毛细管电泳与MALDI-TOF/MS联用测定血清转甲状腺素蛋白的化学修饰

检验医学 ›› 2012, Vol. 27 ›› Issue (3): 185-188.

毛细管电泳与MALDI-TOF/MS联用测定血清转甲状腺素蛋白的化学修饰

张文亮

1.天津医科大学，天津 300700；2.天津大学药学科学与工程技术学院，天津 300072；3.天津医科大学第二医院检验科，天津 300211

收稿日期:2012-01-09 出版日期:2012-03-30 发布日期:2012-03-16
作者简介:张文亮，男，1973年生，学士，副主任技师，主要从事免疫学检验。

The determination of serum transthyretin chemical modification by capillary electrophoresis combined with MALDI-TOF/MS analysis

1. Tianjin Medical University, Tianjin 300700, China; 2. School of Pharmaceutical Science and Technology, Tianjin University, Tianjin 300072, China; 3. Department of Clinical Laboratory, the Second Hospital of Tianjin Medical University, Tianjin 300211, China

Received:2012-01-09 Online:2012-03-30 Published:2012-03-16

摘要/Abstract

摘要： 目的　建立一种毛细管电泳（CE）与基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱 (MALDI-TOF/MS) 联用测定血清转甲状腺素蛋白（TTR）化学修饰的方法。方法　用酶联免疫吸附法（ELISA）测定20例老年性淀粉样变（SSA）患者及20名健康体检者血清TTR浓度； CE法分离血清TTR并利用MALDI-TOF/MS测定TTR的化学修饰。结果　健康对照组及SSA组血清TTR浓度分别为0.25±0.04、（0.26±0.03）g/L，2组间差异无统计学意义（P>0.05）；MALDI-TOF/MS分析共发现4个TTR化学修饰峰，质/荷比（m/z）分别为：13 750.86±1.48、13 830.63±2.76、13 871.70±2.70、13 919.00±14.77；分别对应未修饰-TTR、磺化-TTR、半胱氨酸-TTR和半胱氨酸甘氨酸-TTR。结论　CE法分离血清TTR能够直接利用MALDI-TOF/MS测定其化学修饰，可用于临床检测血清TTR的化学修饰。

关键词: 转甲状腺素蛋白, 毛细管电泳, 质谱, 化学修饰

Abstract: Objective　To establish a combined method for analysis of serum transthyretin(TTR) chemical modification using capillary electrophoresis (CE) with matrixassisted laser desorption ionizationtimeofflight mass spectrometry (MALDI-TOF/MS) analysis. Methods　Enzymelinked immunosorbent assay (ELISA) was used to determine serum TTR in 20 senile systemic amyloidosis (SSA) patients and 20 healthy subjects. Serum TTR was separated by CE. Determination of TTR chemical modification was analyzed by MALDI-TOF/MS. Results　The levels of serum TTR was (0.25±0.04)g/L in control group and (0.26±0.03)g/L in SSA patients, and there was no significant difference between control group and SSA patients(P>0.05). The chemical modification of TTR found 4 TTR chemical modification peaks, as native-TTR ［masstocharge ratio (m/z): 13 750.86±1.48］, sul-TTR (m/z ratio: 13 830.63±2.76), cys-TTR (m/z ratio: 13 871.70±2.70) and cysgly-TTR (m/z ratio: 13 919.00±14.77) by MALDI-TOF/MS analysis. Conclusions　The combined method of CE with MALDI-TOF/MS analysis can be used directly to determine the chemical modification of TTR.

Key words: Transthyretin, Capillary electrophoresis, Mass spectrometry, Chemical modification

张文亮;宋　林;李优鑫;魏殿军;胡可胜;孙续国. 毛细管电泳与MALDI-TOF/MS联用测定血清转甲状腺素蛋白的化学修饰[J]. 检验医学, 2012, 27(3): 185-188.

ZHANG Wenliang;SONG Lin;LI Youxin;WEI Dianjun;HU Kesheng;SUN Xuguo. The determination of serum transthyretin chemical modification by capillary electrophoresis combined with MALDI-TOF/MS analysis[J]. , 2012, 27(3): 185-188.

参考文献

［1］Sun X, Ando Y, Haraoka K, et al.　Role of VLDL/chylomicron in amyloid formation in familial amyloidotic polyneuropathy［J］. Biochem Biophys Res Commun, 2003,311(2):344-350.

［2］罗　云.联合检测血清总胆汁酸和前清蛋白在肝脏疾病诊断中的应用［J］.重庆医学，2007，36（12）：1167-1168.

［3］Ueda M, Ando Y, Haraoka K, et al. Aging and transthyretin-related amyloidosis: pathologic examinations in pulmonary amyloidosis［J］. Amyloid, 2006,13(1):24-30.

［4］Munar-Ques M, Martinez-Nadal J.Finding of vascular amyloid TTR in inferior nasal concha in a patient with FAP TTRVal30Met［J］. Amyloid, 2008,15(4):272-274. 

［5］孙续国，刘金平，宋剑蝉，等.利用MALDI-TOF/MS法测定转甲状腺素蛋白的基因突变和化学修饰［J］.中华临床防治医学杂志，2010，2(1):4-7. 

［6］Ueda M, Misumi Y, Mizuguchi M, et al. SELDI-TOF mass spectrometry evaluation of variant transthyretins for diagnosis and pathogenesis of familial amyloidotic polyneuropathy［J］. Clin Chem, 2009，55(6):1223-1227.

