电化学免疫传感器检测人附睾蛋白4的新方法

doi:10.3969/j.issn.1673-8640.2017.07.019

检验医学 ›› 2017, Vol. 32 ›› Issue (7): 637-641.DOI: 10.3969/j.issn.1673-8640.2017.07.019

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电化学免疫传感器检测人附睾蛋白4的新方法

逯岭松¹, 刘蓓², 冷建杭¹, 马宵³

1. 杭州市第一人民医院中心实验室,浙江杭州 310006
2. 浙江大学附属妇产科医院生殖遗传科,浙江杭州 310000
3.杭州市第一人民医院设备科,浙江杭州 310006

收稿日期:2016-08-07 出版日期:2017-08-08 发布日期:2017-08-09
作者简介:null
作者简介：逯岭松,男,1985年生,硕士,主管技师,主要从事疾病标志物的床旁检测和快速检测研究。
基金资助:
基金项目：国家自然科学青年基金资助项目（81301514）

Electrochemical immunosensor for the determination of human epididymis-speciﬁc protein 4：a new method

LU Lingsong¹, LIU Bei², LENG Jianhang¹, MA Xiao³

1. Department of Central Laboratory,Hangzhou First People's Hospital,Hangzhou 310006,Zhejiang,China
2. Department of Reproductive Genetics,Women's Hospital School of Medicine Zhejiang University,Hangzhou 310000,Zhejiang,China
3. Department of Equipment,Hangzhou First People's Hospital,Hangzhou 310006,Zhejiang,China

Received:2016-08-07 Online:2017-08-08 Published:2017-08-09

摘要/Abstract

摘要：

目的建立一种基于石墨烯和纳米金粒子自组装纳米复合物检测卵巢癌患者血清人附睾蛋白4（HE4）的电化学免疫检测新方法。方法将石墨烯和纳米金粒子复合物组装在丝网印刷电极（SPE）表面,利用纳米金粒子比表面积大和石墨烯电子传导速率快等特点,将大量的HE4一抗吸附在纳米金表面,继而结合大量抗原。根据双抗体夹心法原理,大量的辣根过氧化物酶标记的抗体也与抗原结合,利用辣根过氧化物酶催化过氧化氢（H₂O₂）产生的电流信号测定HE4水平。结果新建传感器检测HE4的范围是0 ~ 400 pmol/L,检出限（LOD）是0.5 pmol/L。结论所建方法可用于早期评估受检者患卵巢癌的风险,是临床早期诊断卵巢癌快速、简便的新方法。

关键词: 电化学免疫传感器, 双抗体夹心免疫分析, 人附睾蛋白4, 丝网印刷电极, 石墨烯

Abstract:

Objective To establish an electrochemical immunosensor for the determination of human epididymis-speciﬁc protein 4 （HE4） based on Graphene sheet and Au nanoparticle nanocomposite. Methods Firstly,Graphene sheet and Au nanoparticle nanocomposite was coated onto screen printed electrode（SPE） with an enhanced electrochemical active area and good electronic transfer property. HE4 antibody was adsorbed on the nanocomposite,which aimed at assembling more HE4 antigen. Following the immunoreaction with HE4,a double-antibody sandwich immunoassay was performed on SPE using horseradish peroxidase labeled HE4 antibody. Electrochemical detection was carried out for HE4 level in the presence of hydrogen dioxide（H₂O₂）. Results The immunosensor showed broad linear response to the HE4 level comprised between 0 pmol/L and 400 pmol/L with a limit of detection（LOD）of 0.5 pmol/L. Conclusions The electrochemical immunosensor allows the identiﬁcation of patients at risk of ovarian cancer,providing a new,fast and simple approach for early diagnosis in daily clinical practice.

Key words: Electrochemical immunosensor, Double-antibody sandwich immunoassay, Human epididymis-specific protein 4, Screen printed electrode, Graphene sheet

中图分类号:

R446.1

逯岭松, 刘蓓, 冷建杭, 马宵. 电化学免疫传感器检测人附睾蛋白4的新方法[J]. 检验医学, 2017, 32(7): 637-641.

LU Lingsong, LIU Bei, LENG Jianhang, MA Xiao. Electrochemical immunosensor for the determination of human epididymis-speciﬁc protein 4：a new method[J]. Laboratory Medicine, 2017, 32(7): 637-641.

图/表 5

参考文献 11

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样本	HE4浓度（pmol/L）	回收浓度（pmol/L）	回收率（%）
1	25.0	24.8	99.2
2	50.0	50.4	100.8
3	75.0	71.9	95.9
4	100.0	102.0	100.2
5	150.0	146.0	97.3

样本	HE4浓度（pmol/L）	回收浓度（pmol/L）	回收率（%）
1	25.0	24.8	99.2
2	50.0	50.4	100.8
3	75.0	71.9	95.9
4	100.0	102.0	100.2
5	150.0	146.0	97.3

样本	电流（μA）	（i_b-i_a）/i_a（%）
HE4	85	-
HE4（CA125）	79	-7.1
HE4（CA242）	91	7.1
HE4（CEA）	89	4.7
HE4（AFP）	77	-9.4

样本	电流（μA）	（i_b-i_a）/i_a（%）
HE4	85	-
HE4（CA125）	79	-7.1
HE4（CA242）	91	7.1
HE4（CEA）	89	4.7
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电化学免疫传感器检测人附睾蛋白4的新方法

Electrochemical immunosensor for the determination of human epididymis-speciﬁc protein 4：a new method

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