可视化LAMP法检测耐碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌耐药基因blaKPC-2的初步应用

doi:10.3969/j.issn.1673-8640.2019.01.012

检验医学 ›› 2019, Vol. 34 ›› Issue (1): 56-59.DOI: 10.3969/j.issn.1673-8640.2019.01.012

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可视化LAMP法检测耐碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌耐药基因bla_KPC-2的初步应用

邹萍, 鲍俊峰, 臧嘉, 张婷, 许耀辉()

南京医科大学附属无锡市妇幼保健院,江苏无锡 214000

收稿日期:2017-07-11 出版日期:2019-01-30 发布日期:2019-01-29
作者简介:null
作者简介：邹萍,女, 1987年生,硕士,主管技师,主要从事病原微生物学检验工作。
基金资助:
江苏省科技厅科技发展重大专项（BE2017628）;无锡市临床重点专科资助项目;无锡市妇幼保健院院级新技术新项目（20150024）

Preliminary application of visual LAMP in detecting drug resistant gene bla_KPC-2 of carbapenem resistant Klebsiella pneumoniae

ZOU Ping, BAO Junfeng, ZANG Jia, ZHANG Ting, XU Yaohui()

Wuxi Maternal and Child Health Hospital,Nanjing Medical University,Wuxi 214000,Jiangsu,China

Received:2017-07-11 Online:2019-01-30 Published:2019-01-29

摘要/Abstract

摘要：

目的建立可视化环介导等温扩增（LAMP）方法检测肺炎克雷伯菌耐药基因bla_KPC-2,并初步评估其应用价值。方法设计3对特异性的LAMP引物,建立25 μL的LAMP检测体系并进行优化,通过与聚合酶链反应（PCR）进行比较,分析其特异性和敏感性。结果成功建立了检测肺炎克雷伯菌耐药基因bla_KPC-2的可视化LAMP方法。63 ℃保温40 min可实现对bla_KPC-2基因的快速检测。特异性与PCR一致,敏感性比PCR高约10倍。采用新建立的可视化LAMP方法检测出25株对亚胺培南、美罗培南和厄他培南其中之一耐药的肺炎克雷伯菌中有12株携带bla_KPC-2基因,31株对亚胺培南、美罗培南和厄他培南敏感的肺炎克雷伯菌中有5株携带bla_KPC-2基因,二者比较差异有统计学意义（P=0.009 9）。结论建立的可视化LAMP 方法可作为检测肺炎克雷伯菌耐药基因bla_KPC-2的方法,但尚不能替代体外药物敏感性试验。

关键词: 环介导等温扩增, 肺炎克雷伯菌, 耐碳青霉烯酶, bla_KPC-2基因

Abstract:

Objective To establish a method for detecting drug resistant gene bla_KPC-2 of carbapenem resistant Klebsiella pneumoniae by visual loop-mediated isothermal amplification （LAMP）. Methods A total of 3 pairs of specific LAMP primers were designed,and the LAMP detection system of 25 μL was established and optimized. The specificity and sensitivity were compared with those of polymerase chain reaction （PCR）. Results A method for detecting drug resistant gene bla_KPC-2 of carbapenem resistant Klebsiella pneumoniae by visual LAMP was established,which was used in the rapid detection of bla_KPC-2 at 63 ℃ for 40 min. The specificity was close to that of PCR,and the sensitivity was higher than that of PCR for 10 times. There were 12 isolates detected with bla_KPC-2 by LAMP among 25 imipenem,meropenem or ertapenem resistant isolates,and there were 5 isolates detected with bla_KPC-2 by LAMP among 31 imipenem,meropenem and ertapenem resistant isolates（P=0.009 9）. Conclusions The established LAMP could be used as a method to detect bla_KPC-2,but it could not replace drug susceptibility test in vitro.

Key words: Loop-mediated isothermal amplification, Klebsiella pneumoniae, Carbapenem resistance, bla_KPC-2

中图分类号:

Q503

邹萍, 鲍俊峰, 臧嘉, 张婷, 许耀辉. 可视化LAMP法检测耐碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌耐药基因bla_KPC-2的初步应用[J]. 检验医学, 2019, 34(1): 56-59.

ZOU Ping, BAO Junfeng, ZANG Jia, ZHANG Ting, XU Yaohui. Preliminary application of visual LAMP in detecting drug resistant gene bla_KPC-2 of carbapenem resistant Klebsiella pneumoniae[J]. Laboratory Medicine, 2019, 34(1): 56-59.

图/表 4

参考文献 10

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引物	引物序列（5'~3'）	引物长度（bp）
F3	TGGCTTTTCTGCCACCG	17
B3	TGCGAGCCAGCACAGC	16
FIP	TACACACCGATGGAGCCGCC-CCTCGTCGCGGAACCAT	37
BIP	GGCTCAGGCGCAACTGTAAGT-GCAGCAAGAAAGCCCTTGAA	41
LF	TACACACCGATGGAGCCGCC	20
LB	GGCTCAGGCGCAACTGTAAGT	21

引物	引物序列（5'~3'）	引物长度（bp）
F3	TGGCTTTTCTGCCACCG	17
B3	TGCGAGCCAGCACAGC	16
FIP	TACACACCGATGGAGCCGCC-CCTCGTCGCGGAACCAT	37
BIP	GGCTCAGGCGCAACTGTAAGT-GCAGCAAGAAAGCCCTTGAA	41
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组别	bla_KPC-2阳性	bla_KPC-2阴性	合计
CRKP组	12	13	25
KP组	5	26	31
合计	17	39	56

组别	bla_KPC-2阳性	bla_KPC-2阴性	合计
CRKP组	12	13	25
KP组	5	26	31
合计	17	39	56

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