多重PCR系统快速检测儿童血流感染7种常见病原菌

doi:10.3969/j.issn.1673-8640.2016.02.009

摘要/Abstract

摘要：

目的建立快速检测儿童血流感染常见病原菌的多重聚合酶链反应（PCR）系统。方法在16S rDNA-PCR结合测序鉴定血流感染病原菌的基础上筛选出7种儿童血流感染常见病原菌,针对这些病原菌设计特异性引物组合成多重PCR系统,用临床常见的15种细菌、4种真菌及人类细胞检测该系统的检测性能,并将该系统与血培养法及16S rDNA-PCR进行比较。结果 180例血液样本中血培养法阳性14例,阳性率为7.8%;16S rDNA-PCR阳性28例,阳性率为15.6%;多重PCR系统阳性25例,阳性率为 13.9%。多重PCR系统病原菌检出率高于血培养法（P<0.05）,与16S rDNA-PCR比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论所建立的多重PCR系统能够快速、准确地检测引起儿童血流感染的7种常见病原菌,比常规血培养法提早3~5 d将病原菌鉴定到种,对临床及时合理用药具有指导意义。

关键词: 多重聚合酶链反应, 血流感染, 细菌, 儿童

Abstract:

Objective To establish a multiplex polymerase chain reaction （PCR） system to detect common bacteria in children with bloodstream infection. Methods A total of 7 kinds of common bacteria were screened out based on the results of 16S rDNA-PCR and sequencing,and then the special primers were designed to establish a multiplex PCR system. The determination performance was evaluated by using 15 bacteria,4 fungi and human cells. The results of multiplex PCR system were compared with those of blood culture and 16S rDNA-PCR. Results The positive rate of blood culture （14 cases）, 16S rDNA-PCR （28 cases） and multiplex PCR system （25 cases） were 7.8%,15.6% and 13.9%, respectively. This multiplex PCR system had a higher detection rate than blood culture（P<0.05） ,and there was no statistical significance compared with 16S rDNA-PCR（P>0.05）. Conclusions The established multiplex PCR system exhibits high speed and accuracy for the detection of 7 kinds of common bacteria,which is earlier for 3-5 d than blood culture in identifying bacterium species,and it can guide clinicians for rational antibacterial agent usage in time.

Key words: Multiplex polymerase chain reaction, Bloodstream infection, Bacterium, Child

中图分类号:

R446.5

黄君华, 张书婉. 多重PCR系统快速检测儿童血流感染7种常见病原菌[J]. 检验医学, 2016, 31(2): 114-118.

HUANG Junhua, ZHANG Shuwan. Application of a multiplex PCR system for the rapid detection of 7 kinds of common bacteria in children with bloodstream infection[J]. Laboratory Medicine, 2016, 31(2): 114-118.

图/表 7

参考文献 11

[1]	SEE LL.Bloodstream infection in children[J]. Pediatr Crit Care Med,2005,6(3 Suppl):S42-S44.
[2]	LV H, NING B.Pathogenesis of bloodstream infection in children with blood cancer[J]. Exp Ther Med,2013,5(1):201-204.
[3]	LUTHANDER J, BENNET R, GISKE CG, et al.Age and risk factors influence the microbial aetiology of bloodstream infection in children[J]. Acta Paediatr, 2013, 102(2): 182-186.
[4]	黄君华, 张书婉. PCR检测在血液病患儿血流感染细菌谱分析中的应用[J]. 国际检验医学杂志, 2014,36(17):2307-2308.
[5]	黄君华, 张书婉. 16S rDNA 测序在儿童血流感染细菌性病原菌分布中的应用[J]. 海南医学, 2014, 42(10):1467-1468.
[6]	黄君华, 张书婉, 张宁. 穿刺引流液中病原性真菌的ITS测序研究[J]. 国际检验医学杂志, 2014, 36(12):1580-1582.
[7]	CHEN TL, SIU LK, WU RC, et al.Comparison of one-tube multiplex PCR, automated ribotyping and intergenic spacer (ITS) sequencing for rapid identification of Acinetobacter baumannii[J]. Clin Microbiol Infect,2007,13(8): 801-806.
[8]	MASON WJ, BLEVINS JS, BEENKEN K, et al.Multiplex PCR protocol for the diagnosis of staphylococcal infection[J]. J Clin Microbiol, 2001,39(9):3332-3338.
[9]	SPILKER T,COENYE T,VANDAMME P,et al.PCR-based assay for differentiation of Pseudomonas aeruginosa from other Pseudomonas species recovered from cystic fibrosis patients[J]. J Clin Microbiol,2004,42(5): 2074-2079.
[10]	郭建, 吴文娟. 血流感染分子诊断的研究进展[J]. 检验医学, 2014, 29(6): 584-589.
[11]	吴许文, 李沛樟, 简仕铭. 用 PCR 技术检测常见致病菌的临床应用[J]. 临床检验杂志, 2013, 31(6): 442-444.

