引用本文
朱征, 杨敏, 潘虹, 吴启晓, 陆芸芸. CIK细胞免疫治疗对肿瘤患者血清LDH、ADA水平的影响. 检验医学, 2014, 29(8): 860-862[]  
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CIK细胞免疫治疗对肿瘤患者血清LDH、ADA水平的影响
朱征1, 杨敏1, 潘虹2, 吴启晓1, 陆芸芸1
1. 成都市第七人民医院检验科,四川 成都 610041
2. 成都市第六人民医院检验科,四川 成都 610051
通讯作者:杨敏,联系电话:028-85044681。

作者简介:朱征,男,1983年生,学士,技师,主要从事临床生化检验工作。

摘要
目的

观察细胞因子诱导的杀伤细胞 (CIK)细胞免疫治疗对肿瘤患者血清乳酸脱氢酶(LDH)、腺苷脱氨酶(ADA)水平的影响。

方法

选取40例已完成肿瘤相关治疗1周后病情稳定的肿瘤患者作为疾病对照组、42例进行CIK细胞免疫治疗的肿瘤患者作为CIK治疗组、40名健康体检者作为正常对照组。疾病对照组测定2次血清LDH、ADA水平,2次测定时间间隔2周; CIK治疗组在进行CIK细胞免疫治疗前采集外周血3 mL用于血清LDH、ADA的测定,50 mL用于分离单个核细胞进行CIK细胞培养,于CIK细胞免疫治疗结束1 d内再次测定LDH、ADA水平。

结果

疾病对照组2周内血清LDH、ADA水平无明显改变。CIK治疗组治疗前、后血清LDH、ADA水平均明显高于正常对照组(P<0.01);且CIK细胞免疫治疗后血清LDH、ADA水平明显高于治疗前(P<0.01)。

结论

肿瘤患者CIK细胞免疫治疗后血清LDH、ADA水平较治疗前明显升高。

关键词: ; 乳酸脱氢酶; 腺苷脱氨酶; 细胞因子诱导的杀伤细胞; 细胞免疫治疗; 肿瘤
中图分类号:Q554 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2014)08-0860-03
引言

细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer,CIK)是由人淋巴细胞在体外经过多种细胞因子[白细胞介素1(interleukin 1,IL-1)、白细胞介素2(interleukin 2,IL-2)、干扰素-γ(interferon-gamma,IFN-γ) 、CD3单抗等]诱导产生的肿瘤杀伤细胞,具有较强增殖能力和杀瘤活性,且毒副作用较小,对正常骨髓造血功能影响轻微,已成为新一代肿瘤过继免疫治疗的首选方法[ 1]。CIK细胞免疫治疗已成为继手术治疗、放射治疗、化学治疗后的第4种肿瘤治疗模式[ 2]。我们通过测定CIK细胞免疫治疗前、后肿瘤患者血清乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、腺苷脱氨酶(adenosine deaminase,ADA)水平,探讨CIK细胞免疫治疗对肿瘤患者血清LDH、ADA水平的影响。

材料和方法
一、对象

选取在成都市第七人民医院完成肿瘤相关治疗1周以上且病情稳定的肿瘤患者40例作为疾病对照组,男20例,女20例,年龄35~67岁;均经病理学、细胞学、CT、磁共振成像(MRI)检测确诊。选取成都市第七人民医院刚经病理学、细胞学、CT、MRI检测确诊,还未接受放疗、化疗且病情稳定的肿瘤患者42例作为CIK治疗组,男19例,女23例,年龄32~68岁,其中淋巴瘤4例、肺癌15例、胃癌5例、黑色素瘤3例、食道癌2例、鼻咽癌6例、乳腺癌4例、结肠癌3例,排除患有肝胆系统疾病、结核、心肌梗死的肿瘤患者,在进行CIK细胞免疫治疗期间未接受其他治疗。随机选择成都市第七人民医院健康体检者40名作为正常对照组,男20名,女20名,年龄30~66岁,无既往病史, 各种理化检查指标均正常,排除患有各组织器官疾病。

二、仪器与试剂

OLYMPUS倒置显微镜;力康Heal Force HF160W二氧化碳(CO2)培养箱;OLYMPUS AU-640全自动生化分析仪。采用酶速率法测定LDH、ADA水平,试剂由北京利德曼生化股份有限公司提供(LDH批号:303042A;ADA批号:301212L),质控品和定标液由Beckman-Coulter公司提供(质控品中值批号:0031J;高值批号:0032A;定标液批号:0115)。真空采血管由成都瑞琦实业有限公司提供;人外周血淋巴细胞分离液Ficol1购自天津瑞灏生物制品科技有限责任公司(批号:LTS1077006);RPMI-1640培养基购自美国Gibco公司;重组人IFN-γ购自上海克隆生物高新技术有限公司;IL-1和IL-2均购自RD公司;抗人CD3单克隆抗体购自北京晶美基因谷科技有限公司。

三、方法

1. 标本采集与测定 所有对象均清晨空腹8 h以上,分别使用含促凝剂(红色头)的真空采血管抽取静脉血。疾病对照组在完成肿瘤相关治疗1周后(避免肿瘤相关治疗影响血清LDH、ADA水平)测定2次血清LDH、ADA水平,2次测定时间间隔2周(完成CIK细胞免疫治疗需要2周,便于比较这段时间内未进行任何治疗的肿瘤患者血清LDH、ADA水平的变化),分别记为疾病对照组1和疾病对照组2;CIK治疗组分别在进行CIK细胞培养时及进行CIK细胞免疫治疗后24 h采集静脉血。所有标本无溶血,分别进行LDH、ADA检测。参考区间:LDH为114~240 U/L、ADA为4~18 U/L 。

