肌酸激酶MM同工酶在新生儿杜氏肌营养不良症筛查中的应用

doi:10.3969/j.issn.1673-8640.2020.11.008

摘要/Abstract

摘要：

目的评估肌酸激酶MM同工酶（CK-MM）用于新生儿杜氏肌营养不良症（DMD）筛查的可行性。方法收集男性新生儿滤纸干血片样本7 035份,采用时间分辨荧光法检测CK-MM,对筛查阳性的样本进行DMD基因检测。对时间分辨荧光法检测CK-MM的性能（正确度、精密度、线性范围等）进行验证。采用受试者工作特征（ROC）曲线评价CK-MM筛查DMD的效能。结果时间分辨荧光法检测CK-MM的批内CV、批间CV和平均偏移均<10%,线性回归方程为Y=1.045 8X+1.929 6（r=0.999 9,P<0.01）。DMD患儿CK-MM浓度明显高于正常对照组（P<0.000 1）,是正常对照组的67倍。7 035例男性新生儿筛查阳性6例（0.085%）,确诊2例,DMD基因检测结果显示均为半合变异,基因型分别为c.1990C>T（p.Gln664*）和c.7657C>T（p.Arg2553*）。ROC曲线分析结果显示,CK-MM诊断DMD的曲线下面积（AUC）为1.0,最佳临界值为762 ng/mL,敏感性为100%,特异性为99.94%。结论以滤纸干血片为样本检测CK-MM能有效筛查出DMD患儿,且检测方法简便,值得临床推广。

关键词: 肌酸激酶MM同工酶, 杜氏肌营养不良症, 滤纸干血片

Abstract:

Objective To evaluate the feasibility of creatine kinase isoenzyme MM（CK-MM） in neonatal Duchenne muscular dystrophy（DMD） screening. Methods Totally,7 035 dried blood spots of male newborns were collected. CK-MM was determined by time-resolved fluorescence method,and the positive results was determined by DMD gene determination further. The performance（accuracy,precision,linear range and so on） of CK-MM determined by time-resolved fluorescence method was verified. The efficiency of CK-MM in screening DMD was evaluated by receiver operating characteristic（ROC） curve. Results The within-run coefficient of variation（CV）,the between-run CV and average bias of CK-MM determined by time-resolved fluorescence method were <10%. The linear regression equation was Y= 1.045 8X+1.929 6（r=0.999 9,P<0.01）. The concentration of CK-MM in children with DMD was higher than that in healthy control group（P<0.000 1）,which was 67 times higher than that of healthy control group. Among the 7 035 male newborns,6（0.085%） cases were positive after screening,and 2 cases were confirmed. DMD gene determination results showed that all of them were hemizygous mutation,and their genotypes were c.1990C>T（p.Gln664*）and c.7657C>T（p.Arg2553*）. ROC curve analysis showed that the area under curve（AUC） of CK-MM for the diagnosis of DMD was 1.0,the optimal cut-off value was 762 ng/mL,the sensitivity was 100%,and the specificity was 99.94%. Conclusions Using dried blood spots to determine CK-MM can effectively screen the children with DMD,and this method is simple and worthy of clinical application.

Key words: Creatine kinase isoenzyme MM, Duchenne muscular dystrophy, Dried blood spot

中图分类号:

R446.1

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图/表 5

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样本	批内			批间
样本	x/（ng/mL）	s/（ng/mL）	CV/%	x/（ng/mL）	s/（ng/mL）	CV/%
低值	139.86	13.83	9.89	138.59	11.57	8.35
中值	405.17	28.69	7.08	405.33	28.90	7.13
高值	1 541.42	112.08	7.27	1 582.79	116.72	7.37

样本	批内			批间
样本	x/（ng/mL）	s/（ng/mL）	CV/%	x/（ng/mL）	s/（ng/mL）	CV/%
低值	139.86	13.83	9.89	138.59	11.57	8.35
中值	405.17	28.69	7.08	405.33	28.90	7.13
高值	1 541.42	112.08	7.27	1 582.79	116.72	7.37

