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肖敏敏, 王毅, 邵慧, 张艳, 李萍. 皖南地区HIV感染者中HCV感染状况的调查. 检验医学,2014, 29(7): 705-707[XIAO Minmin, WANG Yi, SHAO Hui, ZHANG Yan, LI Ping. Investigation of HCV co-infection among HIV-1 infected patients in the South of Anhui. Labratory Medicine, 2014, 29(7): 705-707]  
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皖南地区HIV感染者中HCV感染状况的调查
肖敏敏1, 王毅2, 邵慧1, 张艳2, 李萍2
1.芜湖市第二人民医院检验科,安徽 芜湖 241000
2.芜湖市疾病预防控制中心,安徽 芜湖 241000
摘要
目的

调查皖南地区人类免疫缺陷病毒(HIV)-1感染者中丙型肝炎病毒(HCV)的混合感染率,探讨HCV对HIV-1感染者CD4+T细胞计数的影响。

方法

对皖南地区234例HIV-1感染者,分别采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中HCV-Ab、聚合酶链反应(PCR)检测血清和外周血单个核细胞(PBMC)中的HCV-RNA含量;同时采用流式细胞技术检测外周血CD4+T细胞亚群数量。

结果

234例HIV-1感染者中,性途径感染占83.7%(男男途径占48.7%;异性途径占35.0%);吸毒者占4.2%;住院患者占2.6%;母婴传播占2.1%。HCV-Ab阳性30例,占12.8%;血清HCV-RNA阳性27例,占11.5%,其中26例均为血清HCV-Ab阳性,1例为HCV-Ab阴性,其血清HCV-RNA为3.60×103拷贝/mL;PBMC中HCV-RNA阳性14例,占6.0%;以3种指标任一阳性计算HCV感染率,则HIV-1 HCV合并感染率为13.2%。CD4+T细胞计数在HIV HCV合并感染者平均为322个/mL,HIV单纯感染者为477个/mL。

结论

皖南地区HIV-1 HCV混合感染率为13.2%,筛查HIV感染时应加强对HCV的检测,有助于HCV感染的早期诊断和治疗; HIV感染者中HCV的监测,须考虑血清和PBMC中HCV-RNA情况。

关键词: 人类免疫缺陷病毒; 丙型肝炎病毒; 核酸检测; 外周血单个核细胞; CD4+T细胞计数
中图分类号:R446.62 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2014)07-0705-03
Investigation of HCV co-infection among HIV-1 infected patients in the South of Anhui
XIAO Minmin1, WANG Yi2, SHAO Hui1, ZHANG Yan2, LI Ping2
1. The Second People' s Hospital of Wuhu, Anhui Wuhu 241000, China
2. Wuhu Center for Disease Control and Prevention, Anhui Wuhu 241000, China
Abstract
Objective

To investigate the ratio of hepatitis C virus(HCV) co-infected with human immunodeficiency virus (HIV)-1 and the impact of HCV co-infection on CD4+ T cell counts in HIV-1 infected patients.

Methods

HCV-Ab was detected by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and HCV-RNA was determined by polymerase chain reaction (PCR) with serum and peripheral blood mononuclear cell (PBMC).

Results

Among 234 HIV-1 infected patients, the infection through sex accounted for 83.7% (male gay sex for 48.7% and heterosexual contact for 35.0%), drug addiction for 4.2%, inpatient for 2.6% and maternal-neonatal transmission for 2.1%. The percentage of HCV-Ab positive was 12.8% (30/234), that of serum HCV-RNA was 11.5% (27/234), which 26 cases were HCV-Ab positive and 1 case was HCV-Ab negative, while the serum HCV-RNA content was 3.60×103copies/mL, and 14 cases were HCV-RNA positive in PBMC accounting for 6.0%, thus the ratio of HCV co-infection was 13.2% as a total. The average counts of CD4+ T cell among HIV-1 HCV infection and single HIV-1 infection were 322 cells/mL and 477 cells/mL.

Conclusions

The ratio of HIV-1 HCV co-infection was 13.2% in the South of Anhui, and the determination of HCV during screening HIV-1 infection may help with the early diagnosis and treatment of HCV, and the detection of HCV-RNA with PBMC should be taken attention.

