检验医学 ›› 2008, Vol. 23 ›› Issue (02): 187-190.
熊石龙%王前%包杰%郑磊%曾方银%裘宇容
摘要： 目的 通过构建携带人组织因子基因的RNAi慢病毒载体,获得可供转染的滴度,为下一步研究该基冈缺陷在真核细胞中的影响提供物质基础.方法 根据人组织因子基因设计的2条互补的单链寡核苷酸退火后形成双链,插入到pENTRTM/U6载体的粘性末端,生成含RNAi盒的pENTR/U6载体,测序;与目标载体pLenti6/BLOCK-iTTM-DEST vector进行位点特异性重组,再测序;经脂质体导入293FT细胞,包装成慢病毒,收集病毒上清并采用系列稀释法测定病毒滴度.结果 经测序分析证实pENTTM/U6-TF-shRNA为阳性克隆,与载体pLenti6,/BLOCK-iTTM-DEST vector重组后测序结果显示也为阳性克隆,包装病毒,病毒悬液的滴度为5×105 TU/mL.结论 成功构建了携带人组织因子(TF)基因的RNAi慢病毒载体,为血栓栓塞性疾病的防治提供了新的思路.
中图分类号:
