纤溶酶产生菌的鉴定及产酶优化

doi:10.3969/j.issn.1673-8640.2017.04.021

检验医学 ›› 2017, Vol. 32 ›› Issue (4): 338-342.DOI: 10.3969/j.issn.1673-8640.2017.04.021

纤溶酶产生菌的鉴定及产酶优化

李立卓¹, 黄环静², 李卓伟³, 郑梅⁴

1.河北医科大学第一医院心血管内科,河北石家庄 050031
2.华北制药金坦生物技术股份有限公司,河北石家庄 050035
3.河北远征药业有限公司,河北石家庄 050041
4. 石家庄市第一医院心内三科,河北石家庄 050011

出版日期:2017-04-20 发布日期:2017-05-01
作者简介:null
作者简介：李立卓,男,1982年生,硕士,主治医师,主要从事冠心病诊治、临床实验研究。

通信作者：郑梅,联系电话：0311-86861310。

Identification of fibrinolytic enzyme-producing strain and optimization of producing enzyme conditions

LI Lizhuo¹, HUANG Huanjing², LI Zhuowei³, ZHENG Mei⁴

1. Department of Cardiology,the First Hospital of Hebei Medical University,Shijiazhuang 050031,Hebei,China
2. NCPC GeneTech Biotechnology Co.,Ltd.,Shijiazhuang 050035,Hebei,China
3. Hebei Yuanzheng Pharmaceutical Co.,Ltd.,Shijiazhuang 050041,China
4. Department 3 of Cardiology,the First Hospital of Shijiazhuang,Shijiazhuang 050011,Hebei,China

Online:2017-04-20 Published:2017-05-01

摘要/Abstract

摘要：

目的对纤溶酶产生菌——LZ-01菌株进行种属鉴定并优化其产酶能力。方法对LZ-01菌株的形态特征进行观察,并进行生理生化试验和phoR基因的序列相似性分析以确定菌株种属,通过单因素试验考察碳源、氮源等对菌株发酵产酶活力的影响,采用正交实验确定菌株最佳产酶工艺条件。结果经鉴定,LZ-01菌株与解淀粉芽孢杆菌标准菌株FZ42的相似度达99.78%,鉴定LZ-01菌株为解淀粉芽孢杆菌。经工艺优化后的酶活力是未经优化酶活力的3.63倍。结论本研究为进一步开发纤溶酶制剂溶栓药物提供了一定的理论依据。

关键词: 纤溶酶, 鉴定, 解淀粉芽孢杆菌, 优化, 单因素试验, 正交试验

Abstract:

Objective To identify fibrinolytic enzyme-producing strain （LZ-01） and optimize producing enzyme conditions. Methods The morphological characteristics of LZ-01 were observed. Physiological and biochemical tests and the sequence similarity analysis of phoR gene were adopted to determine the strain. Through single factor experiment,the influence of carbon source and nitrogen source on enzyme activity was investigated,and the optimal conditions of enzyme production were determined by orthogonal experiment. Results After the identification,the similarity of this strain and Bacillus amyloliquefaciens standard strain FZ42 was 99.78%. So,the strain was identified as Bacillus amyloliquefaciens. After optimizing,the producing enzyme activity increased by 3.63 times. Conclusions This study provides a theoretical basis for the further development of fibrinolytic drugs.

Key words: Fibrinolytic enzyme, Identification, Bacillus amyloliquefaciens, Optimization, Single factor experiment, Orthogonal experiment

中图分类号:

R446.5

李立卓, 黄环静, 李卓伟, 郑梅. 纤溶酶产生菌的鉴定及产酶优化[J]. 检验医学, 2017, 32(4): 338-342.

LI Lizhuo, HUANG Huanjing, LI Zhuowei, ZHENG Mei. Identification of fibrinolytic enzyme-producing strain and optimization of producing enzyme conditions[J]. Laboratory Medicine, 2017, 32(4): 338-342.

