干血斑和血清样本用于检测乙型肝炎病毒DNA及耐药突变的比较

doi:10.3969/j.issn.1673-8640.2016.011.004

检验医学 ›› 2016, Vol. 31 ›› Issue (11): 944-947.DOI: 10.3969/j.issn.1673-8640.2016.011.004

干血斑和血清样本用于检测乙型肝炎病毒DNA及耐药突变的比较

张敏¹, 王前英¹, 李昕¹, 王刚¹, 胡芸文²

1.上海市公共卫生临床中心医学检验科,上海 201508
2.上海市公共卫生临床中心应急检测和生物安全部,上海 201508

收稿日期:2015-12-28 出版日期:2016-11-30 发布日期:2016-12-22
作者简介:null
作者简介：张敏,女,1981年生,硕士,主管技师,主要从事分子诊断研究。

通讯作者：胡芸文,联系电话：021-37990333-6513。
基金资助:
上海市科学技术委员会西医引导类项目（124119a1200）;上海市卫生和计划生育委员会科研课题青年项目（20144Y0075）

Comparison of dried blood spot samples and serum samples for HBV DNA quantification determination and drug resistance mutation

ZHANG Min¹, WANG Qianying¹, LI Xin¹, WANG Gang¹, HU Yunwen²

1. Department of Clinical Laboratory,Shanghai Public Health Clinical Center,Shanghai 201508,China
2. Emergency Detection and Bio-safety Department,Shanghai Public Health Clinical Center,Shanghai 201508,China

Received:2015-12-28 Online:2016-11-30 Published:2016-12-22

摘要/Abstract

摘要：

目的验证干血斑（DBS）样本替代静脉血血清样本用于检测乙型肝炎病毒（HBV）基因诊断的可行性。方法选择慢性乙型肝炎患者100例,血清HBV的病毒载量>1×10²拷贝/mL,抽取静脉血同时制备DBS样本和血清样本,进行HBV DNA定量检测,比较DBS与血清样本检测结果的相关性。选取73例基因型主要为B、C型的患者,进行DBS和血清样本基因型检测的比较。同时随机选取56例乙型肝炎患者的DBS和血清样本,采用实验室自建的套式聚合酶链反应（PCR）扩增HBV的逆转录酶（RT）区段,通过geno2pheno数据库进行结果分析,比较二者耐药性的检测结果。结果 DBS样本HBV DNA的检测范围为2~8 log₁₀拷贝/mL,与血清样本HBV DNA的检测结果高度相关（r²=0.82,P<0.05）,DBS样本HBV DNA定量值比血清样本低1个数量级。2种样本HBV耐药性检测结果的总符合率为95.83%;DBS和血清样本耐药状态的检出率分别为82.14%和85.71%（P>0.05）。2种样本HBV基因分型结果的符合率为100.00%。结论 DBS样本可用于HBV DNA的定量及耐药性的检测。

关键词: 干血斑, 乙型肝炎病毒, DNA, 耐药性

Abstract:

Objective To assess the feasibility of dried blood spot（DBS） sample as an alternative to serum sample for hepatitis B virus（HBV）determination. Methods DBS samples and serum samples were prepared through extracting venous blood,and HBV DNA was determined for 100 patients with chronic hepatitis B,whose HBV virus load >1×10² copies/mL. DBS and serum sample results were compared by correlation analysis. HBV genotypes were analyzed in 73 patients of genotype B and genotype C. A total of 56 DBS and serum samples from patients with hepatitis B were collected randomly. Using an in-house nest polymerase chain reaction（PCR） for reverse transcriptase segment,the data were analyzed using geno2pheno. Results HBV DNA of DBS samples was determined in a range of 2-8 log₁₀ copies/mL. The correlation coefficient（r²） for HBV DNA between DBS samples and serum samples was 0.82（P<0.05）. The quantification of HBV DNA determination in DBS samples was 1 log₁₀ lower than that in serum samples. The coincidence rate of the 2 kinds of samples was 95.83%. For DBS and serum samples,the determination rates for drug resistance were 82.14% and 85.71%（P>0.05）. The coincidence rate of DBS and serum samples for HBV genotype was 100.00%. Conclusions DBS samples can be used in HBV DNA quantification and drug resistance determinations.

Key words: Dried blood spot, Hepatitis B virus, DNA, Drug resistance

中图分类号:

R446.61

张敏, 王前英, 李昕, 王刚, 胡芸文. 干血斑和血清样本用于检测乙型肝炎病毒DNA及耐药突变的比较[J]. 检验医学, 2016, 31(11): 944-947.

ZHANG Min, WANG Qianying, LI Xin, WANG Gang, HU Yunwen. Comparison of dried blood spot samples and serum samples for HBV DNA quantification determination and drug resistance mutation[J]. Laboratory Medicine, 2016, 31(11): 944-947.

图/表 3

参考文献 6

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样本类型	HBeAg阳性（49例）			HBeAg阴性（24例）
样本类型	B型	C型	未分型	B型	C型	未分型
DBS	16	32	1	6	16	2
血清	16	32	1	6	16	2

样本类型	HBeAg阳性（49例）			HBeAg阴性（24例）
样本类型	B型	C型	未分型	B型	C型	未分型
DBS	16	32	1	6	16	2
血清	16	32	1	6	16	2

样本类型	药物敏感型	耐药位点
样本类型	药物敏感型	236T	204I	180M和204I
DBS	38	2	4	2
血清	38	2	6	2

样本类型	药物敏感型	耐药位点
样本类型	药物敏感型	236T	204I	180M和204I
DBS	38	2	4	2
血清	38	2	6	2

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干血斑和血清样本用于检测乙型肝炎病毒DNA及耐药突变的比较

Comparison of dried blood spot samples and serum samples for HBV DNA quantification determination and drug resistance mutation

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