菌种	引物序列（5'-3'）	靶基因	产物大小（bp）	参考文献
鲍曼不动杆菌	CATTATCACGGTAATTAGTG AGA GCACTGTGCACTTAAG	ITS	208	[7]
大肠埃希菌	TGGTTGCTAACTGGAAAGGAAT ACGTGTATTTGTTCGAT GCTG	mdh	391	本实验设计
金黄色葡萄球菌	GCAAAATCCAGCACAACAGGAAACGA CTTGATCTCCAGCCATAATTGGTGG	clfA	638	[8]
铜绿假单胞菌	GGGGGATCTTCGGACCTCA TCCTTAGAGTGCCCACCG	16S rDNA	956	[9]
肺炎克雷伯菌	AATGATGATGGGCTTTGTG GTCGCCGTTCTGTTTCTT	phoE	535	本实验设计
表皮葡萄球菌	ATGAGTGGTTCAGGTGTTGTTG TACGCCACCATAATGTATTCCA	gseA	465	本实验设计
屎肠球菌	GACCCA AGTGGACAGACA CTTCAATCAAATCACCGTA	ddl	816	本实验设计

菌种	引物序列（5'-3'）	靶基因	产物大小（bp）	参考文献
鲍曼不动杆菌	CATTATCACGGTAATTAGTG AGA GCACTGTGCACTTAAG	ITS	208	[7]
大肠埃希菌	TGGTTGCTAACTGGAAAGGAAT ACGTGTATTTGTTCGAT GCTG	mdh	391	本实验设计
金黄色葡萄球菌	GCAAAATCCAGCACAACAGGAAACGA CTTGATCTCCAGCCATAATTGGTGG	clfA	638	[8]
铜绿假单胞菌	GGGGGATCTTCGGACCTCA TCCTTAGAGTGCCCACCG	16S rDNA	956	[9]
肺炎克雷伯菌	AATGATGATGGGCTTTGTG GTCGCCGTTCTGTTTCTT	phoE	535	本实验设计
表皮葡萄球菌	ATGAGTGGTTCAGGTGTTGTTG TACGCCACCATAATGTATTCCA	gseA	465	本实验设计
屎肠球菌	GACCCA AGTGGACAGACA CTTCAATCAAATCACCGTA	ddl	816	本实验设计

菌种	血培养法	16S rDNA-PCR	多重PCR系统
表皮葡萄球菌	5	11	10
大肠埃希菌	5	6	5
金黄色葡萄球菌	2	3	3
铜绿假单胞菌	0	3	3
屎肠球菌	1	2	1
鲍曼不动杆菌	0	2	2
肺炎克雷伯菌	1	1	1
合计	14	28	25

菌种	血培养法	16S rDNA-PCR	多重PCR系统
表皮葡萄球菌	5	11	10
大肠埃希菌	5	6	5
金黄色葡萄球菌	2	3	3
铜绿假单胞菌	0	3	3
屎肠球菌	1	2	1
鲍曼不动杆菌	0	2	2
肺炎克雷伯菌	1	1	1
合计	14	28	25

[1]	王慧英, 汤昱, 董利利, 王静. 肺炎支原体RNA检测用于肺炎患儿疾病诊断和疗效监测[J]. 检验医学, 2023, 38(9): 865-869.
[2]	赵若楠, 盛哲, 叶志成, 杨丹, 余先智. 上海某儿科医院新型冠状病毒肺炎疫情前后腹泻患儿A组轮状病毒流行特征[J]. 检验医学, 2023, 38(9): 890-892.
[3]	石迎迎, 潘芬, 孙燕, 王春, 蒋婕, 于方圆, 张天栋, 秦惠宏, 张泓. 巢式多重聚合酶链反应快速诊断儿童脑膜炎/脑炎[J]. 检验医学, 2023, 38(8): 766-770.
[4]	符利梅, 杨丹, 徐锦, 朱海燕, 朱芬华. 全血微量元素和血清维生素检测在6种儿童常见皮肤病中的临床意义[J]. 检验医学, 2023, 38(8): 771-775.
[5]	张欣, 马丽娟. 儿童心脏标志物检测的临床意义[J]. 检验医学, 2023, 38(6): 505-509.
[6]	杨琼, 徐芬, 蔺亚晖. 心肌肌钙蛋白检测在儿科心脏受累相关疾病中的临床应用[J]. 检验医学, 2023, 38(6): 510-517.
[7]	李莉, 孙海燕, 李媛睿, 窦敏, 汤文, 蒋黎敏, 沈立松. 先天性心脏病患儿围手术期NT-proBNP、 PCT变化及其临床意义[J]. 检验医学, 2023, 38(6): 524-531.
[8]	王雅玲, 黄运丽, 田密, 王顺兰, 肖莉. 急性支气管肺炎患儿EOS%、CCR3、Eotaxin与病情严重程度的关系[J]. 检验医学, 2023, 38(3): 230-234.
[9]	武晋英, 方玉莲, 王维, 侯梦珠, 王露, 赵煜. 天津地区急性腹泻患儿肠道病毒感染临床特征和流行病学分析[J]. 检验医学, 2023, 38(3): 267-271.
[10]	张嘉懿, 郭文伟, 沈永明, 娜仁, 崔小健, 司萍. 光激化学发光法检测儿童乙型肝炎核心抗体最佳临界值探讨[J]. 检验医学, 2023, 38(3): 291-293.
[11]	罗倩, 乔昀. 肉芽肿性乳腺炎样本中检出克罗彭施特棒状杆菌1例报道[J]. 检验医学, 2023, 38(3): 301-302.
[12]	赵艳宏, 傅琳, 刘彪, 肖美芳. 海南地区3~14岁人群乳酸脱氢酶参考区间分析[J]. 检验医学, 2023, 38(11): 1041-1043.
[13]	王欣慧, 冯海阳, 郭茂君, 徐新艳, 赵艳丰, 朱叶飞. 多杀巴斯德菌致泪小管炎1例报道[J]. 检验医学, 2023, 38(11): 1109-1110.
[14]	戴淑芝, 宋美燕, 米腊腊, 张敏, 马丽娟. 基于GAMLSS模型的北京地区儿童C反应蛋白百分位数分布曲线和参考值[J]. 检验医学, 2023, 38(10): 977-979.
[15]	胡韶华, 陈黎, 赵梦, 马展, 张泓. 上海地区儿童肺炎支原体感染流行病学特征分析[J]. 检验医学, 2023, 38(1): 14-17.