检验医学 ›› 1986, Vol. 1 ›› Issue (2): 77-81.

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β-半乳糖苷酶纯化鉴定与酶联分析中的应用

曾贞元,刘明,刘桂珍,朱嘉庸   

  1. 卫生部上海生物制品研究所
  • 出版日期:1986-04-01 发布日期:2015-11-09

  • Online:1986-04-01 Published:2015-11-09

摘要: 本文报道大肠杆菌β-半乳糖苷酶的亲和层析法。用底物类似物亲和柱(对氨基苯-硫代-半乳糖吡喃苷-琼脂糖4B)可制备高纯度酶,方法简便,适于大量制备。酶在PAGE上显示六条区带;主区带与另三条活性区带迁移率分别为13.5、7.5、6.3和4.6mm。主区带亚基的分子量130,000。与酶抗体免疫电泳呈两条沉淀线。酶米氏常数为4.35×10-4M。其SH基含量18.5个/克分子蛋白。活力500U/mg蛋白左右。可达美国Sigma Ⅵ型规格。酶经戊二醛一步法标记抗人IgG;阐明了ELISA中底物浓度、反应温度与时间的影响因素。人IgG测定敏感度为6.4~20ng。酶经混合酸酐法标记皮质醇衍生物,初步建立了双抗体液相竞争法。抗原、抗体获得满意检测结果。证明该酶在EIA中的应用价值。