邻-甲联苯胺法测定血浆游离血红蛋白的基质效应及消除方法

doi:10.3969/j.issn.1673-8640.2016.04.008

摘要/Abstract

摘要：

目的研究邻-甲联苯胺法（经典方法）测定血浆游离血红蛋白（Hb）的基质效应及消除方法。方法以用生理盐水1 000倍稀释的Hb储存液（浓度为103.1 g/L）作为标准液,将此Hb标准液再用无Hb血浆分别稀释500、1 000、2 000、4 000倍（游离Hb理论浓度分别为206.20、103.10、51.55、25.78 mg/L）,然后用经典方法测定游离Hb浓度,比较与理论值的差异。将Hb储存液分别用生理盐水（经典方法）、无Hb血浆（消除方法1）、混合血浆（消除方法2）1 000倍稀释作为标准液。经典方法和消除方法1的计算公式为血浆游离Hb（mg/L）=测定管吸光度（A）值×标准液浓度÷标准管A值;消除方法2的计算公式为血浆游离Hb（mg/L）=测定管A值×标准液浓度÷（标准管A值×混合血浆A值）;消除方法3操作同经典方法,计算公式为血浆游离Hb（mg/L）=测定管A值×标准液浓度×2.35÷标准管A值。测定40份标本,比较各消除方法的结果。在血浆中分别加入206.20、103.10、51.55 mg/L Hb,测定各消除方法的回收率。分别取6.25、12.50、25.00、50.00 μg/L维生素C溶液4.5 mL,各加1.031 g/L Hb标准液0.5 mL,用经典方法测定回收率。结果采用无Hb血浆500、1 000、2 000、4 000倍稀释的Hb标准液的游离Hb测定结果分别为87.85、43.16、21.90、10.99 mg/L。40份标本采用经典方法、消除方法1、消除方法2、消除方法3测定的游离Hb浓度分别为（7.99±4.90）、（18.61±11.42）、（19.18±11.77）、（18.77±11.52）mg/L;消除方法1、消除方法2、消除方法3的结果均高于经典方法（P均<0.01）,但3种消除方法之间差异均无统计学意义（P均>0.05）。经典方法、消除方法1、消除方法2、消除方法3的平均回收率分别为42.54%、98.33%、100.98%、97.56%。采用经典方法检测Hb在6.25、12.50、25.00、50.00 μg/L维生素C溶液中的回收率分别为98.57%、98.17%、97.17%、95.16%。结论邻-甲联苯胺法测定血浆游离Hb存在基质效应,3种消除方法均可消除基质效应影响。

关键词: 游离血红蛋白, 基质效应, 邻-甲联苯胺法

Abstract:

Objective To study the matrix effect of o-methyl benzidine method （classic method）in determining plasma free hemoglobin （Hb）and the eliminating methods. Methods Hb storage solution diluted 1 000 times by normal saline （concentration was 103.1g/L）was used as standard,while the standard diluted by Hb-free plasma 500,1 000,2 000 and 4 000 times（theoretical concentrations were 206.20,103.10,51.55 and 25.78 mg/L）was determined by classic method for plasma free Hb. The results were compared with theoretical values. Hb storage solution diluted 1 000 times by normal saline（classic method）, Hb-free plasma（eliminating method 1） and mixed plasma（eliminating method 2）was used as standard. The equation of classic method and eliminating method 1 was plasma free Hb（mg/L）=test tube absorbance（A）× concentration of standard ÷ standard tube A. The equation of eliminating method 2 was plasma free Hb（mg/L）= test tube A×concentration of standard ÷ （standard tube A× mixed plasma A）. The equation of eliminating method 3 was plasma free Hb（mg/L）= test tube A× concentration of standard ×2.35÷standard tube A. A total of 40 specimens were determined,and the results of different eliminating methods were compared. Hb of 206.20, 103.10 and 51.55 mg/L were added into plasma,and the recovery rate of each method was determined. Adding 0.5 mL of 1.031 g/L standard,in 4.5 mL of vitamin C solution of 6.25,12.50,25.00 and 50.00 μg/L, the recovery rate was determined by classic method. Results The theoretical values of plasma free Hb were 87.85, 43.16, 21.90 and 10.99 mg/L for standard diluted by Hb-free plasma 500,1 000,2 000 and 4 000 times. As to 40 specimens,plasma free Hb concentrations of classic method, eliminating method 1,eliminating method 2 and eliminating method 3 were（7.99±4.90）,（18.61±11.42）,（19.18±11.77） and（18.77±11.52）mg/L,the results of eliminating method 1,eliminating method 2 and eliminating method 3 were higher than that of classic method（P<0.01）,and there was no statistical significance among the 3 eliminating methods（P>0.05）. The average recovery rates of classic method, eliminating method 1 ,eliminating method 2 and eliminating method 3 were 42.54%, 98.33%, 100.98% and 97.56%. The recovery rates of vitamin C solution of 6.25,12.50,25.00 and 50.00 μg/L were 98.57%,98.17%,97.17% and 95.16%. Conclusions There is matrix effect of o-methyl benzidine method in determining plasma free Hb, and the 3 eliminating methods are effective.

Key words: Free hemoglobin, Matrix effect, o-Methyl benzidine method

中图分类号:

R446.1

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Hb加入量（mg/L）	枸橼酸盐抗凝混合血浆	EDTA-K₂抗凝混合血浆	肝素抗凝混合血浆	混合血清
51.55	41.31	43.05	42.77	43.24
103.10	41.76	43.80	40.15	41.57
206.20	44.56	43.97	41.76	44.13
平均回收率	42.54	43.61	41.56	42.92

Hb加入量（mg/L）	枸橼酸盐抗凝混合血浆	EDTA-K₂抗凝混合血浆	肝素抗凝混合血浆	混合血清
51.55	41.31	43.05	42.77	43.24
103.10	41.76	43.80	40.15	41.57
206.20	44.56	43.97	41.76	44.13
平均回收率	42.54	43.61	41.56	42.92

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邻-甲联苯胺法测定血浆游离血红蛋白的基质效应及消除方法

Eliminating matrix effect in the determination of plasma free hemoglobin by o-methyl benzidine method

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Hb加入量（mg/L）	消除方法1	消除方法2	消除方法3
51.55	96.10	98.56	95.20
103.10	101.61	103.46	100.41
206.20	97.29	100.92	97.08
平均回收率	98.33	100.98	97.56