［7］王跃国，王惠民，张　芹，等.毛细管等速电泳法分析肾病综合征患者的脂质代谢［J］.检验医学，2009,24(1):25-28.〓

［8］赵　辉，刘金平，郑　芳，等. 家族性淀粉样多发性神经性损害转甲状腺蛋白的化学修饰［J］. 第四军医大学学报，2008,29（10）:883-885.

［9］Tsuzuki T, Mita S, Maeda S, et al. Structure of the human prealbumin gene［J］. J Biol Chem, 1985，260(22): 12224-12227.

［10］Jiang X, Smith CS, Petrassi HM, et al.An engineered transthyretin monomer that is nonamyloidogenic, unless it is partially denatured［J］. Biochemistry,2001，40(38):11442-11452.

［11］Tanskanen M, Peuralinna T, Polvikoski T, et al. Senile systemic amyloidosis affects 25% of the very aged and associates with genetic variation in alpha2-macroglobulin and tau: a population-based autopsy study［J］. Ann Med, 2008，40(3):232-239.

［12］Liu L, Wang J, Liu B, et al.Serum levels of variants of transthyretin down-regulation in cholangiocarcinoma［J］. J Cell Biochem, 2008，104(3):745-755.

［13］Lim A, Prokaeva T, McComb ME, et al. Identification of S-sulfonation and S-thiolation of a novel transthyretin Phe33Cys variant from a patient diagnosed with familial transthyretin amyloidosis［J］. Protein Sci, 2003，12(8):1775-1785.

［14］Zhang Q, Kelly JW. Cys10 mixed disulfides make transthyretin more amyloidogenic under mildly acidic conditions［J］. Biochemistry，2003, 42(29): 8756-8761.

［15］Nakanishi T, Yoshioka M, Moriuchi K, et al. S-sulfonation of transthyretin is an important trigger step in the formation of transthyretin-related amyloid fibril［J］. Biochim Biophys Acta, 2010，1804(7):1449-1456.

[1]	吕娜, 李芳宁, 柏奇, 赵明亮, 李幽然, 曹妍, 翟燕红, 李娜, 曹正. 儿童全血矿物元素参考区间的建立及其与矮小症和抽动障碍的相关性[J]. 检验医学, 2025, 40(8): 742-750.
[2]	林静, 李全乐, 于婷, 王惠民, 沈敏, 屠敏敏, 陈传定, 潘荆珏, 马静霞. 血清奥卡西平、10-羟基卡马西平候选参考测量程序建立和性能评估[J]. 检验医学, 2025, 40(11): 1082-1090.
[3]	范霄宇, 李卿, 屠嘉欣, 金中淦, 虞科颖, 孙贺伟, 罗夏琳, 居漪. 电感耦合等离子体质谱在检验医学中的应用[J]. 检验医学, 2025, 40(11): 1126-1131.
[4]	方慧玲, 居漪, 欧元祝, 朱宇清, 李卿, 金中淦, 赵晓君, 范霄宇, 虞科颖. 上海地区临床实验室液相色谱串联质谱技术应用现状分析[J]. 检验医学, 2024, 39(9): 853-858.
[5]	修宁宁, 邓沛汶, 潘俊均, 卢玉玲. 紫红红球菌致血流感染1例报道[J]. 检验医学, 2024, 39(8): 820-822.
[6]	林静, 潘清清, 沈敏, 谢阳敏, 金中淦, 潘荆珏, 刘甲娟. 血清伏立康唑候选参考方法的建立和性能评价[J]. 检验医学, 2024, 39(7): 661-667.
[7]	吴昕哲, 茆海丰, 杨晋, 左春磊, 金丹婷. MALDI-TOF MS直接靶板微滴生长测定法在CRKP快速检测中的应用[J]. 检验医学, 2024, 39(6): 587-591.
[8]	段雪寒, 吴华. MALDI-TOF MS技术在临床微生物检验中的应用[J]. 检验医学, 2024, 39(4): 410-414.
[9]	李安琪, 张澍雅, 何珊娜, 陈巧巧, 吕绮, 吕婉飞, 李春仙, 王卫华, 郑琳. 血培养阳性样本快速菌种鉴定和药物敏感性分析[J]. 检验医学, 2024, 39(3): 243-248.
[10]	刘瑞广, 郭建. 医院和外界环境真菌筛查及药物敏感性分析[J]. 检验医学, 2024, 39(12): 1150-1156.
[11]	宋蓓玲, 吴炯, 胡嘉华, 王煜非. 常见血红蛋白变异体对不同糖化血红蛋白检测系统的影响[J]. 检验医学, 2024, 39(12): 1219-1223.
[12]	李西就, 周健伟, 张芹, 龙允麟, 吴英松. 滤纸干血片6种标志物UPLC-MS/MS方法的建立和性能评价[J]. 检验医学, 2023, 38(5): 446-453.
[13]	徐炜新, 陈青, 杜文永, 高燕. 睡眠障碍患者血浆代谢标志物研究[J]. 检验医学, 2023, 38(5): 454-459.
[14]	吴洁, 李增和, 陈宝荣, 孔许净. 可溯源干血片样本类固醇激素标准曲线的建立[J]. 检验医学, 2023, 38(5): 489-493.
[15]	陈榕方, 吴雁, 李德生, 朱林敏, 闫莉, 张祺. 豚鼠耳炎诺卡菌感染吸入性肺炎1例报道[J]. 检验医学, 2023, 38(4): 399-402.