图/表 4

参考文献 14

[1]	卫生部心血管病防治研究中心. 中国心血管病报告2011[M]. 北京:中国大百科全书出版社,2012:7-12.
[2]	翁郁华,杨晓彤,杨明俊,等. 微生物纤溶酶的多样性与应用前景[J]. 现代生物医学进展,2010,10(8):1562-1565.
[3]	陆核,阮长耿. 血栓与止血[M]. 南京:江苏科技出版社,1994:335-368.
[4]	秦毓茜,任朝斌. 微生物源纤溶酶的研究进展[J]. 南阳理工学院学报,2012,4(2):86-88.
[5]	关晨晨,赵敏. 豆豉纤溶酶的分离纯化及部分酶学性质研究[J]. 中国药学杂志,2010,58(16):1218-1223.
[6]	WU B,WU L,CHEN D,et al.Purification and characterization of a novel fibrinolytic protease from Fusarium sp. CPCC 480097[J]. J Ind Microbiol Biotechnol,2009,36(3):451-459.
[7]	文浩平,和七一,邓疆渝,等. 微生物源纤溶酶的研究进展[J]. 重庆师范大学学报(自然科学版),2011,28(3):60-63.
[8]	赵洪,何执中. 溶栓药物研究进展[J]. 中国生化药物杂志,2003,24(1):51-53.
[9]	东秀珠,蔡妙英. 常见细菌系统鉴定手册[M]. 北京:科学出版社,2001:349-388.
[10]	李雯,袁洪水,朱宝成. 地衣芽孢杆 lw-72 合成纤溶酶的摇瓶发酵工艺优化[J]. 中国医药工业杂志,2010,41(2):95-97.
[11]	MARDER V J,BLINC A,GRUBER T,et al.Comparison of plasmin with recombinant tissue-type plasminogen activator in lysis of cerebral thromboemboli retrieved from patients with acute ischemic stroke[J]. Stroke,2011,42(8):2222-2228.
[12]	MARDER V J,COMEROTA A J,SHLANSKY-GOLDBERG R D,et al. Safety of catheter-delivered plasmin in patients with acute lower extremity arterial or bypass graft occlusion:phaseⅠ results[J]. J Thromb Haemost,2012,10(6):985-991.
[13]	李磊. 观察注射用纤溶酶联合低分子肝素钙治疗肺栓塞易栓因素患者的临床疗效[J]. 中国实用医药,2016,11(13):188-189.
[14]	刘熔增,莫炜,于敏. 纤溶酶及其衍生物溶栓研究进展[J]. 国际药学研究杂志,2014,57(3):296-300.

项目	LZ-01菌株	项目	LZ-01菌株
硫化氢试验	-	淀粉水解试验	+
脓青素产生试验	-	纤维素水解试验	-
丙二酸利用试验	-	亚硝酸盐还原试验	+
柠檬酸盐试验	+	3-酮基乳糖试验	+
糖醇发酵试验	+	反硝化试验	-
甲基红试验	-	脲酶试验	-
V.P.试验	-	产氨试验	-
接触酶	+	吲哚试验	-

项目	LZ-01菌株	项目	LZ-01菌株
硫化氢试验	-	淀粉水解试验	+
脓青素产生试验	-	纤维素水解试验	-
丙二酸利用试验	-	亚硝酸盐还原试验	+
柠檬酸盐试验	+	3-酮基乳糖试验	+
糖醇发酵试验	+	反硝化试验	-
甲基红试验	-	脲酶试验	-
V.P.试验	-	产氨试验	-
接触酶	+	吲哚试验	-

序列号	种名	菌种号	相似性（%）
JN580984	萎缩芽孢杆菌	NRS-213T	70.7
JN580983	萎缩芽孢杆菌	SB512	38.4
JN580982	解淀粉芽孢杆菌	CU8004	92.3
JN580979	解淀粉芽孢杆菌	FZ42	97.8
CP002183	枯草芽孢杆菌	str.W23	40.6
JN580970	枯草芽孢杆菌	MAS88	69.4
JN580925	枯草芽孢杆菌	BD170	69.5
JN580971	枯草芽孢杆菌	ATCC 21332	69.6
JN580924	枯草芽孢杆菌	NDH03	69.4
JN580981	枯草芽孢杆菌	168	69.4
JN580976	地衣芽孢杆菌	ATCC 8480	36.9
JN580977	地衣芽孢杆菌	ATCC 11946	36.8
JN580978	短小芽孢杆菌	ATCC 7061	34.1
CP000813	短小芽孢杆菌	SAFR032	33.7
JN580980	短小芽孢杆菌	Biosubtyl	81.2
JN575333.1	苏云金芽孢杆菌	HD2	33.3
NC_006274.1	蜡状芽孢杆菌	E33L	33.3
JN580985.1	坚强芽孢杆菌	NRS854	32.9
JN580986.1	坚强芽孢杆菌	NRS613	33.2

