氨基末端B型钠尿肽基因的克隆和原核表达载体的构建及纯化

检验医学 ›› 2005, Vol. 20 ›› Issue (05): 405-408.

氨基末端B型钠尿肽基因的克隆和原核表达载体的构建及纯化

李卫鹏%郑佐娅%王红%王从珠%杭勤%赵卫国

上海第二医科大学上海市医学检验重点试验室,上海,200023

收稿日期:2005-05-01 出版日期:2005-05-01 发布日期:2005-05-01
通讯作者: 李卫鹏

Cloning, construction and purification of recombinant human amino-terminal pro-B type natriuretic peptide

LI Weipeng%ZHENG Zuoya%WANG Hong%WANG Congzhu%HANG Qin%ZHAO Weiguo

Received:2005-05-01 Online:2005-05-01 Published:2005-05-01

摘要/Abstract

摘要： 目的克隆人氨基末端B型钠尿肽(NT-proBNP)基因,构建原核表达载体并纯化其表达蛋白.方法用聚合酶链反应(PCR)从正常成人cDNA库中扩增出人NT-proBNP基因,将其克隆进pUCm-T中测定核苷酸序列.构建大肠杆菌分泌性表达载体pGEX-4T-3-NT-proBNP,IPTG诱导表达,GSH-agarose亲和纯化该表达蛋白.结果经PCR扩增成功获得228 bp的NT-proBNP基因,测序正确,在大肠埃希菌中融合表达后,该蛋白的表达量占菌体总蛋白的23%,用SDS-PAGE和Western blot鉴定大肠埃希菌中的表达产物,显示其相对分子质量为34 600.经亲和纯化后的GST-NT-proBNP的纯度可以达到95%,得率为1.7 mg/100 ml.结论 NT-proBNP基因的克隆、表达和纯化成功,为建立NT-proBNP检测方法奠定了基础.

关键词: 氨基末端B型钠尿肽, 克隆, 构建, 纯化

中图分类号:

李卫鹏;郑佐娅;王红;王从珠;杭勤;赵卫国. 氨基末端B型钠尿肽基因的克隆和原核表达载体的构建及纯化[J]. 检验医学, 2005, 20(05): 405-408.

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