血清伏立康唑候选参考方法的建立和性能评价

doi:10.3969/j.issn.1673-8640.2024.07.008

检验医学 ›› 2024, Vol. 39 ›› Issue (7): 661-667.DOI: 10.3969/j.issn.1673-8640.2024.07.008

血清伏立康唑候选参考方法的建立和性能评价

林静¹, 潘清清²(), 沈敏², 谢阳敏², 金中淦³, 潘荆珏¹, 刘甲娟⁴

1.宁波市第二医院医学实验部，浙江宁波 315010
2.美康生物科技股份有限公司参考实验室，浙江宁波 315104
3.上海市临床检验中心，上海 200126
4.国科宁波生命与健康产业研究院，浙江宁波 315010

收稿日期:2023-12-08 修回日期:2024-05-15 出版日期:2024-07-30 发布日期:2024-07-31
通讯作者: 潘清清，E-mail：qingqing.pan@nbmedicalsystem.com。
作者简介:林静，女，1988年生，硕士，工程师，主要从事药物检测工作。
基金资助:
宁波市重大科技攻关任务项目(2021Z055);宁波市重点研发计划(2023Z168);中国合格评定国家认可中心课题(2021CNAS07)

Establishment and performance evaluation of candidate reference measurement procedures for serum voriconazole

LIN Jing¹, PAN Qingqing²(), SHEN Min², XIE Yangmin², JIN Zhonggan³, PAN Jingjue¹, LIU Jiajuan⁴

1. Center for Medical Research，Ningbo No.2 Hospital，Ningbo 315010，Zhejiang，China
2. Reference Laboratory，Medical System Biotechnology Co.，Ltd.，Ningbo 315104，Zhejiang，China
3. Shanghai Center for Clinical Laboratory，Shanghai 200126，China
4. Ningbo Institute of Life and Health Industry，University of Chinese Academy of Sciences，Ningbo 315010，Zhejiang，China

Received:2023-12-08 Revised:2024-05-15 Online:2024-07-30 Published:2024-07-31

摘要/Abstract

摘要：

目的基于同位素稀释液相色谱-串联质谱（ID-LC-MS/MS）技术建立检测血清伏立康唑的候选参考方法。方法以甲醇为沉淀剂，采用蛋白沉淀法（PPT）对样本进行前处理。以伏立康唑-2H3为内标，建立基于ID-LC-MS/MS的血清伏立康唑候选参考方法。评估所建立方法的线性、定量限（LOQ）、检测限（LOD）、准确度、精密度、基质效应、稳定性。结果 ID-LC-MS/MS测定血清伏立康唑的线性范围为0.2~16.0 μg·mL^-1，定量限为0.08 μg·mL^-1，检测限为0.016 μg·mL^-1。加标回收率为97.26%~98.48%。批内变异系数（CV）<1%，批间CV<2%。相对基质效应为-1.87%~0.33%。样本分别经室温[（23±2）℃]放置4、8 h和-20 ℃反复冻融5次，经前处理后的样本在室温和自动进样器（8 ℃）分别放置4、8、12、24 h，回收率为95.63%~99.50%，检测结果稳定。相对扩展不确定度≤3.34%。结论建立了基于ID-LC-MS/MS的血清伏立康唑候选参考方法，可用于该项目的检测标准化。

关键词: 伏立康唑, 同位素稀释液相色谱-串联质谱, 参考方法

Abstract:

Objective To establish a candidate reference measurement method for serum voriconazole by isotope dilution liquid chromatography-tandem mass spectrometry （ID-LC-MS/MS）. Methods The samples were pretreated by protein precipitation （PPT） with methanol as precipitator. Using voriconazole -2H3 as internal standard，an ID-LC-MS/MS for the determination of voriconazole in serum was established. The linearity，limit of quantification （LOQ），limit of determination （LOD），accuracy，precision，matrix effect and stability were evaluated. Results The linear range of serum voriconazole was 0.2-16.0 μg·mL^-1，the limit of quantification was 0.08 μg·mL^-1，and the limit of determination was 0.016 μg·mL^-1. The recoveries were 97.26%-98.48%. The within-run coefficient of variation （CV） was <1%，and the between-run CV was < 2%. The relative matrix effect ranged from -1.87% to 0.33%. The samples were placed at room temperature [（23±2） ℃] for 4，8 h and repeatedly frozen and thawed for 5 times at -20 ℃，and the samples after pre-treatment were placed at room temperature and automatic injector （8 ℃） for 4，8，12 and 24 h，respectively. The recoveries were 95.63% - 99.50%，and the determination results were stable. The relative extended uncertainty was ≤3.34%. Conclusions A candidate reference method for the determination of serum voriconazole based on ID-LC-MS/MS has been established，which can be used for standardization.

