红细胞和白细胞计数参考方法的实验初探

doi:10.3969/j.issn.1673-8640.2015.06.023

摘要/Abstract

摘要： 目的

应用红细胞(RBC)和白细胞(WBC)计数参考方法,建立规范的检测平台,为开展血细胞计数正确度验证试验提供技术保障。

方法

按照国际血液学标准化委员会和中华人民共和国卫生行业标准(WS/T 245-2005)RBC和WBC计数参考方法要求,在Z2颗粒计数仪上分别使用S-CAL全血校准品、5C细胞质控品、浓度质控品、弱固定处理的新鲜全血标本和新鲜全血标本进行RBC、WBC等批内批间精密度、重合计数校正、稳定性和仪器间可比性等实验。

结果

RBC、WBC和浓度质控品批内精密度CV<1%,批间精密度符合美国临床实验室标准化委员会(CLSI) H26-A2文件的要求;Z2颗粒计数仪校正RBC和WBC的重合计数偏倚<1%;弱固定处理的新鲜全血标本RBC、WBC大多可稳定5 d以上;BECKMAN-COULTER ACT diff Ⅱ血液分析仪、BECKMAN-COULTER LH-750血液分析仪、SYSMEX K-4500血液分析仪和SYSMEX XE-2100血液分析仪测定RBC、WBC与Z2颗粒计数仪的偏倚分别为≤±2%和≤±4%。

结论

用Z2颗粒计数仪进行RBC和WBC计数的精密度、准确度、重合计数校正和弱固定处理的新鲜全血标本的稳定性均符合要求,与其他厂商的常规血液分析仪检测结果间具有可比性,为进一步开展血细胞计数正确度验证试验提供了技术保障。

关键词: 红细胞, 白细胞, 计数, 参考方法, Z2颗粒计数仪

Abstract: Objective

To investigate the reference method for red blood cell (RBC) and white blood cell (WBC) counts, and to establish standardized determination platform which will provide technical support for blood cell counting trueness verification test.

Methods

The reference method was established according to relevant documents of the International Council for Standardization in Hematology (ICSH) and the standard of the People's Republic of China (WS/T 245-2005). The S-CAL cell calibrator, 5C cell control, aperture instrument concentration control, processed whole blood and fresh whole blood samples were determined on Z2 particle counter. Parameters such as within-run and between-run coefficients of variance (CV), coincidence counting correction, stability and comparability were evaluated.

Results

The method showed that within-run CV was<1%, and between-run CV met the requirements of the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) H26-A2. The results demonstrated the biases of coincidence counting correction in RBC and WBC counts were <1%. RBC and WBC of processed fresh whole blood samples were stable after storage for above 5 d. The biases of fresh whole blood RBC and WBC between Z2 particle counter and BECKMAN-COULTER ACT diff Ⅱ, BECKMAN-COULTER LH-750, SYSMEX K-4500, SYSMEX XE-2100 hematology analyzers were ≤±2% and ≤±4%.

Conclusions

The reference method for RBC and WBC counting by Z2 particle counter has been established basically. Precision, coincidence counting correction, accuracy, stability and comparability are conformed to the requirements. It provides the technical support for blood cell counting trueness verification test.

Key words: Red blood cell, White blood cell, Counting, Reference method, Z2 particle counter

中图分类号:

R446.11

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图/表 7

表1 RBC重合计数校正的次级稀释方法

项目	稀释管1	稀释管2	稀释管3	稀释管4
次级稀释(mL)	0.02+20^*	0.04+20^*	0.06+20^*	0.08+20^*
X轴设定值(%)	25.07	50.10	75.07	100.00
细胞计数(次数)	12	6	4	3

图1 4个月的浓度质控品监测图

表3 批内精密度试验结果

项目	测定次数	$x ?$	s	CV (%)	参考方法要求
RBC(×10¹²/L)	10	4.200	0.018	0.43	<1%
WBC(×10⁹/L)	10	8.550	0.065	0.76	<1%
浓度质控品	10	1.004	0.008	0.80	<1%

