Application of CD14 reverse assisted gate method in detection of lymphocyte subsets

doi:10.3969/j.issn.1673-8640.2024.03.004

Abstract

Abstract:

Objective To establish CD14 reverse assisted gate method and investigate its application in the detection of lymphocyte subsets. Methods CD14-BV421 antibody was added to the conventional 6-color flow cytometry assay（conventional flow cytometry），and CD14 reverse assisted gate method was established. The lymphocyte subsets of quality control products，samples with different placement times（4，24，48 and 72 h）and patients with different diseases（systemic lupus erythematosus，viral pneumonia and kidney transplantation）were detected by conventional flow cytometry and CD14 reverse assisted gate method，and the difference and deviation of the detection results of the 2 methods were compared. Results The percentage of lymphocytes（LYMPH%）and the percentage of natural killer（NK）cells（NK%）detected by CD14 reverse assisted gate method were lower than those by conventional flow cytometry method（P<0.05），while there was no statistical significance in all the items between the 2 methods（P>0.05）. Compared with 4 h，the differentiation between CD14⁺ monocytes and lymphocytes was decreased with the extension of the sample placement time. Compared with whole blood samples at room temperature for 4 h，the relative deviations of CD14 reverse assisted gate method and conventional flow cytometry were <5% after 24 h（P>0.05）. After 48 h of sample placement，the relative deviations of CD14 reverse assisted gate method were all <5%，and the relative deviations of cytotoxic T lymphocyte（CTL）（CD3⁺CD8⁺）and B cells（CD3^-CD19⁺）percentages and their absolute values were all >5% by conventional flow cytometry. After 72 h of sample placement，the relative deviation of all the items by the both methods was >10%，which was clinically unacceptable. CD14 reverse assisted gate method can be used to detect lymphocyte subsets in peripheral blood of patients with systemic kidney erythematosus，viral pneumonia and kidney transplantation，which could better distinguish lymphocytes from monocytes and reduce the influence of atypical monocytes on NK% and the absolute value of NK cells. Conclusions CD14 reverse assisted gate method can reduce the wrong loop of lymphocyte gate in flow cytometry and improve the detection accuracy.

Key words: CD14, Reverse assisted gate method, Lymphocyte subset, Flow cytometry

CLC Number:

R446.1

JING Lanting, ZHU Mengting, YANG Zhenkun, LUO Yuanyuan, ZOU Jian, YIN Ying. Application of CD14 reverse assisted gate method in detection of lymphocyte subsets[J]. Laboratory Medicine, 2024, 39(3): 227-236.

Figures/Tables 10

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方法	LYMPH%/%	CD3⁺%/%	CD3⁺CD4⁺%/%	CD3⁺CD8⁺%/%	CD3^-CD19⁺%/%	NK%/%
CD14反向法	17.69±0.29	51.38±0.71	12.96±0.73	33.53±0.57	20.18±0.70	28.06±0.85^①
常规法	18.02±0.35^**	51.21±0.65	12.64±0.70	33.08±0.65	19.68±0.67	28.75±0.77^①*
靶值		54±9	14±7	36±6	21±5	21±4
方法	LYMPH#^②/（个·μL^-1）	CD3⁺细胞/（个·μL^-1）	CD3⁺CD4⁺细胞/（个·μL^-1）	CD3⁺CD8⁺细胞/（个·μL^-1）	CD3^-CD19⁺细胞/（个·μL^-1）	NK细胞/ （个·μL^-1）
CD14反向法	962.06±39.83	494.15±18.28	124.64±7.94	322.52±13.49	194.20±10.92	270.01±15.61^①
常规法	980.48±42.65	501.96±20.27	123.91±7.86	322.32±13.89	192.92±10.53	281.94±16.23^①
靶值		431±108	110±58	287±118	170±85	167±84

方法	LYMPH%/%	CD3⁺%/%	CD3⁺CD4⁺%/%	CD3⁺CD8⁺%/%	CD3^-CD19⁺%/%	NK%/%
CD14反向法	17.69±0.29	51.38±0.71	12.96±0.73	33.53±0.57	20.18±0.70	28.06±0.85^①
常规法	18.02±0.35^**	51.21±0.65	12.64±0.70	33.08±0.65	19.68±0.67	28.75±0.77^①*
靶值		54±9	14±7	36±6	21±5	21±4
方法	LYMPH#^②/（个·μL^-1）	CD3⁺细胞/（个·μL^-1）	CD3⁺CD4⁺细胞/（个·μL^-1）	CD3⁺CD8⁺细胞/（个·μL^-1）	CD3^-CD19⁺细胞/（个·μL^-1）	NK细胞/ （个·μL^-1）
CD14反向法	962.06±39.83	494.15±18.28	124.64±7.94	322.52±13.49	194.20±10.92	270.01±15.61^①
常规法	980.48±42.65	501.96±20.27	123.91±7.86	322.32±13.89	192.92±10.53	281.94±16.23^①
靶值		431±108	110±58	287±118	170±85	167±84

