慢性HE患者肠道细菌种类与血清炎性因子相关性分析

doi:10.3969/j.issn.1673-8640.2018.10.008

摘要/Abstract

摘要：

目的分析慢性肝性脑病（HE）患者肠道常见细菌种类与血清肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-12、IL-6、IL-10、IL-1β和IL-23 6种炎性因子的相关性,探讨肠道微生态及血清炎性因子在慢性HE中的作用。方法从慢性乙型肝炎肝硬化肝功能失代偿期患者中筛选出并发HE的患者120例（HE组）,另选取未并发HE的慢性乙型肝炎肝硬化患者100例（对照组）,记录所有患者的肝功能指标[白蛋白（Alb）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆红素（TB）和凝血酶原时间（PT）]及肝功能Child分级情况。采用荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测患者肠道中12种常见的细菌,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测患者血清6种炎性因子的变化。结果 HE组Alb、ALT、AST、TB及肝功能Child分级均明显高于对照组（P<0.05）,但2个组之间PT差异无统计学意义（P>0.05）。与对照组比较,HE组显著增殖的细菌有致病性大肠埃希菌、假单胞菌属、肠球菌属、普雷沃登菌属、葡萄球菌属、梭菌属、白念珠菌（P<0.05）,显著减少的细菌有双歧杆菌、乳酸杆菌和瘤胃球菌属（P<0.05）。HE组血清TNF-α、IL-12、IL-6、IL-10、IL-1β和IL-23水平均明显高于对照组（P<0.001）。HE患者肠道常见细菌种类变化与肝功能指标的相关性及与血清炎性因子指标相关联的程度均高于对照组。结论慢性HE发生、发展机制可能涉及患者肠道微生态失衡及多种相关免疫炎性因子产生与分泌的协同效应。

关键词: 免疫炎性因子, 肠道微生态, 肝性脑病

Abstract:

Objective To investigate the correlation of the kinds of gut common bacteria and serum inflammatory cytokines [tumor necrosis factor alpha（TNF-α）,interleukin（IL）-12,IL-6,IL-10,IL-1β and IL-23] in chronic hepatic encephalopathy（HE） patients,and to evaluate the roles of intestinal microecology and serum inflammatory cytokines in chronic HE. Methods Among chronic hepatitis B liver cirrhosis patients with decompensation,120 cases with HE were enrolled as HE group,and 100 cases without HE were enrolled as control group. Liver function indices [albumin（Alb）,alanine aminotransferase（ALT）,aspartate aminotransferase（AST）,total bilirubin（TB） and prothrombin time（PT）] and the Child classification of liver function were recorded. A total of 12 gut common bacteria were determined by fluorescence quantitative polymerase chain reaction（PCR）,and serum levels of 6 inflammatory cytokines were determined by enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）. Results Alb,ALT,AST,TB and the Child classification of liver function in HE group were higher than that in control group（P<0.05）,and there was no statistical significance for PT between the 2 groups（P>0.05）. Compared with control group,gut common bacteria with increased proliferation in HE group included pathogenic Escherichia coli,Pseudomonadaceae,Enterococcus,Prevotella,Staphylococcus,Fusobacterium and Candida albicans（P<0.05）,while gut common bacteria with decreased included Bifidobacterium,Lactobacillus and Ruminococcus（P<0.05）. Serum TNF-α,IL-12,IL-6,IL-10,IL-1β and IL-23 levels in HE group were higher than those in control group（P<0.001）. The correlations of gut common bacteria with liver function indices and with serum inflammatory cytokines in HE group were higher than those in control group. Conclusions Gut dysbacteriosis in intestinal microecology might collaboratively contribute to the development mechanism of chronic HE,through regulating the production and secretion of a variety of inflammatory cytokines.

Key words: Immune inflammatory cytokine, Intestinal microecology, Hepatic encephalopathy

中图分类号:

R446.62

刘冀川. 慢性HE患者肠道细菌种类与血清炎性因子相关性分析[J]. 检验医学, 2018, 33(10): 907-912.

HE LIU Jichuan. Correlation of the kinds of gut bacteria with serum inflammatory cytokines in patients with chronic[J]. Laboratory Medicine, 2018, 33(10): 907-912.

图/表 8

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细菌	引物序列（5'~3'）	片段长度（bp）
致病性大肠埃希菌	F：CATTGACGTTACCCGCGAGAAGAAGC	1 184
致病性大肠埃希菌	R：CTCTACGAGCTCAAGCTTGC
假单胞菌属	F：CCTGACCATCCGTCGCCACAAC	2 156
	R：CGCAGCAGGATGCCGACGCC
链球菌属	F：AGAGTTTGATCCTGGCTCAG	4 128
	R：AAGGAGGTGATCCAGCCGCA
肠球菌属	F：CCCTTATTGTTAGTTGCCATCATT	1 196
	R：ACTCGTTGTACTTCCCATTGT
葡萄球菌属	F：CTTTAAGCCAAGCCTTGACGAAC	2 166
	R：AAAGGGCAATACGCAAAGAGGT
双歧杆菌	F：CTCCTGGAAACGGGTGG	1 136
	R：GGTGTTCTTCCCGATATCTAC
乳酸杆菌	F：AGCAGTAGGGAATCTTCCA	1 352
	R：CACCGCTACACATGGAG
梭菌属	F：AAATGACGGTACCTGACTAA	1 294
	R：GC clamp-CTTTGAGTTTCATTCTTGCGAA
白念珠菌	F：TTTATCAACTTGTCACACCAGA	1 165
	R：ATCCCGCCTTACCACTACCG
普雷沃登菌属	F：GAAGGTCCCCCACATTG	3 115
普雷沃登菌属	R：CAATCGGAGTTCTTCGTG
拟杆菌属	F：TCAGTTGTGAAAGTTTGCG	1 412
	R：GC clamp-GTRTATCGCMAACAGCGA
瘤胃球菌属	F：GGTGGCAAAGCCATTCGGT	1 182
	R：GTTACGGGACGGTCAGAG

