引用本文
张景全, 陈骊婷, 石厚荣, 王剑飚. 两例EDTA依赖性假性血小板减少应用阿米卡星无效探讨. 检验医学2014, 29(6):676-678
ZHANG Jingquan, CHEN Liting, SHI Hourong, WANG Jianbiao. Investigation on two cases of amikacin application in validation for EDTA-dependent pseudo thrombocytopenia . Labratory Medicine, 2014, 29(6):676-678  
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两例EDTA依赖性假性血小板减少应用阿米卡星无效探讨
张景全, 陈骊婷, 石厚荣, 王剑飚
上海交通大学医学院附属瑞金医院检验科,上海 200025

通讯作者:王剑飚,联系电话:021-64370045

作者简介:张景全, 1975年生,学士,主管技师,主要从事急诊检验及细胞形态学检验工作。

摘要
目的

探讨2例乙二胺四乙酸(EDTA)依赖性假性血小板减少应用阿米卡星无效的机制。

方法

对2例EDTA依赖性假性血小板减少症患者的EDTA-K2抗凝血,在不同时间段分别加入阿米卡星,在血液分析仪检测,血涂片检查。

结果

该2名患者,加或不加阿米卡星,其血小板数均会随着时间的延长逐渐增加,其特征性的直方图也会随着时间的延长而消失,加入阿米卡星会获得更可靠的结果。

结论

阿米卡星并不能立即解离2例患者聚集的血小板,但随着时间延长,血小板缓慢解离,至4h达到相对稳定。1h内加入阿米卡星较为理想,相对普通EDTA抗凝可有效加速其解离过程,获得理想结果。

关键词: 假性血小板减少; 阿米卡星
中图分类号:R446.11 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2014)06-0676-03
Investigation on two cases of amikacin application in validation for EDTA-dependent pseudo thrombocytopenia
ZHANG Jingquan, CHEN Liting, SHI Hourong, WANG Jianbiao
Department of Clinical Laboratory, Ruijin Hospital, Shanghai Jiaotong University School of Medicine, Shanghai 200025,China
Abstract
Objective

To investigate 2 cases of amikacin application in validation for ethylene diamine tetracetic acid (EDTA)-dependent pseudo thrombocytopenia.

Methods

Two cases of EDTA-dependent pseudo thrombocytopenia were collected, and their EDTA-K2 anticoagulant blood were collected and added amikacin at different time periods. The blood samples were determined for hematology analysis and blood smears.

Results

For the 2 patients with or without amikacin, the platelet count increased gradually with time, and the histogram disappeared with time. Adding amikacin would obtain more reliable results.

Conclusions

Amikacin can not immediately dissociate the platelet aggregation in the 2 cases, however, with time, the slow dissociation of platelet achieves a relatively stable state for 4 h. Amikacin is added within 1 h is preferable. The relatively common EDTA anticoagulation can effectively accelerate the dissociation process, in order to obtain the desired results.

Keyword: Pseudo thrombocytopenia; Amikacin

近年来,乙二胺四乙酸(EDTA)依赖性假性血小板减少症(ethylenediamine tetra-acetic acid-dependent pseudothrombocytopenia,EDTA-PTCP)受到临床的关注,因其发生率低(0.07%~2.0%)[ 1],容易造成误诊,增加不必要的检查。国内、外众多学者也在多方面对其进行了研究,1997年,Sakurai等[ 1]报道氨基糖甙类的抗菌药物能作用于EDTA-PTCP阻止和解离患者聚集的血小板。之后不断有文献报道氨基糖甙类抗菌药物阿米卡星,确实能作用于EDTA-PTCP,并对其最佳作用浓度、最佳作用时间、作用机制等做了相应的研究报道。本研究收集了2例EDTA-PTCP患者的EDTA-K2抗凝血,加入阿米卡星后在不同时间段进行分析。

材料和方法
一、临床病例

在上海交通大学医学院附属瑞金医院就诊并被确诊为EDTA-PTCP的患者2例。均为女性患者,患者1年龄32岁,孕妇;患者2年龄46岁,乙型肝炎患者。2位患者均无鼻出血、皮肤瘀斑、黑便、口黏膜出血等临床症状,因外院检测血小板低至本院血液科就诊。

二、仪器与材料

希森美康 XS-800i血液分析仪,使用原厂配套试剂和质控品;奥林巴斯CX21显微镜;贝克曼库尔特LH755自动染片机;EDTA-K2、枸橼酸盐抗凝真空采血管,由碧迪(BD)医疗器械(上海)有限公司提供;阿米卡星,由上海信谊金朱药业有限公司提供。

三、方法

1. 血液分析仪血小板数检测 未加入阿米卡星的EDTA-K2抗凝血不同时间段血小板数检测:每位患者分别用 EDTA-K2抗凝管抽取静脉血2 mL,在不同时间段(即时、0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5 h)用希森美康 XS-800i血液分析仪检测各管血小板数, 同时进行各时间段样本血涂片检查,做好相应血涂片标记。加入阿米卡星的EDTA-K2抗凝血不同时间段血小板数检测:EDTA-K2抗凝管分别在放置不同时间段后(即时、0.5、1、1.5、2、2.5 h)分别加入6.5 mg/mL阿米卡星,放置各解离时间(0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5 h)测定各管血小板数,同时进行各时间段样本的血涂片检查,做好相应血涂片标记。枸橼酸盐抗凝血不同时间段血小板数检测:每位患者分别用枸橼酸盐抗凝管抽取静脉血3 mL,在不同时间段(即刻、0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5 h)用希森美康 XS-800i血液分析仪检测各管血小板数,同时进行各时间段样本血涂片检查,做好相应血涂片标记。

2. 血涂片瑞特-吉姆萨染色镜检 贝克曼库尔特LH755自动染片机将上述已标记的血涂片进行瑞氏-吉姆萨染色,并在奥林巴斯CX21显微镜下进行观察。若见血小板成聚集状伴(或不伴)中性粒细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞周围成卫星现象,则为镜下观察到血小板聚集。

结果
一、血小板计数

2位患者未加入阿米卡星的EDTA-K2抗凝血,血小板在即刻检测时期数量几乎为0,但随着时间的延长,其数量会逐渐增加,结果见表1 。加入阿米卡星后,其血小板水平也是逐渐增加至正常水平,患者1在4 h时血小板数才成稳定状态,患者2在1 h后,血小板数趋于稳定。患者1各时间段血小板计数值见图1。

表1 EDTA抗凝剂放置时间对2例患者血小板计数的影响(×109/ L)

图1 患者1各时间段血小板计数值

二、白细胞直方图、血小板直方图

血液分析仪检测后,分别观察2位患者直方图,在加入或未加入阿米卡星的EDTA-K2抗凝血中均出现了特征性的白细胞和血小板直方图,但随时间延长,其特征性直方图均消失如图2所示。

图2 患者2白细胞和血小板直方图注:(a)、(b)为抽血后即刻检测,WBC箭头所指为大量凝集的血小板被系统误认为白细胞,此时直方图示PLT计数低下;(c)、(d)为抽血后4 h检测

三、枸橼酸盐抗凝血

2位患者抽血后检测的血小板数均低于同时检测的EDTA抗凝结果。

四、瑞特-吉姆萨染色镜检

EDTA-K2抗凝血中加或不加阿米卡星,血涂片即刻检测发现大量血小板聚集。随着时间延长血小板聚集均逐渐减少,成散在分布,结果见图3。

图3 瑞特-吉姆萨染色镜检血小板

讨论

EDTA-PTCP是由于抗凝剂EDTA诱导血小板中的特殊蛋白使血小板发生凝集,且在血细胞计数仪上检测时,其血小板发生假性减少的现象[ 2]。EDTA-PTCP导致血液分析仪血小板计数假性减少的机制一直在研究,至今尚不清晰。其可能的原因有:EDTA导致患者抗凝血中针对血小板膜表面抗原的抗体增多,发生抗原抗体反应[ 3];GPⅡb与GPⅢa间之间存在一种单克隆抗体,当此抗体遇到EDTA抗凝剂时会引起血小板凝集[ 4];血小板表面带负电荷的磷脂抗体与由EDTA修饰的血小板膜表面抗原结合从而发生血小板凝集;温度依赖性等。2008年,周小棉等[ 5]用氨基糖甙类抗菌药物阿米卡星对EDTA-PTCP患者的EDTA抗凝血进行了研究,发现阿米卡星能有效抑制血小板的集聚。2011年Zhou[ 6]报道了阿米卡星不仅能作用于EDTA-PTCP,也能作用于多抗凝剂依赖的假性血小板减少。

本研究发现,阿米卡星并不能立即解离2位患者聚集的血小板,但随着时间延长,血小板缓慢解离,至4h达到相对稳定。1h内加入阿米卡星较为理想,相对普通EDTA抗凝可有效加速其解离过程,获得理想结果。在放置时间很短的情况下,EDTA使血小板形态发生改变,外膜形成微小管,其游离端向外伸展,从而形成丝状伪足相互缠绕,形成可逆性凝集体,全血细胞血小板检测时血小板数下降。随着放置时间延长,EDTA使缠绕的血小板解散,全血细胞分析仪检测时,血小板数增加。患者2抗凝血在4 h显微镜检测仍然能观察到部分血小板聚集,考虑为放置时间依赖合并温度依赖的假性血小板减少。其发生机制,尚需通过进一步免疫分析来查找EDTA-PTCP的根本原因。由于阿米卡星对2例患者的作用效果并不明显,我们认为,阿米卡星不是针对所有EDTA-PTCP患者都立即有效的,需区别对待,当发生这样的情况,我们考虑以下3种解决方法:(1)将抗凝血放置一段时间以后(约2 h后)再检测血小板数;(2)在37 ℃水浴后进行样本血小板计数;(3)考虑通过检测血涂片中血小板与红细胞的比例估算出血小板数。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] Sakurai S, Shiojima I, Taniqawa T, et al. Aminoglycosides prevent and dissociate the aggregation of platelets in patients with EDTA-dependent pseudothrombocytopenia[J]. Br J Haematol, 1997, 99(4): 817-823. [本文引用:2] [JCR: 4.942]
[2] Berkman N, Michaeli Y, Or R, et al. EDTA-dependent pseudothrombocytopenia: a clinical study of 18 patients and a review of the literature[J]. Am J Hematol, 1991, 36(3): 195-201. [本文引用:1] [JCR: 4.003]
[3] Yamaquchi M, Mayumi M, Kasuya T. A patient with EDTA-dependent pseudothrombocytopenia who underwent emergent clipping surgery for a ruptured aneurysm[J]. Masui, 1998, 47(1): 57-59. [本文引用:1]
[4] Lippi U, Schinella M, Nicoli M, et al. EDTA-induced platelet aggregation can be avoided by a new anticoagulant also suitable for automated complete blood count[J]. Haematologica, 1990, 75(1): 38-41. [本文引用:1] [JCR: 5.935]
[5] 周小棉, 赖金甜, 张伟红, 等. 丁胺卡那霉素对EDTA依赖性凝集血小板的解离及其机制[J]. 临床检验杂志, 2008, 26(6): 429-431. [本文引用:1]
[6] Zhou X, Wu X, Deng W, et al. Amikacin can be added to blood to reduce the fall in platelet count[J]. Am J Clin Pathol, 2011, 136(4): 646-652. [本文引用:1] [JCR: 2.881]