.58^**	41.65±15.50^**	0.24（0.16~0.43）^**	16.99（4.57~28.60）	22.81±10.68^**
术后第3个月	27	54.26±17.16^**	12.46±4.92^**	36.14±15.16^**	0.30（0.24~0.44）^**	18.00（8.50~42.70）	20.50±8.14^**
术后第6个月	27	54.10±14.39^**	16.06±5.95^**	34.61±14.04^*	0.44（0.30~0.83）^**	30.20（10.45~36.03）^**	17.57±7.48^**
术后第12个月	27	60.89±11.58^**	22.49±6.16^**	34.93±12.47^*	0.71（0.46~1.00）^**	23.10（15.50~32.93）^*	13.74±6.06
统计值		7.030	39.885	6.500	68.418	31.699	6.326
P值		0.001	<0.001	0.001	<0.001	<0.001	0.002

时间点	例数	CD3⁺ T细胞	CD3⁺CD4⁺ T细胞	CD3⁺CD8⁺ T细胞	CD4⁺/CD8⁺ 比值	CD19⁺ B细胞	CD16⁺CD56⁺ NK细胞
术前	27	69.31±11.74	37.53±8.88	27.44±11.43	1.42（1.16~1.96）	18.30（11.50~21.88）	12.30±6.94
术后第1个月	27	71.44±7.97	14.62±8.58^**	52.78±19.93^**	0.28（0.15~0.42）^**	2.17（0.54~20.34）^**	17.48±9.53^*
术后第2个月	27	56.75±16.79^**	11.53±5.58^**	41.65±15.50^**	0.24（0.16~0.43）^**	16.99（4.57~28.60）	22.81±10.68^**
术后第3个月	27	54.26±17.16^**	12.46±4.92^**	36.14±15.16^**	0.30（0.24~0.44）^**	18.00（8.50~42.70）	20.50±8.14^**
术后第6个月	27	54.10±14.39^**	16.06±5.95^**	34.61±14.04^*	0.44（0.30~0.83）^**	30.20（10.45~36.03）^**	17.57±7.48^**
术后第12个月	27	60.89±11.58^**	22.49±6.16^**	34.93±12.47^*	0.71（0.46~1.00）^**	23.10（15.50~32.93）^*	13.74±6.06
统计值		7.030	39.885	6.500	68.418	31.699	6.326
P值		0.001	<0.001	0.001	<0.001	<0.001	0.002

组别	例数	CD3⁺ T细胞	CD3⁺CD4⁺ T细胞	CD3⁺CD8⁺ T细胞	CD4⁺/CD8⁺ 比值	CD19⁺ B细胞	CD16⁺CD56⁺ NK细胞
术前
HLA全相合	20	66.78±11.45	36.48±9.94	26.21±12.68	1.49（1.17~2.14）	19.05（11.05~25.24）	13.19±7.39
HLA不全相合	7	76.55±9.94	40.54±3.85	30.94±6.16	1.36（1.16~1.54）	15.22（11.50~18.34）	9.75±5.05
术后
第1个月
HLA全相合	20	69.34±18.37	15.18±8.59	49.38±20.17	0.27（0.16~0.61）	2.92（0.56~26.07）	18.40±9.78
HLA不全相合	7	77.02±17.11	13.12±9.18	61.85±17.64	0.28（0.05~0.38）	1.17（0.46~20.35）	15.00±9.18
组别	例数	CD3⁺ T细胞	CD3⁺CD4⁺ T细胞	CD3⁺CD8⁺ T细胞	CD4⁺/CD8⁺ 比值	CD19⁺ B细胞	CD16⁺CD56⁺ NK细胞
第2个月
HLA全相合	20	55.87±16.05	12.23±6.10	39.68±14.45	0.26（0.18~0.44）	17.70（4.83~32.92）	22.88±11.16
HLA不全相合	7	59.26±19.89	9.53±3.30	47.27±18.15	0.22（0.11~0.43）	15.88（0.60~22.90）	22.59±9.98
第3个月
HLA全相合	20	55.52±15.54	12.77±5.45	35.89±13.87	0.28（0.24~0.44）	17.59（6.61~36.04）	21.09±8.64
HLA不全相合	7	50.65±22.13	11.53±3.06	36.83±19.63	0.33（0.18~0.67）	29.14（8.50~53.22）	18.80±6.80
第6个月
HLA全相合	20	54.26±12.31	17.04±6.20	33.32±11.85	0.46（0.33~0.90）	30.03（17.88~35.96）	17.33±7.41
HLA不全相合	7	53.62±20.42	13.23±4.36	38.28±19.71	0.31（0.24~0.81）	31.42（7.44~38.48）	18.25±8.23
第12个月
HLA全相合	20	57.76±9.76	21.92±5.42	31.99±10.05	0.72（0.53~0.95）	27.14（20.29~36.07）	13.70±6.57
HLA不全相合	7	69.82±12.37	24.10±8.21	43.34±15.58	0.46（0.30~1.14）	11.62（7.33~25.24）	13.86±4.76
统计值		0.004	0.958	0.084	60.000	35.000	1.017
P值		0.948	0.330	0.772	0.580	0.053	0.316

