炎症相关细胞因子与Ph阴性骨髓增殖性肿瘤的相关性

doi:10.3969/j.issn.1673-8640.2021.02.009

摘要/Abstract

摘要：

目的探讨经典型骨髓增殖性肿瘤（MPN）患者血清炎症相关细胞因子[肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-1β、白细胞介素2受体（IL-2R）、IL-6、IL-8、IL-10]水平及其临床意义。方法选取50例费城染色体（Ph）阴性（Ph^-）的初诊MPN患者[MPN组,其中真性红细胞增多症（PV）16例、原发性血小板增多症（ET）25例、原发性骨髓纤维化（PMF）9例],以20名体检健康者作为正常对照组,采用化学发光法检测血清TNF-α、IL-1β、IL-2R、IL-6、IL-8及IL-10水平,采用Sanger测序法检测MPN患者JAK2及MPL基因突变,采用实时荧光聚合酶链反应（PCR）检测CALR基因突变。结果 MPN组血清TNF-α、IL-2R、IL-6和IL-8水平均显著高于正常对照组（P<0.001）,血清IL-10水平显著低于正常对照组（P<0.001）。2个组之间血清IL-1β水平差异无统计学意义（P>0.05）。PMF组血清IL-2R水平高于PV组和ET组（P<0.05）。在JAK2 V617F突变阳性患者中,PMF组血清IL-2R水平显著高于PV组和ET组（P<0.01）,血清TNF-α和IL-8水平高于ET组（P<0.05）,血清IL-6水平高于PV组（P<0.05）。骨髓纤维化分级为MF-3级的MPN患者IL-2R水平高于MF-2级患者（P<0.05）,TNF-α水平高于MF-0级患者（P<0.05）。结论 MPN患者炎症相关细胞因子（TNF-α、IL-1β、IL-2R、IL-6、IL-8及IL-10）水平异常,且在3种MPN亚型之间也存在差异,或许可作为MPN诊断分型及随访的辅助参考指标。

关键词: 肿瘤坏死因子-α, 白细胞介素1β, 白细胞介素2受体, 白细胞介素6, 白细胞介素8, 白细胞介素10, 骨髓增殖性肿瘤

Abstract:

Objective To investigate serum levels of inflammatory cytokines in patients with classical myeloproliferative neoplasms（MPN） [tumor necrosis factor-alpha（TNF-α）,interleukin-1 beta（IL-1β）,interleukin-2 receptor（IL-2R）,interleukin-6（IL-6）,interleukin-8（IL-8）,interleukin-10（IL-10）] and their clinical significance. Methods The serum levels of TNF-α,IL-1β,IL-2R,IL-6,IL-8 and IL-10 were detected by chemiluminescence immunoassay（CLIA）in 50 patients with Philadelphia chromosome-negative（Ph^-） newly diagnosed MPN [MPN group,including 16 cases of polycythemia vera（PV）,25 cases of essential thrombocytosis（ET） and 9 cases of primary myelofibrosis（PMF）] and 20 healthy volunteers（control group）. Sanger sequencing was used to detect JAK2 and MPL mutations,and CALR mutation was detected by real-time fluorescent polymerase chain reaction（PCR） in MPN patients. Results The serum levels of TNF-α,IL-2R,IL-6 and IL-8 in MPN group were significantly higher than those in control group（P<0.001）,while IL-10 level was on the contrary（P<0.001）. There was no significant difference in serum IL-1β level between the two groups（P>0.05）. IL-2R level in PMF group was higher than that in PV and ET groups（P<0.05）. Among the JAK2 V617F mutation-positive patients,IL-2R level in the PMF group was also significantly higher than that in the PV and ET groups（P<0.01）;the levels of TNF-α and IL-8 in the PMF group were higher than those in the ET group（P<0.05）;the level of IL-6 in the PMF group was higher than that of the PV group（P<0.05）. Interestingly,the level of TNF-α in MPN patients with marrow fibrosis（MF）-3 was higher than that in patients with MF-0（P<0.05） and its IL-2R level was higher than that of patients with MF-2（P<0.05）. Conclusion Inflammatory cytokines（TNF-α,IL-1β,IL-2R,IL-6,IL-8 and IL-10）are abnormally expressed in MPN patients,and there are differences in the expression among the three subtypes of MPN. Cytokine levels might become potential reference indicator for MPN diagnostic classification and follow-up.