序列号	种名	菌种号	相似性（%）
JN580984	萎缩芽孢杆菌	NRS-213T	70.7
JN580983	萎缩芽孢杆菌	SB512	38.4
JN580982	解淀粉芽孢杆菌	CU8004	92.3
JN580979	解淀粉芽孢杆菌	FZ42	97.8
CP002183	枯草芽孢杆菌	str.W23	40.6
JN580970	枯草芽孢杆菌	MAS88	69.4
JN580925	枯草芽孢杆菌	BD170	69.5
JN580971	枯草芽孢杆菌	ATCC 21332	69.6
JN580924	枯草芽孢杆菌	NDH03	69.4
JN580981	枯草芽孢杆菌	168	69.4
JN580976	地衣芽孢杆菌	ATCC 8480	36.9
JN580977	地衣芽孢杆菌	ATCC 11946	36.8
JN580978	短小芽孢杆菌	ATCC 7061	34.1
CP000813	短小芽孢杆菌	SAFR032	33.7
JN580980	短小芽孢杆菌	Biosubtyl	81.2
JN575333.1	苏云金芽孢杆菌	HD2	33.3
NC_006274.1	蜡状芽孢杆菌	E33L	33.3
JN580985.1	坚强芽孢杆菌	NRS854	32.9
JN580986.1	坚强芽孢杆菌	NRS613	33.2

[1]	李赟, 尹萍, 张武文, 李凯, 童国庆. 精液优化处理后正常形态精子百分率对体外受精胚胎结局的影响[J]. 检验医学, 2022, 37(9): 835-838.
[2]	钱蓓蓓, 陶佳莹, 毛佩敏, 刘晓艳. 不同孕期孕妇蛋白C、蛋白S、纤溶酶原变化及其临床意义[J]. 检验医学, 2022, 37(9): 847-849.
[3]	刘聪聪, 李佳萍, 周宏伟. 2套质谱系统临床微生物鉴定性能评估[J]. 检验医学, 2022, 37(11): 1084-1088.
[4]	杨溪, 宋文琪, 董方, 孟庆盈, 甄景慧, 周为. 革兰染色与MALDI-TOF MS在快速鉴定儿童阳性血培养病原菌种类中的应用[J]. 检验医学, 2022, 37(10): 969-973.
[5]	王婧婧, 吴林清, 陈如寿, 王玉丰. 耐万古霉素肠球菌耐药基因、转座子结构和多位点序列分析[J]. 检验医学, 2021, 36(9): 891-895.
[6]	余佳佳, 李媛睿, 刘瑛. SDS和SAP前处理联合MALDI-TOF MS在报阳血培养样本快速病原菌鉴定中的价值[J]. 检验医学, 2021, 36(8): 864-868.
[7]	丁毅伟, 韩志海. MALDI-TOF MS在人工关节置换术后病原菌快速鉴定中的价值[J]. 检验医学, 2021, 36(6): 656-661.
[8]	寄晓义, 李冬, 戴燕. 住院患者血乳酸和血氨的检测流程优化及质量提升[J]. 检验医学, 2021, 36(4): 374-377.
[9]	陈蓉, 张敏敏, 夏启航, 钱诚凯, 崔琳, 刘学杰, 徐蓉, 王庆忠, 葛平, 黄维纲, 王敬华. 上海地区真菌培养鉴定及体外药物敏感性试验室间质量评价结果分析[J]. 检验医学, 2021, 36(4): 441-443.
[10]	乔玉莉, 黄宗帅, 田月如, 关明, 蒋晓飞. 血培养瓶增菌法快速鉴定和快速药物敏感性试验可行性分析[J]. 检验医学, 2021, 36(3): 270-274.
[11]	兰菲菲, 丁红珂, 陈延冰, 余丽华, 尹爱华. 亲子鉴定中STR基因座来源不明突变的分析[J]. 检验医学, 2021, 36(2): 185-189.
[12]	黄韵, 李从荣. 高毒力肺炎克雷伯菌研究进展[J]. 检验医学, 2021, 36(11): 1181-1185.
[13]	王军杰, 马冰, 李轶, 闫文娟, 王山梅, 马琼, 张江峰, 许俊红, 袁有华. 质谱技术直接鉴定报阳血培养细菌可行性分析[J]. 检验医学, 2020, 35(7): 716-720.
[14]	肖潇, 高春芳. 循环肿瘤细胞在原发性肝癌中的研究应用进展[J]. 检验医学, 2019, 34(7): 661-666.
[15]	陈文欣, 李强, 薛赢俊, 邵华卿, 李贞, 陆文倩, 胡晓波. 恶性肿瘤患者凝血 - 纤溶系统标志物检测及其临床意义[J]. 检验医学, 2018, 33(8): 722-726.

纤溶酶产生菌的鉴定及产酶优化

Identification of fibrinolytic enzyme-producing strain and optimization of producing enzyme conditions

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