2. 外周血单个核细胞(PBMC)的分离 肝素抗凝全血50 mL分离血浆,收集上层血浆约25 mL加入 RPMI-1640培养基中备用。血细胞沉淀物加生理盐水混悬至50 mL。取2支50 mL无菌离心管分别加入Ficoll分离液15 mL,将血细胞悬液加到Ficoll分离液上,每管25 mL血细胞悬液,置水平离心机600× g离心20 min。吸出白色云雾状的单个核细胞层,用生理盐水充分混匀细胞,750× g离心5 min,反复洗涤3次备用。

3. CIK细胞培养 置含IFN-γ、IL-1、IL-2、抗CD3单抗的RPMI-1640培养液中,调整单个核细胞浓度为1×107/mL培养。48 h后去上清,用含IL-2和抗CD3单抗的RPMI-1640培养基继续培养。每2 d观察并换液。第10~14天细菌培养、内毒素检测阴性时收获细胞,洗涤后计数,制备成细胞悬液备用。

四、统计学方法

采用SPSS 10.0软件进行统计分析。计量资料呈正态分析,采用 ±s表示。组间比较采用两个独立样本 t检验,肿瘤CIK治疗前、后组间比较采用配对样本差值均数 t检验。 P<0.05为差异有统计学意义。

结果

疾病对照组在2周内血清LDH、ADA水平无明显改变。CIK治疗组治疗前、后血清LDH、ADA水平均明显高于正常对照组( P<0.01);且CIK治疗后血清LDH、ADA水平明显高于治疗前( P<0.01)。见表1。

表1 各组间LDH、ADA测定结果比较 ( ±s,U/L)
讨论

LDH 是存在于活细胞质内的一种胞浆酶,在正常情况下不会透过细胞膜。当细胞受到攻击而损伤,细胞膜的通透性改变,LDH才会释放到介质中去[ 3]。LDH是人体糖酵解途径中一种重要代谢酶,主要分布于肾脏、心肌、肝脏、红细胞和白细胞等组织器官中,血清LDH升高可见于心、肾、肝脏疾病及恶性肿瘤、血液病等许多疾病,还可以作为鉴别良恶性疾病的指标[ 4]。ADA是核酸代谢的重要酶类,广泛分布于人体各种组织和细胞中,以红细胞和淋巴细胞ADA含量最高,其含量与T淋巴细胞数量有关,更与T淋巴细胞的增殖、分化密切相关[ 5]。ADA的主要作用是促进淋巴细胞尤其是T淋巴细胞的增殖和分化。因此ADA可作为细胞介导免疫反应(包括迟发型变态反应)的标志物[ 6]。

本研究发现已完成肿瘤相关治疗1周后病情稳定的肿瘤患者在2周内血清LDH、ADA水平无明显改变,说明肿瘤本身在这两周内对血清LDH、ADA水平无影响。CIK治疗组治疗前、后血清LDH、ADA水平均明显高于正常对照组,且治疗后血清LDH、ADA水平明显高于治疗前。LDH增高的可能原因是:(1)LDH是糖酵解过程中相当重要的酶,而肿瘤组织中糖酵解速度明显高于正常组织[ 7];(2)肿瘤生长破坏了周围正常组织,使之释出LDH,或与机体患肿瘤时致某些组织中LDH 活力增加有关[ 7];(3)肿瘤负荷愈大,细胞坏死愈多,释放的LDH 也越多[ 8]。当肿瘤患者进行CIK细胞免疫治疗后,大量的肿瘤细胞被CIK细胞杀伤,细胞膜的通透性改变,大量LDH被释放进入血清,导致肿瘤患者在CIK细胞免疫治疗后血清LDH升高。ADA增高的可能原因是:(1)ADA升高是T淋巴细胞对某些特殊病变局部刺激产生的一种反应[ 9];(2)肿瘤生长破坏了周围正常组织,使之释出ADA。肿瘤患者在进行CIK细胞免疫治疗时,输入体内的CIK细胞是由细胞因子诱导增殖的T细胞,CIK细胞本身含有大量的ADA。在杀伤肿瘤细胞的过程中,CIK细胞和肿瘤细胞都会大量破坏,细胞膜的通透性改变,大量ADA被释放进入血清,导致肿瘤患者在CIK细胞免疫治疗后血清ADA升高。

CIK细胞是PBMC在体外经多种细胞因子共同诱导后获得的一群异质细胞。其主要特征是同时表达T细胞表面抗原(CD3)以及NK细胞表面标志(CD56)。因此,CIK细胞兼有T淋巴细胞的抗肿瘤活性和NK细胞非组织相容性复合体(MHC)限制性杀肿瘤的特点[ 10],具有增殖速度快、杀瘤活性高、杀瘤谱广等优点,其应用范围越来越广。当患者患有肝胆系统疾病、结核性积液或心肌疾病时血清LDH、ADA水平会升高。肿瘤患者进行CIK细胞免疫治疗后血清LDH、ADA水平的升高可能与CIK细胞在肿瘤患者体内杀伤肿瘤细胞的作用有关,而不是提示肿瘤患者此时正患有肝胆系统疾病、结核性积液或心肌疾病等。CIK细胞的杀瘤作用致使肿瘤细胞及CIK细胞破碎,释放LDH、ADA进入血液,导致肿瘤患者在进行CIK细胞免疫治疗后血清LDH、ADA水平升高。因此,在解释肿瘤患者血清LDH、ADA水平升高时,除了考虑患者的病情,还要考虑CIK细胞免疫治疗对肿瘤患者血清LDH、ADA水平的影响。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
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