人腺病毒-B55实时荧光定量PCR扩增方法的建立

doi:10.3969/j.issn.1673-8640.2019.03.016

检验医学 ›› 2019, Vol. 34 ›› Issue (3): 259-262.DOI: 10.3969/j.issn.1673-8640.2019.03.016

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人腺病毒-B55实时荧光定量PCR扩增方法的建立

董磊¹, 刘娟², 艾现印³, 马红雨¹, 全首祯¹, 姜涛⁴

1. 空军总医院临床检验中心,北京 100142
2. 空军总医院输血科,北京 100142
3.中国人民解放军32143部队卫生连,河南信阳 464000
4. 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所, 北京 100071

收稿日期:2018-01-10 出版日期:2019-03-30 发布日期:2019-03-27
作者简介:null
作者简介：董磊,男,1979年生,博士,主治医师,主要从事临床生化检测工作。
基金资助:
国家科技重大专项（2017ZX10305501）;军队后勤科研重大项目（AWS16J020）

Establishment of fluorescence quantitation PCR to amplify human adenovirus-B55

DONG Lei¹, LIU Juan², AI Xianyin³, MA Hongyu¹, QUAN Shouzhen¹, JIANG Tao⁴

1. Clinical Laboratory Center,the General Hospital of Peoples' Liberation Army Air Force,Beijing 100142,China
2. Department of Blood Transfusion,the General Hospital of Peoples' Liberation Army Air Force,Beijing 100142,China
3. Army Health Company 32143 of Chinese People's Liberation Army, Xinyang 464000, Henan,China
4. Beijing Institute of Microbiology and Epidemiology,State Key Laboratory of Pathogen and Biosecurity,Beijing 100071,China

Received:2018-01-10 Online:2019-03-30 Published:2019-03-27

摘要/Abstract

摘要：

目的构建人腺病毒（HAdV）-B55的实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）扩增方法,并验证其检测性能。方法采用Beacon Designer 7软件设计针对HAdV-B55 Hexon基因序列的特异性引物,建立HAdV-B55的实时荧光定量PCR扩增方法,并评估其敏感性及特异性。结果建立了检测HAdV-B55的实时荧光定量PCR扩增方法,反应敏感性为0.08 PFU/反应体系,且特异性良好,与相关HAdV B组病毒均未检测到交叉反应。结论成功建立了针对我国HAdV-B55的特异性实时荧光定量PCR检测方法,为HAdV-B55的快速检测及防控提供了有力的支持。

关键词: 人腺病毒, 实时荧光定量聚合酶链反应, 快速检测

Abstract:

Objective To establish real-time fluorescence quantitation polymerase chain reaction （PCR）to amplify human adenovirus（HAdV）-B55,and to verify its performance. Methods The specific primers for the Hexon sequence of HAdV-B55 were designed with Beacon Designer 7 software,and the real-time fluorescence quantitation PCR was established. The sensitivity and specificity were evaluated. Results The specific primers for HAdV-B55 were obtained,and the real-time fluorescence quantitation PCR for HAdV-B55 had been established. The sensitivity was 0.08 PFU/reaction,and the specificity was good. There was no cross reaction with HAdVB Conclusions The real-time fluorescence quantitation PCR to detect HAdV-B55 has been established,which lays the foundation for the rapid detection and prevention of HAdV-B55.

Key words: Human adenovirus, Real-time fluorescence quantitation polymerase chain reaction, Rapid detection

中图分类号:

R446.1

董磊, 刘娟, 艾现印, 马红雨, 全首祯, 姜涛. 人腺病毒-B55实时荧光定量PCR扩增方法的建立[J]. 检验医学, 2019, 34(3): 259-262.

DONG Lei, LIU Juan, AI Xianyin, MA Hongyu, QUAN Shouzhen, JIANG Tao. Establishment of fluorescence quantitation PCR to amplify human adenovirus-B55[J]. Laboratory Medicine, 2019, 34(3): 259-262.

图/表 4

表1 实时荧光定量PCR扩增引物及其序列

引物名称	引物序列（5'~3'）	长度（bp）
ADV55-Hexon-423F1	CTCAGTGGATTGCAGAAG	18
ADV55-Hexon-423R1	CAGCATAAATCGGTTTACTTTC	22
ADV55-Hexon-423Pro	FAM-AAATGGTGAGGAGCGC1GTAACA-TAMRA	22

图1 实时荧光定量PCR检测敏感性分析注：（a）实时扩增曲线;（b）标准曲线;Y= -4.990 4X+45.407,R2=0.994 8; 4×105 PFU/mL;4×104 PFU/mL;4×103 PFU/mL;4×102 PFU/mL;4×101 PFU/mL;4×100 PFU/mL;4×10-1 PFU/mL;4×10-2 PFU/mL;4×10-3 PFU/mL;4×10-4 PFU/mL;阴性对照

图2 实时荧光定量PCR检测特异性分析

图3 实时荧光定量PCR重复性评估注：（a）实时扩增曲线;（b）标准曲线;Y=-3.354 3X +33.638,r2=0.999

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人腺病毒-B55实时荧光定量PCR扩增方法的建立

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