编号	性别	年龄	CK-MM（ng/mL）	CK（U/L）	基因检测结果
1	男	19 d	2 408.26	7 121	3~25号外显子半合缺失
2	男	1岁	9 739.00	20 640	58号外显子半合缺失
3	男	2岁	4 248.56	7 335	48~50号外显子半合缺失
4	男	2个月	5 641.71	36 200	44号外显子半合缺失
5	男	3岁	7 631.73	16 115	45~50号外显子半合缺失
6	男	3岁	9 417.31	7 548	3~7号外显子半合缺失
7	男	3岁	5 326.70	16 491	1~2号外显子半合缺失
8	男	3岁	13 966.56	3 089	45~47号外显子半合缺失
9	男	5岁	6 944.47	28 220	46~47号外显子半合缺失
10	男	5岁	1 384.81	1 070	51~53号外显子半合缺失
11	男	6岁	6 992.81	19 650	8~9号外显子半合缺失
12	男	6岁	13 328.04	21 197	3~17号外显子半合缺失
13	男	6岁	11 871.46	17 950	49~54号外显子半合缺失
14	男	7岁	9 184.97	16 188	49~50号外显子半合缺失
15	男	7岁	8 301.66	19 210	45号外显子半合缺失
16	男	7岁	4 910.06	16 005	48~50号外显子半合缺失
17	男	7岁	6 169.69	18 206	45~47号外显子半合缺失
18	男	7岁	5 275.75	15 433	48~55号外显子半合缺失
19	男	8岁	2 000.99	4 615	50号外显子半合缺失
20	男	9岁	7 538.04	16 298	45~50号外显子半合缺失
21	男	9岁	2 361.13	3 635	8~44号外显子半合缺失
22	男	3岁	1 424.34	8 266	2~7号外显子拷贝数增加
23	女	2岁	1 949.46	5 958	18~55号外显子杂合缺失
24	男	9 d	6 770.96	13 100	半合变异c.7657C>T（p.Arg2553*）
25	男	1个月	1 550.88	3 270	半合变异c.1990C>T（p.Gln664*）
26	男	8岁	7 965.59	14 600	半合变异c.3664_3667delAATA（p.Asn1222Valfs*3）
27	男	12岁	1 096.93	1 659	半合变异c.832-15A>G （ p. ?）

编号	性别	年龄	CK-MM（ng/mL）	CK（U/L）	基因检测结果
1	男	19 d	2 408.26	7 121	3~25号外显子半合缺失
2	男	1岁	9 739.00	20 640	58号外显子半合缺失
3	男	2岁	4 248.56	7 335	48~50号外显子半合缺失
4	男	2个月	5 641.71	36 200	44号外显子半合缺失
5	男	3岁	7 631.73	16 115	45~50号外显子半合缺失
6	男	3岁	9 417.31	7 548	3~7号外显子半合缺失
7	男	3岁	5 326.70	16 491	1~2号外显子半合缺失
8	男	3岁	13 966.56	3 089	45~47号外显子半合缺失
9	男	5岁	6 944.47	28 220	46~47号外显子半合缺失
10	男	5岁	1 384.81	1 070	51~53号外显子半合缺失
11	男	6岁	6 992.81	19 650	8~9号外显子半合缺失
12	男	6岁	13 328.04	21 197	3~17号外显子半合缺失
13	男	6岁	11 871.46	17 950	49~54号外显子半合缺失
14	男	7岁	9 184.97	16 188	49~50号外显子半合缺失
15	男	7岁	8 301.66	19 210	45号外显子半合缺失
16	男	7岁	4 910.06	16 005	48~50号外显子半合缺失
17	男	7岁	6 169.69	18 206	45~47号外显子半合缺失
18	男	7岁	5 275.75	15 433	48~55号外显子半合缺失
19	男	8岁	2 000.99	4 615	50号外显子半合缺失
20	男	9岁	7 538.04	16 298	45~50号外显子半合缺失
21	男	9岁	2 361.13	3 635	8~44号外显子半合缺失
22	男	3岁	1 424.34	8 266	2~7号外显子拷贝数增加
23	女	2岁	1 949.46	5 958	18~55号外显子杂合缺失
24	男	9 d	6 770.96	13 100	半合变异c.7657C>T（p.Arg2553*）
25	男	1个月	1 550.88	3 270	半合变异c.1990C>T（p.Gln664*）
26	男	8岁	7 965.59	14 600	半合变异c.3664_3667delAATA（p.Asn1222Valfs*3）
27	男	12岁	1 096.93	1 659	半合变异c.832-15A>G （ p. ?）