加温灭活对SARS-CoV-2咽拭子样本核酸检测结果的影响

doi:10.3969/j.issn.1673-8640.2020.05.002

检验医学 ›› 2020, Vol. 35 ›› Issue (5): 405-408.DOI: 10.3969/j.issn.1673-8640.2020.05.002

加温灭活对SARS-CoV-2咽拭子样本核酸检测结果的影响

刘洁¹, 赵剑虹¹, 高艳¹, 韩桃利¹, 李丽¹, 孔毅², 赵焕兴³, 孙灵利¹, 王成彬²

1. 北京市朝阳区疾病预防控制中心,北京 100021
2. 中国人民解放军总医院第一医学中心检验中心,北京 100853
3. 中国人民解放军32382部队,湖北武汉 432200

收稿日期:2020-03-17 出版日期:2020-05-30 发布日期:2020-06-17
作者简介:null
作者简介:刘洁,女,1982年生,博士,副主任技师,主要从事病原微生物毒力因子和致病机制研究。赵剑虹,女,1979年生,硕士,副主任技师,主要从事临床微生物检验工作。
刘洁和赵剑虹对本研究具有同等贡献,并列为第一作者。

Influence of heating inactivation on the nucleic acid testing results of SARS-CoV-2 throat swab samples

LIU Jie¹, ZHAO Jianhong¹, GAO Yan¹, HAN Taoli¹, LI Li¹, KONG Yi², ZHAO Huanxing³, SUN Lingli², WANG Chengbin²

1. Chaoyang Center for Disease Control and Prevention,Beijing 100021,China
2. Clinical Laboratory Center,the First Medical Center of Chinese People's Liberation Army General Hospital,Beijing 100853,China
3. The People's Liberation Army of China Troop 32382,Wuhan 432200,Hubei,China

Received:2020-03-17 Online:2020-05-30 Published:2020-06-17

摘要/Abstract

摘要：

目的探讨实验室常用加温装置灭活升温时间及加温灭活对严重呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）核酸检测结果的影响。方法收集SARS-CoV-2核酸阳性咽拭子样本10例,采用标准温度计标定样本的升温曲线,计算升温时间。将每例SARS-CoV-2核酸阳性咽拭子样本采样液各分装2份,一份56 ℃灭活30 min（56 ℃灭活处理组）,另一份室温放置作为对照（未灭活处理组）。提取核酸后进行实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）扩增。结果采用空气浴方式将样本升温至56 ℃需68 min,采用水浴方式需11.5 min。56 ℃灭活处理组核酸检测结果Ct值均增加;10份未经灭活处理的SARS-CoV-2核酸阳性样本中,56 ℃处理时有8份检测结果为阳性,加温灭活处理样本中出现假阴性结果与核酸浓度低有关。结论样本达到灭活温度所需时间与升温介质有关,升温灭活会影响SARS-CoV-2核酸检测效率。

关键词: 严重呼吸综合征冠状病毒2, 灭活, 温度, 时间, 核酸检测

Abstract:

Objective To investigate the influence of heating inactivation on the nucleic acid testing results of severe acute respiratory syndrome coronavirus 2（SARS-CoV-2） throat swab samples. Methods Totally,10 throat swab samples of positive SARS-CoV-2 were collected. The standard thermometer was used to calibrate the temperature and calculate temperature rising time. Throat swab samples of positive SARS-CoV-2 were classified into 56 ℃ 30 min treatment group and untreatment group. Nucleic acid was extracted and amplified by real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction（PCR）. Results It took 68 min to heat the sample to 56 ℃ in air bath and 11.5 min in water bath. The results of PCR in 56 ℃ 30 min treatment group after heating showed that the Ct value increased. Of the 10 samples,8 samples were determined as positive in 56 ℃ 30 min treatment group. The samples with low nucleic acid concentration cannot be determined after treatment. Conclusions The heating up time depends on heating medium. Heating inactivation will affect SARS-CoV-2 nucleic acid testing results.

Key words: Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, Inactivation, Temperature, Time, Nucleic acid testing

中图分类号:

R446.1

刘洁, 赵剑虹, 高艳, 韩桃利, 李丽, 孔毅, 赵焕兴, 孙灵利, 王成彬. 加温灭活对SARS-CoV-2咽拭子样本核酸检测结果的影响[J]. 检验医学, 2020, 35(5): 405-408.

LIU Jie, ZHAO Jianhong, GAO Yan, HAN Taoli, LI Li, KONG Yi, ZHAO Huanxing, SUN Lingli, WANG Chengbin. Influence of heating inactivation on the nucleic acid testing results of SARS-CoV-2 throat swab samples[J]. Laboratory Medicine, 2020, 35(5): 405-408.

样本编号	未灭活处理			56 ℃灭活处理
样本编号	ORF1a/b基因	N 基因	E 基因	ORF1a/b基因	N 基因	E 基因
1	30.09	32.2	31.44
2	27.06	28.04	28.39
3	26.47	27.56	27.96	29.56	29.91	30.94
4	25.45	24.7	25.96	30.09	31.77	28.36
5	25.41	28.25	27.81	28.69	29.44	30.31
6	23.77	25.31	25.81	25.89	27.77	26.48
7	23.51	25.77	25.61	28.55	29.39	27.22
8	22.95	26.12	24.84	30.17	29.4	29.38
9	20.71	21.26	22.8	25.26	25.7	24.36
10	19.52	21.01	21.19	23.65	21.86	21.79

样本编号	未灭活处理			56 ℃灭活处理
样本编号	ORF1a/b基因	N 基因	E 基因	ORF1a/b基因	N 基因	E 基因
1	30.09	32.2	31.44
2	27.06	28.04	28.39
3	26.47	27.56	27.96	29.56	29.91	30.94
4	25.45	24.7	25.96	30.09	31.77	28.36
5	25.41	28.25	27.81	28.69	29.44	30.31
6	23.77	25.31	25.81	25.89	27.77	26.48
7	23.51	25.77	25.61	28.55	29.39	27.22
8	22.95	26.12	24.84	30.17	29.4	29.38
9	20.71	21.26	22.8	25.26	25.7	24.36
10	19.52	21.01	21.19	23.65	21.86	21.79

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加温灭活对SARS-CoV-2咽拭子样本核酸检测结果的影响

Influence of heating inactivation on the nucleic acid testing results of SARS-CoV-2 throat swab samples

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