Key words: Voriconazole, Isotope dilution liquid chromatography-tandem mass spectrometry, Reference method

中图分类号:

R978.5

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图/表 10

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项目	母离子（m/z）	子离子（m/z）	碰撞电压/ V
伏立康唑
定量	350.082	280.946	28
定性	350.082	127.000	8
伏立康唑-2H3
定量	353.060	283.917	16
定性	353.060	130.000	26

项目	母离子（m/z）	子离子（m/z）	碰撞电压/ V
伏立康唑
定量	350.082	280.946	28
定性	350.082	127.000	8
伏立康唑-2H3
定量	353.060	283.917	16
定性	353.060	130.000	26

样本编号	理论值/（μg·mL^-1）	样本数/份	测定均值/（μg·mL^-1）	平均RSN	CV/%	偏移/%
1	0.080	10	0.091 0	19	5.19	13.50
2	0.096	10	0.108 0	27	4.77	12.50
3	0.160	10	0.167 0	44	2.17	4.50

样本编号	理论值/（μg·mL^-1）	样本数/份	测定均值/（μg·mL^-1）	平均RSN	CV/%	偏移/%
1	0.080	10	0.091 0	19	5.19	13.50
2	0.096	10	0.108 0	27	4.77	12.50
3	0.160	10	0.167 0	44	2.17	4.50

样本类型	加标浓度/ （μg·mL^-1）	均值/ （μg·mL^-1）	平均回收率/%	CV/%
低浓度	0.801	0.789	98.48	0.87
中浓度	4.007	3.897	97.26	0.21
高浓度	8.010	7.847	97.96	0.27

血清伏立康唑候选参考方法的建立和性能评价

Establishment and performance evaluation of candidate reference measurement procedures for serum voriconazole

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样本类型	批内			批间
样本类型	均值/（μg·mL^-1）	s/（μg·mL^-1）	CV/%	均值/（μg·mL^-1）	s/（μg·mL^-1）	CV/%
低浓度	0.789	0.007	0.87	0.782	0.012	1.59
	0.768	0.005	0.64
	0.790	0.006	0.75
中浓度	3.897	0.008	0.21	3.956	0.052	1.32
	3.996	0.020	0.50
	3.976	0.021	0.53
高浓度	7.847	0.021	0.27	7.878	0.093	1.18
	7.805	0.060	0.77
	7.983	0.047	0.59

放置条件	理论值/（μg·mL^-1）	实测值/（μg·mL^-1）	回收率/ %
室温放置
4 h	0.801	0.784	97.88
8 h	0.801	0.778	97.13
-20 ℃下反复冻融
1次	0.801	0.775	96.75
2次	0.801	0.766	95.63
3次	0.801	0.783	97.75
4次	0.801	0.789	98.50
5次	0.801	0.773	96.50

放置条件	理论值/（μg·mL^-1）	实测值/（μg·mL^-1）	回收率/ %
室温放置
4 h	0.801	0.792	98.88
8 h	0.801	0.786	98.13
12 h	0.801	0.782	97.63
24 h	0.801	0.773	96.50
进样器（8 ℃）
4 h	0.801	0.791	98.75
8 h	0.801	0.797	99.50
12 h	0.801	0.781	97.50
24 h	0.801	0.768	95.88

项目	量值	标准不确定度	相对标准不确定度/%
A/A内标	1.091	0.009	0.82
f_c	1.000	0.002	0.20
f_m	1.000	0.013	1.30
k	0.363 38	0.001	0.28
b	-0.028 33	0	0
重复性/（μg·mL^-1）	2.90	0.009	0.31
测定均值（μg·mL^-1）		2.90
合成相对标准不确定度/%		1.67
扩展因子		2
相对扩展不确定度/%		3.34

项目	量值	标准不确定度	相对标准不确定度/%
A/A内标	4.440	0.031	0.70
fc	1.000	0.002	0.20
fm	1.000	0.013	1.30
k	0.363 38	0.001	0.28
b	-0.028 33	0	0
重复性/（μg·mL^-1）	11.74	0.049	0.42
测定均值/（μg·mL^-1）		11.74
合成相对标准不确定度/%		1.62
扩展因子		2
相对扩展不确定度/%		3.24

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