表3 批内精密度试验结果

项目	测定次数	$x ?$	s	CV (%)	参考方法要求
RBC(×10¹²/L)	10	4.200	0.018	0.43	<1%
WBC(×10⁹/L)	10	8.550	0.065	0.76	<1%
浓度质控品	10	1.004	0.008	0.80	<1%

表4 批间(天间瓶间)精密度试验结果

项目批号	测定天数(d)	$x ?$	极差	CLSI H26-A2 极差要求^[3]
RBC(×10¹²/L)889700	8	5.451	0.14	≤±0.15
RBC(×10¹²/L)879300	15	4.191	0.10	≤±0.15
WBC(×10⁹/L)889700	8	9.823	0.30	≤±0.3
WBC(×10⁹/L)868100	15	3.748	0.30	≤±0.3

表4 批间(天间瓶间)精密度试验结果

项目批号	测定天数(d)	$x ?$	极差	CLSI H26-A2 极差要求^[3]
RBC(×10¹²/L)889700	8	5.451	0.14	≤±0.15
RBC(×10¹²/L)879300	15	4.191	0.10	≤±0.15
WBC(×10⁹/L)889700	8	9.823	0.30	≤±0.3
WBC(×10⁹/L)868100	15	3.748	0.30	≤±0.3

表5 RBC和WBC重合计数校正试验结果

项目	重合计数校正值	靶值	偏倚(%)	方程式
RBC(×10¹²/L)	4.139 5	4.11	0.72	Y=-0.000 26X+4.139 5
WBC(×10⁹/L)	9.032 4	9.00	0.36	Y=0.000 71X+9.032 4

表6 弱固定处理的新鲜全血RBC、WBC天间稳定性实验结果

项目	处理方式	样品号	每周开瓶次数	稳定天数	目标值^*	结果分布	偏倚分布 (%)	允许偏倚 (%)
RBC(×10¹²/L)	方式1	0	2	22	5.193 6	5.093 85.248 7	-1.92~1.06	≤±2%
	方式2	3	2	13	3.740 4	3.671 93.757 6	-1.83~0.46	≤±2%
		23	2	9	4.954 0	4.868 14.868 2	-1.74~-1.74	≤±2%
		4	1	30	4.433 9	4.359 64.488 5	-1.68~1.23	≤±2%
	方式3	26	2	15	4.425 3	4.340 34.380 5	-1.921.01	≤±2%
项目	处理方式	样品号	每周开瓶次数	稳定天数	目标值^*	结果分布	偏倚分布 (%)	允许偏倚 (%)
WBC(×10⁹/L)	方式1	0	2	5	5.431	5.4955.552	-1.19~2.24	≤±4%
	方式2	3	2	8	5.690	5.4835.898	-3.65~3.65	≤±4%
		23	2	13	9.174	8.9039.458	-2.95~3.10	≤±4%
		4	1	28	5.761	5.7565.841	-0.09~1.39	≤±4%
	方式3	26	2	6	5.922	5.881	-0.69	≤±4%

表7 4种血液分析仪检测新鲜全血RBC、WBC与Z2颗粒计数仪的可比性结果

仪器	RBC(×10¹²/L)				WBC(×10⁹/L)
仪器	样本数	与Z2的绝对误差	偏倚 (%)	允许偏倚 (%)	样本数	与Z2的绝对误差	偏倚 (%)	允许偏倚 (%)
Z2颗粒计数仪	1324				1320
ACT diffⅡ	16	-0.042	-0.94	≤±2%	17	-0.08	-1.36	≤±4%
LH-750	21	-0.012	-0.27	≤±2%	20	-0.11	-1.83	≤±4%
K-4500	24	0.032	0.73	≤±2%	13	-0.11	-1.93	≤±4%
XE-2100	13	0.042	0.95	≤±2%	13	0.06	1.05	≤±4%

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