方法	LYMPH%/%	CD3⁺%/%	CD3⁺CD4⁺%/%	CD3⁺CD8⁺%/%	CD3^-CD19⁺%/%	NK%/%
CD14反向法	24.66±0.48	74.24±0.64	50.37±0.92	20.59±0.39	11.97±0.50	13.46±0.52
常规法	24.74±0.67	74.27±0.68	49.90±0.98	20.36±0.46	11.67±0.52	13.76±0.67
靶值		76±9	52±9	22±6	13±5	10±4
方法	LYMPH#/（个·μL^-1）	CD3⁺细胞/ （个·μL^-1）	CD3⁺CD4⁺细胞/（个·μL^-1）	CD3⁺CD8⁺细胞/（个·μL^-1）	CD3^-CD19⁺细胞/（个·μL^-1）	NK细胞/ （个·μL^-1）
CD14反向法	1 249.29±30.33	927.54±28.14	629.38±23.15	257.24±8.01	149.51±5.98	168.06±6.19^①
常规法	1 253.47±36.96	931.08±31.96	625.60±23.67	255.15±9.16	146.21±6.25	172.38±9.02^①
靶值		836±260	598±165	255±118	141±67	110±56

方法	LYMPH%/%	CD3⁺%/%	CD3⁺CD4⁺%/%	CD3⁺CD8⁺%/%	CD3^-CD19⁺%/%	NK%/%
CD14反向法	24.66±0.48	74.24±0.64	50.37±0.92	20.59±0.39	11.97±0.50	13.46±0.52
常规法	24.74±0.67	74.27±0.68	49.90±0.98	20.36±0.46	11.67±0.52	13.76±0.67
靶值		76±9	52±9	22±6	13±5	10±4
方法	LYMPH#/（个·μL^-1）	CD3⁺细胞/ （个·μL^-1）	CD3⁺CD4⁺细胞/（个·μL^-1）	CD3⁺CD8⁺细胞/（个·μL^-1）	CD3^-CD19⁺细胞/（个·μL^-1）	NK细胞/ （个·μL^-1）
CD14反向法	1 249.29±30.33	927.54±28.14	629.38±23.15	257.24±8.01	149.51±5.98	168.06±6.19^①
常规法	1 253.47±36.96	931.08±31.96	625.60±23.67	255.15±9.16	146.21±6.25	172.38±9.02^①
靶值		836±260	598±165	255±118	141±67	110±56