Key words: Tumor necrosis factor-alpha, Interleukin-1 beta, Interleukin-2 receptor, Interleukin-6, Interleukin-8, Interleukin-10, Myeloproliferative neoplasms

中图分类号:

R446.1

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图/表 4

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基因名称	引物序列（5'~3'）	引物大小/bp
JAK2 V617F	F：AGCAAGCTTTCTCACAAGCA	20
	R：CTGACACCTAGCTGTGATCCTG	22
JAK2 exon12	F：TTTGGAGCAATTCATACTTTC	21
	R：ACAAAATAATTCCAATGTCAC	21
MPL W515L/K	F：CCGAAGTCTGACCCTTTTTG	20
	R：ACAGAGCGAACCAAGAATGC	20

基因名称	引物序列（5'~3'）	引物大小/bp
JAK2 V617F	F：AGCAAGCTTTCTCACAAGCA	20
	R：CTGACACCTAGCTGTGATCCTG	22
JAK2 exon12	F：TTTGGAGCAATTCATACTTTC	21
	R：ACAAAATAATTCCAATGTCAC	21
MPL W515L/K	F：CCGAAGTCTGACCCTTTTTG	20
	R：ACAGAGCGAACCAAGAATGC	20

组别	例数	TNF-α/ （pg/mL）	IL-1β/ （pg/mL）	IL-2R/ （U/mL）	IL-6/ （pg/mL）	IL-8/ （pg/mL）	IL-10/ （pg/mL）
MPN组	50	16.6 （9.7~31.2）^**	3.3 （2.5~3.5）	533（432~856）^**	7.5（2.6~12.5）^**	8.0（5.9~13.4）^**	3.3（2.5~4.8）^**
PV组	16	18.8 （12.5~31.5）^*	2.8 （2.6~4.2）	494（383~514）^*#	4.8（4.0~7.9）^*	8.1（6.2~14.3）^*	3.7（3.2~4.6）^*
ET组	25	13.3 （8.9~22.5）^*	2.7 （2.5~3.3）	523（400~815）^*#	7.9（2.0~12.7）^*	7.5（5.0~10.5）^*	3.0（2.2~3.4）^*
PMF组	9	39.5 （18.0~64.6）^*	2.5 （2.4~3.1）	935（856~1906）^*	11.7（8.2~20.5）^*	18.4（7.7~22.1）^*	3.0（2.3~4.4）^*
正常对照组	20	4.0 （4.0~5.0）	3.1 （2.9~4.0）	265（201~297）	2.0（2.0~2.0）	5.0 （3.5~5.0）	7.6（5.0~15.5）

组别	例数	TNF-α/ （pg/mL）	IL-1β/ （pg/mL）	IL-2R/ （U/mL）	IL-6/ （pg/mL）	IL-8/ （pg/mL）	IL-10/ （pg/mL）
MPN组	50	16.6 （9.7~31.2）^**	3.3 （2.5~3.5）	533（432~856）^**	7.5（2.6~12.5）^**	8.0（5.9~13.4）^**	3.3（2.5~4.8）^**
PV组	16	18.8 （12.5~31.5）^*	2.8 （2.6~4.2）	494（383~514）^*#	4.8（4.0~7.9）^*	8.1（6.2~14.3）^*	3.7（3.2~4.6）^*
ET组	25	13.3 （8.9~22.5）^*	2.7 （2.5~3.3）	523（400~815）^*#	7.9（2.0~12.7）^*	7.5（5.0~10.5）^*	3.0（2.2~3.4）^*
PMF组	9	39.5 （18.0~64.6）^*	2.5 （2.4~3.1）	935（856~1906）^*	11.7（8.2~20.5）^*	18.4（7.7~22.1）^*	3.0（2.3~4.4）^*
正常对照组	20	4.0 （4.0~5.0）	3.1 （2.9~4.0）	265（201~297）	2.0（2.0~2.0）	5.0 （3.5~5.0）	7.6（5.0~15.5）

组别	例数	TNF-α/（pg/mL）	IL-1β/（pg/mL）	IL-2R/（U/mL）	IL-6/（pg/mL）	IL-8/（pg/mL）	IL-10/（pg/mL）
PV组	15	18.8（13.5~30.6）	2.7 （2.6~3.2）	494（413~510）^**	4.8 （3.0~7.3）^*	8.1（6.3~14.0）	3.7 （3.3~4.4）
ET组	17	13.3 （8.9~20.8）^*	2.7 （2.5~3.4）	523（402~805）^**	7.9（2.0~12.6）	7.5（5.2~10.4）^*	3.1 （2.6~5.0）
PMF组	6	39.5（19.3~55.7）	2.4 （2.4~2.8）	935（874~1470）	11.7（8.6~19.4）	18.4（7.8~21.2）	3.0 （2.3~4.4）