检验医学 ›› 2011, Vol. 26 ›› Issue (12): 806-810.

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肝素结合血凝素蛋白在结核病诊断中的应用研究

周珊;徐修礼;马越云;刘家云;樊新;孙怡群;郝晓柯   

  1. 第四军医大学西京医院全军临床检验医学中心,陕西西安710032
  • 收稿日期:2011-12-01 出版日期:2011-12-01 发布日期:2011-12-01
  • 通讯作者: 周珊

Research on the application of HBHA protein in thediagnosis of tuberculosis

ZHOU Shan;XU Xiuli;MA Yueyun;LIU Jiayun;FAN Xin;SUN Yiqun;HAO Xiaoke   

  • Received:2011-12-01 Online:2011-12-01 Published:2011-12-01

摘要: 目的 制备天然和重组肝素结合血凝素(HBHA)蛋白,探讨其在结核杆菌感染诊断中的应用价值.方法 用聚合酶链反应从结核分枝杆菌H37 Rv基因组扩增出HBHA基因片段.结核分枝杆菌HBHA基因克隆至PQE80L克隆表达载体中,序列测定正确后,将其转化到大肠埃希菌BL-21中,再经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达HBHA蛋白,表达蛋白经SDS-PAGE及免疫印迹法分析后,亲和层析法纯化蛋白,并以此免疫新西兰兔制备多克隆抗体.同时将7H9液体培养基中的卡介苗(BCG)培养至稳定生长期,用CL-6B层析柱分离纯化HBHA蛋白.观察抗体对不同浓度天然HBHA和重组HBHA诱导BCG聚集效应的影响.结果 所得天然和重组HBHA蛋白均有诱导BCG聚集的作用,并均可被多克隆抗体抑制.结论 成功获得天然HBHA和重组HBHA蛋白;证实了两者均具有促进BCG聚集的功能,并可被由重组HBHA诱导产生的多克隆抗体所抑制.从而为进一步研究HBHA的临床诊断价值提供了实验依据.

关键词: 肝素结合血凝素蛋白, 多克隆抗体, 结核分枝杆菌

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