方法	LYMPH%		CD3⁺%			CD3⁺CD4⁺%
方法	检测值/%	平均偏移^①/%	检测值/%	平均偏移^①/%		检测值/%	平均偏移^①/%
放置4 h
反向法	33.85（17.15，66.90）		63.88（51.4，79.55）			32.08（23.67，50.98）
常规法	35.02（17.47，67.07）	0.60	63.12（50.72，79.44）	-0.53		31.88（23.57，50.70）	-0.54
放置24 h
反向法	31.32（16.08，65.41）	-5.92	62.82（51.11，80.31）	0.28		32.47（23.29，51.09）	-0.16
常规法	31.85（16.50，66.15）	-4.59	62.25（50.09，79.77）	-0.93		32.05（23.21，50.68）	-1.40
放置48 h
反向法	31.62（15.81，61.55）	-7.64	65.22（50.89，81.10）	1.81		31.17（23.8，50.40）	-0.48
常规法	32.35（16.17，63.45）	-6.30	64.83（50.52，80.64）	0.86		30.53（23.53，49.92）	-2.89
放置72 h
反向法	29.99（15.07，56.95）	-11.22	66.71（52.70，81.33）	3.66		32.07（24.03，50.89）	2.09
常规法	31.92（15.66，60.18）	-6.78	65.63（52.73，81.36）	3.32		31.43（23.86，50.37）	-0.46
方法	CD3⁺CD8⁺%		CD19⁺%		NK%
方法	检测值/%	平均偏移^①/%	检测值/%	平均偏移^①/%		检测值/%	平均偏移^①/%
放置4 h
反向法	22.13（16.14，38.30）		11.12（9.62，24.37）			19.09（7.48，37.94）
常规法	22.03（15.90，38.23）	-0.46	11.01（9.52，24.29）	-0.63		19.15（7.39，37.91）	0.24
放置24 h
反向法	22.26（16.50，38.47）	1.24	11.71（9.46，24.33）	1.48		18.88（7.93，37.03）	-0.31
常规法	22.06（16.19，38.20）	0.01	11.55（9.22，24.04）	0.12		19.02（7.91，36.88）	0.26
放置48 h
反向法	23.31（16.55，41.07）	4.93	11.28（8.41，23.16）	4.94		18.79（6.93，37.51）	-2.95
常规法	23.28（16.59，41.18）	5.22	10.98（8.23，21.08）	-7.70		18.62（7.09，37.32）	-2.31
放置72 h
反向法	23.28（16.09，41.02）	5.04	10.22（7.23，21.58）	-14.25		19.00（7.37，37.28）	-4.35
常规法	23.44（16.34，41.10）	6.39	9.91（7.03，21.50）	-15.24		18.62（7.46，36.54）	-5.06
方法	LYMPH#		CD3⁺细胞		CD3⁺CD4⁺细胞
方法	检测值/（个·μL^-1）	平均偏移^①/%	检测值/（个·μL^-1）	平均偏移^①/%		检测值/（个·μL^-1）	平均偏移^①/%
放置4 h
反向法	2 974.10（1 593.29，5 728.83）		1 928.46（976.50，3 845.19）			935.14（417.53，2 651.33）
常规法	2 987.71（1 623.67，5 743.56）	0.81	1 929.85（977.34，3 851.26）	-0.71		935.74（417.53，2 653.77）	-1.74
放置24 h
反向法	3 093.63（1 664.74，5 831.71）	2.52	2 030.03（948.12，3 875.77）	2.86		953.57（426.79，2 647.06）	2.32
常规法	3 126.31（1 707.74，5 876.17）	3.97	1 925.12（949.91，3 871.79）	1.86		954.75（427.94，2 648.57）	1.40
放置48 h
反向法	3 021.64（1 614.04，5 307.23）	-0.34	1 928.68（960.37，3 684.93）	1.42		908.26（446.15，2 525.46）	-0.96
常规法	3 068.20（1 650.86，5 453.02）	1.07	1 959.07（990.36，3 401.24）	2.18		914.01（449.36，2 558.72）	-1.52
放置72 h
反向法	2 810.72（1 545.68，4 945.89）	-2.62	1 800.65（945.23，3 635.82）	0.91		998.85（431.94，2 490.57）	-0.62
常规法	2 867.21（1 599.00，5 204.78）	1.67	1 854.35（1 037.68，3 811.74）	4.96		1 017.09（435.10，2 542.77）	1.12
方法	CD3⁺CD8⁺细胞		CD19⁺细胞		NK细胞
方法	检测值/（个·μL^-1）	平均偏移^①/%	检测值/（个·μL^-1）	平均偏移^①/%		检测值/（个·μL^-1）	平均偏移^①/%
放置4h
反向法	618.28（363.50，1 133.36）		336.99（154.84，1 397.66）			535.29（267.28，1 247.97）
常规法	619.29（363.90，1 135.18）	-0.66	337.20（154.84，1 396.34）	-0.79		551.00（268.51，1 270.33）	0.45
放置24 h
反向法	645.91（364.74，1 150.39）	3.89	360.11（157.61，1 419.14）	3.92		550.74（246.06，1 284.01）	1.43
常规法	646.07（365.63，1 154.10）	3.99	360.71（157.61，1 412.45）	3.92		564.30（253.19，1 309.56）	3.42
放置48 h
反向法	605.98（373.76，1 127.38）	2.76	338.48（135.69，1 387.32）	-4.92		530.47（242.58，1 212.83）	-3.03
常规法	607.83（385.11，1 157.51）	5.72	346.86（135.89，1 309.75）	-5.29		552.27（248.10，1 233.32）	-0.79
放置72 h
反向法	564.77（346.79，1 113.08）	2.41	284.49（111.78，802.21）	-16.47		461.42（238.60，1 089.22）	-6.91
常规法	591.38（397.83，1 130.17）	8.10	287.74（112.61，866.22）	-13.80		480.66（239.62，1 145.91）	-3.59