细菌	引物序列（5'~3'）	片段长度（bp）
致病性大肠埃希菌	F：CATTGACGTTACCCGCGAGAAGAAGC	1 184
致病性大肠埃希菌	R：CTCTACGAGCTCAAGCTTGC
假单胞菌属	F：CCTGACCATCCGTCGCCACAAC	2 156
	R：CGCAGCAGGATGCCGACGCC
链球菌属	F：AGAGTTTGATCCTGGCTCAG	4 128
	R：AAGGAGGTGATCCAGCCGCA
肠球菌属	F：CCCTTATTGTTAGTTGCCATCATT	1 196
	R：ACTCGTTGTACTTCCCATTGT
葡萄球菌属	F：CTTTAAGCCAAGCCTTGACGAAC	2 166
	R：AAAGGGCAATACGCAAAGAGGT
双歧杆菌	F：CTCCTGGAAACGGGTGG	1 136
	R：GGTGTTCTTCCCGATATCTAC
乳酸杆菌	F：AGCAGTAGGGAATCTTCCA	1 352
	R：CACCGCTACACATGGAG
梭菌属	F：AAATGACGGTACCTGACTAA	1 294
	R：GC clamp-CTTTGAGTTTCATTCTTGCGAA
白念珠菌	F：TTTATCAACTTGTCACACCAGA	1 165
	R：ATCCCGCCTTACCACTACCG
普雷沃登菌属	F：GAAGGTCCCCCACATTG	3 115
普雷沃登菌属	R：CAATCGGAGTTCTTCGTG
拟杆菌属	F：TCAGTTGTGAAAGTTTGCG	1 412
	R：GC clamp-GTRTATCGCMAACAGCGA
瘤胃球菌属	F：GGTGGCAAAGCCATTCGGT	1 182
	R：GTTACGGGACGGTCAGAG

组别	例数	年龄（岁）	性别		粪便湿重	Alb（g/L）	ALT
组别	例数	年龄（岁）	男性[例（%）]	女性[例（%）]	（g）	Alb（g/L）	（U/L）
HE组	120	39.45±12.05	56（46.67）	64（53.33）	218.9±21.08	31.28±6.79	167.31±34.27
对照组	100	41.23±11.18	51（51.00）	49（49.00）	220.46±19.86	39.64±8.25	114.36±28.94
统计值		1.91	0.41		1.21	2.43	2.562
P值		0.069	0.522		0.239	0.024	0.018
组别	AST（U/L）	TB（mmol/L）	PT（s）	肝功能Child分级
组别	AST（U/L）	TB（mmol/L）	PT（s）	A	B/C
HE组	184.53±31.22	62.38±22.34	15.77±4.25	19	73/28
对照组	135.92±24.26	26.87±8.26	16.86±3.56	57	Nov-32
统计值	2.733	4.97	1.396	40.881
P值	0.012	0.001	0.177	P<0.001

组别	例数	年龄（岁）	性别		粪便湿重	Alb（g/L）	ALT
组别	例数	年龄（岁）	男性[例（%）]	女性[例（%）]	（g）	Alb（g/L）	（U/L）
HE组	120	39.45±12.05	56（46.67）	64（53.33）	218.9±21.08	31.28±6.79	167.31±34.27
对照组	100	41.23±11.18	51（51.00）	49（49.00）	220.46±19.86	39.64±8.25	114.36±28.94
统计值		1.91	0.41		1.21	2.43	2.562
P值		0.069	0.522		0.239	0.024	0.018
组别	AST（U/L）	TB（mmol/L）	PT（s）	肝功能Child分级
组别	AST（U/L）	TB（mmol/L）	PT（s）	A	B/C
HE组	184.53±31.22	62.38±22.34	15.77±4.25	19	73/28
对照组	135.92±24.26	26.87±8.26	16.86±3.56	57	Nov-32
统计值	2.733	4.97	1.396	40.881
P值	0.012	0.001	0.177	P<0.001

组别	例数	致病性大肠埃希菌	双歧杆菌	链球菌属	假单胞菌属	肠球菌属	拟杆菌属
HE组	120	7.98±2.14	4.63±1.18	5.45±2.12	12.54±3.84	8.25±1.96	8.94±2.15
对照组	100	5.76±1.26	6.89±1.35	5.87±1.96	6.86±1.18	4.84±2.03	9.07±1.87
t值		2.865	2.965	1.467	3.168	3.442	1.764
P值		0.009	0.007	0.156	0.004	0.002	0.092
组别	普雷沃登菌属	乳酸杆菌	瘤胃球菌属	葡萄球菌属	梭菌属	白念珠菌
HE组	13.27±3.46	2.38±0.48	4.52±1.49	9.73±2.71	9.64±2.85	10.96±2.04
对照组	8.34±1.59	7.66±2.08	7.35±2.16	4.28±1.32	5.49±1.21	5.65±1.65
t值	3.653	3.977	3.368	3.564	3.666	4.958
P值	0.001	0.001	0.003	0.002	0.001	<0.001