Keyword: Human immunodeficiency virus 1; Hepatitis C virus; RNA determination; Peripheral blood mononuclear cell; CD4+ T cell count
引言

人数免疫缺陷病毒(HIV)-1感染者中丙型肝炎病毒(HCV)的全球感染率为15%30%,美国和西班牙HIV感染者中分别有30%和50%合并感染HCV[ 1],我国HIV高发地区云南省曾有90%以上的HIV-1 HCV混合感染[ 2]。长期以来,HCV感染的诊断主要是根据血清中HCV-Ab和∕或HCV-RNA,但亦有部分隐匿性HCV感染者血清HCV-Ab和HCV-RNA均阴性,但肝细胞或外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)中可检测到HCV-RNA,且干扰素治疗有效。Angela等[ 3]研究发现HIV HCV混合感染者与单纯HCV感染者相比,前者PBMC和肝细胞中存在加剧炎症、促进肝纤维化、加速肝病恶化的独特基因表达,因而了解HIV HCV合并感染者PBMC中病毒水平有助于临床判断和早期治疗。

为准确了解皖南地区HIV感染者的HCV感染情况,我们采用3种检测方法,对234例HIV-1感染者的血清HCV-Ab、 HCV-RNA和PBMC中HCV-RNA进行检测,且统计HCV感染率。

材料和方法
一、对象

2011年1月至2013年8 月在安徽省芜湖市疾病预防控制中心确诊为HIV-1的感染者234例,诊断符合2006年制订的《艾滋病诊疗指南》。所有研究对象均未接受过抗病毒及免疫调节剂治疗,采血前、后1周无其它急性感染性疾病。

二、方法

采集每位受试者的外周血8 mL,样本采集后在4 h内运送至实验室,其中4 mL 2%乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝血用于CD4+T细胞计数检测和PBMC提取;另4 mL外周血分离血清。血清和PBMC均储存于-80 ℃冰箱内,用于HCV核酸检测。

1、CD4+T细胞计数检测

所有试剂及器材均来自Becton Dicknson公司。操作按照使用说明书进行。采用流式细胞仪,分析检测CD4+T淋巴细胞亚群数量。

2、血清HCV-Ab检测

采用珠海丽珠公司生产的酶联免疫吸附试验(ELISA)检测试剂盒,操作按照使用说明书进行。

3、PBMC的分离

新鲜抗凝血采集后立即于自动血液分析仪上检测出每毫升血液中淋巴细胞和单核细胞的数量(第一次)后,与无菌生理盐水1∶1混匀,将混合液小心叠加于细胞分离液之液面上(混合液:分离液=2∶1),以500× g离心15 min,收集环状乳白色淋巴细胞层(PBMC),加入无菌生理盐水洗涤5次,向沉淀物PBMC中加入0.2 mL无菌生理盐水充分混匀,于全自动血液计数仪上进行淋巴细胞核单核细胞的数量(第2次)检测;根据2次的细胞数量换算出每毫升待检PBMC混合液所对应血液量以统一血清和PBMC内HCV-RNA量单位(IU/mL)。分离制备好的PBMC混合液立即至-80 ℃保存备检。

4、血清和PBMC中HCV核酸定量检测

采用上海科华生物工程股份有限公司的聚合酶链反应(PCR)-荧光探针法试剂盒检测,按说明书进行。仪器为Roche LightCycler480荧光定量PCR仪。

三、 统计学方法

采用SPSS 10.0统计软件进行数据分析,计量资料采用方差分析, P<0.05表示差异有统计学意义。

结果
一、 人口学特征

234例HIV-1感染者中,男性153例(65.4%),女性81例(34.6%),年龄460岁。其中性途径感染占83.7%(男男途径占48.7%,异性途径占35.0%);吸毒者占4.2%,住院患者占2.6%,母婴传播占2.1% 。

二、血清HCV-Ab、血清HCV-RNA与PBMC中HCV-RNA检测

结果见表1:

表1 血清HCV-Ab、血清HCV-RNA与PBMC中HCV-RNA检测结果比较
三、血清HCV-RNA与PBMC中HCV-RNA含量比较

2组结果差异有统计学意义( t=3.166, P=0.006),结果见表2:

表2 血清HCV-RNA与PBMC中HCV-RNA含量比较
四、HCV合并感染对HIV-1感染者CD4+T细胞计数的影响

t值1.497, P值0.137,两者差异无统计学意义,基本排除了HCV感染对HIV-1感染者CD4+T细胞数量的影响,结果见表3:

表3 HIV HCV合并感染和HIV-1单纯感染者CD4+T细胞计数的比较
讨论

死于肝脏疾病的HIV感染者主要死因是感染了HCV。HIV HCV合并感染较单纯HIV感染更易发展为肝坏死,且进一步加速了获得性免疫缺乏综合征(AIDS)的进展[ 4],调查皖南地区HIV HCV 合并感染情况有助于临床对HIV感染者的治疗。

本研究结果显示,皖南地区HIV感染者中HCV感染率为13.2%,低于全球15%30%的感染率,也低于欧洲25%的感染率,可能是由于本地区的HIV感染途径主要来源于性途径(83.7%)。

长期以来,HCV感染的诊断主要是根据血清中检出HCV-Ab。值得关注的是,单一的HCV-Ab阴性指标不能排除HCV感染,原因在于HCV从感染到血清出现抗体有一段时间、感染者免疫功能低下时血清难以出现抗体,以及ELISA检测法敏感性较低等。本研究结果显示,1例患者血清HCV-Ab阴性,血清HCV-RNA为3.60×103拷贝/mL,表明对HIV感染者,HCV-RNA是极其重要的检测指标。

本研究结果显示,234例HIV-1感染者中血清HCV-RNA阳性27例,占11.5%,含量为3.60×1039.06×106拷贝/mL;其中PBMC中HCV-RNA阳性14例,占6.0%,含量为2.33×1027.16×105拷贝/mL,两者HCV-RNA水平差异有统计学意义,这与Gupta等[ 5]的研究结果相一致。其研究表明HIV HCV合并感染者PBMC中存在可复制的HCV-RNA,且与血清HCV-RNA含量不具有相关性。HIV感染者免疫功能低下,且这部分人群有偿供血及静脉吸毒比率较高,故其HCV重复感染、多种基因型共感染率也较高[ 6]。我们会跟踪随访HIV HCV感染者,进一步深入探讨血清和PBMC中HCV 感染基因型情况。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] Hoffmann H, Rockstroh JK, Kamps BS. HIV medicine 2006[M]. Pairs: Flying Publisher, 2006: 541-564. [本文引用:1]
[2] 张海燕, 王万海, 夏雪山, 等. 大理市HIV感染者中HCV感染状况的研究[J]. 检验医学, 2012, 27(2): 141-144. [本文引用:1]
[3] Rasmussen AL, Wang IM, Shubart MC, et al. Chronic immune activation is a distinguishing feature of liver and PBMC gene signatures from HCV/HIV coinfected patients and may contribute to hepatic fibrogenesis[J]. Virology, 2012, 430(1): 43-52. [本文引用:1] [JCR: 3.367]
[4] Vallet-Pichard A, Pol-S. Natural history and predictors of severity of chronic hepatitis C virus (HCV) and human immunodeficiency virus (HIV) co-infection[J]. J Hepatol, 2006, 44(1 Suppl): S28-S34. [本文引用:1] [JCR: 9.858]
[5] Gupta P, Liu B, Wu JQ, et al. Genome-wide mRNA and miRNA analysis of peripheral blood mononuclear cells (PBMC) reveals different miRNAs regulating HIV/HCV co-infection[J]. Virology, 2014, 450-451: 336-349. [本文引用:1]
[6] Feng Y, Liu L, Feng YM, et al. GB virus C infection in patients with HIV/hepatitis C virus coinfection: improvement of the liver function in chronic hepatitis C[J]. Hepat Mon, 2014, 14(3): e14169. [本文引用:1] [JCR: 1.245]