组别	例数	CD3⁺ T细胞	CD3⁺CD4⁺ T细胞	CD3⁺CD8⁺ T细胞	CD4⁺/CD8⁺ 比值	CD19⁺ B细胞	CD16⁺CD56⁺ NK细胞
术前
HLA全相合	20	66.78±11.45	36.48±9.94	26.21±12.68	1.49（1.17~2.14）	19.05（11.05~25.24）	13.19±7.39
HLA不全相合	7	76.55±9.94	40.54±3.85	30.94±6.16	1.36（1.16~1.54）	15.22（11.50~18.34）	9.75±5.05
术后
第1个月
HLA全相合	20	69.34±18.37	15.18±8.59	49.38±20.17	0.27（0.16~0.61）	2.92（0.56~26.07）	18.40±9.78
HLA不全相合	7	77.02±17.11	13.12±9.18	61.85±17.64	0.28（0.05~0.38）	1.17（0.46~20.35）	15.00±9.18
组别	例数	CD3⁺ T细胞	CD3⁺CD4⁺ T细胞	CD3⁺CD8⁺ T细胞	CD4⁺/CD8⁺ 比值	CD19⁺ B细胞	CD16⁺CD56⁺ NK细胞
第2个月
HLA全相合	20	55.87±16.05	12.23±6.10	39.68±14.45	0.26（0.18~0.44）	17.70（4.83~32.92）	22.88±11.16
HLA不全相合	7	59.26±19.89	9.53±3.30	47.27±18.15	0.22（0.11~0.43）	15.88（0.60~22.90）	22.59±9.98
第3个月
HLA全相合	20	55.52±15.54	12.77±5.45	35.89±13.87	0.28（0.24~0.44）	17.59（6.61~36.04）	21.09±8.64
HLA不全相合	7	50.65±22.13	11.53±3.06	36.83±19.63	0.33（0.18~0.67）	29.14（8.50~53.22）	18.80±6.80
第6个月
HLA全相合	20	54.26±12.31	17.04±6.20	33.32±11.85	0.46（0.33~0.90）	30.03（17.88~35.96）	17.33±7.41
HLA不全相合	7	53.62±20.42	13.23±4.36	38.28±19.71	0.31（0.24~0.81）	31.42（7.44~38.48）	18.25±8.23
第12个月
HLA全相合	20	57.76±9.76	21.92±5.42	31.99±10.05	0.72（0.53~0.95）	27.14（20.29~36.07）	13.70±6.57
HLA不全相合	7	69.82±12.37	24.10±8.21	43.34±15.58	0.46（0.30~1.14）	11.62（7.33~25.24）	13.86±4.76
统计值		0.004	0.958	0.084	60.000	35.000	1.017
P值		0.948	0.330	0.772	0.580	0.053	0.316

组别	例数	CD3⁺ T细胞	CD3⁺CD4⁺ T细胞	CD3⁺CD8⁺ T细胞	CD4⁺/CD8⁺ 比值	CD19⁺ B细胞	CD16⁺CD56⁺ NK细胞
术前
男童	16	71.68±8.43	38.33±8.59	29.11±12.70	1.48（1.36~1.80）	18.32（11.28~24.09）	10.64±3.29
女童	11	65.86±15.14	36.36±9.58	24.99±9.31	1.33（1.12~2.39）	17.98（11.50~21.88）	14.72±9.90
术后
第1个月
男童	16	73.01±15.72	15.78±9.20	53.80±18.19	0.33（0.17~0.42）	1.17（0.50~12.69）	19.96±9.23
女童	11	68.67±22.28	12.58±7.51	51.00±23.91	0.19（0.14~0.57）	10.01（0.64~31.85）	13.12±8.94
第2个月
男童	16	58.41±16.39	11.26±3.62	43.62±14.88	0.24（0.19~0.41）	16.24（6.90~23.50）	23.33±10.37
女童	11	54.33±17.86	11.91±7.83	38.77±16.65	0.24（0.13~0.50）	24.63（2.72~35.76）	22.03±11.57
第3个月
男童	16	54.04±16.48	11.81±3.90	38.51±13.99	0.29（0.23~0.44）	17.59（11.30~41.29）	20.63±6.24
女童	11	54.56±18.92	13.38±6.20	32.68±16.79	0.38（0.24~0.50）	18.50（4.36~47.99）	20.30±10.68
第6个月
男童	16	53.21±14.85	15.46±5.66	34.45±14.25	0.41（0.29~0.83）	30.91（11.24~38.14）	18.04±7.51
女童	11	55.37±14.30	16.91±6.53	34.83±14.43	0.48（0.31~0.92）	29.85（10.45~35.72）	16.87±7.74
第12个月
男童	16	62.74±9.63	22.66±6.63	36.34±11.75	0.70（0.44~0.99）	21.99（14.42~27.95）	13.75±4.57
女童	11	58.18±13.99	22.22±5.71	32.87±13.77	0.71（0.46~1.09）	29.06（18.30~39.12）	13.73±8.02
统计值		1.973	0.440	0.016	80.500	64.000	0.750
P值		0.163	0.509	0.901	0.711	0.236	0.389