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李洪春, 赵冠琳, 李海宁, 孙宁娜, 孙鹏. 尿酸对过氧化物酶指示系统的干扰评价. 检验医学2014, 29(4): 400-401[]  
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尿酸对过氧化物酶指示系统的干扰评价
李洪春, 赵冠琳, 李海宁, 孙宁娜, 孙鹏
徐州医学院,江苏 徐州 221006

作者简介:李洪春,女,1967年生,硕士,主任技师,主要从事临床生物化学与分子生物学研究及教学工作。

基金:2012年江苏省大学生创新计划(2012JSSPITP1854);
摘要

有关还原性物质对过氧化物酶(peroxidase,POD)指示系统的干扰在教科书中安排了诸多实验,选用的还原性物质也有所不同。《临床生物化学检验实验指导》选择尿酸作为干扰物,其干扰浓度分别为450和900 μmol/L[1]。《全国临床检验操作规程》(第3版)中提到尿酸浓度低于2.97 mmol/L不会对POD指示系统产生显著干扰[2]。可见尿酸对POD指示系统的干扰浓度相差之大。为此,我们采用美国临床实验室标准化协会(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)EP7-A2文件来评价尿酸对POD指示系统的确切干扰浓度。

关键词: 尿酸; 过氧化物酶; Trinder反应; 干扰; 评价
中图分类号:R446.1 文献标志码:B 文章编号:1673-8640(2014)04-0400-02
Fund:
Abstract
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一、材料和方法
1.仪器与试剂

己糖激酶法(hexokinase,HK)血糖测定试剂盒购自潍坊三维生物工程集团有限公司,葡萄糖氧化酶法(glucose oxidase-peroxidase,GOD-POD)血糖测定试剂盒购自上海科华生物工程股份有限公司,尿酸标准品和碳酸锂购自阿拉丁试剂公司;ROCHE DPP全自动生化工作站购自德国罗氏公司。

2.配对差异实验

根据CLSI EP7-A2文件的实施方案要求,收集或用去离子水及纯葡萄糖粉调整血糖浓度分别为2.8、6.7、11.1 mmol/L的临床患者混合血清标本各20 mL。每组各分为10份,加尿酸(加入浓度为1 400 μmol/L)与未加尿酸各5份作为测试标本。GOD-POD测定血糖按照试剂说明书操作,实验时仪器状态良好,室内质量控制在控。为平衡系统漂移,按交互顺序测定3次。

3.剂量效应实验

CLSI EP7-A2文件推荐的尿酸作干扰物的测试浓度为1 400 μmol/L,结合不同版本参考书尿酸的干扰浓度,确定加入尿酸的最高测试浓度为5 600 μmol/L。基础标本收集同配对差异实验。测试标本加入的尿酸浓度分别为0、1 400、2 800、4 200、5 600 μmol/L,测定方法同配对差异实验。

4.患者标本分析

选择性收集40例临床高尿酸浓度(≥500 μmol/L)患者的血清标本,患者未经维生素C、谷胱甘肽等药物治疗,分别用GOD-POD、HK(血糖测定的参考方法)测定每份标本,测定2次,取均值。

5.统计学方法

采用 SPSS 11.0 软件进行统计分析,数据以 ±s表示,采用配对 t检验,以 P<0.05为差异有统计学意义。

二、结果
1.配对差异实验

加入1 400 μmol/L尿酸后对GOD-POD测定血糖不产生明显干扰,与未加尿酸的血糖结果比较差异无统计学意义( P>0.05)。见表1:

表1 加与未加尿酸对GOD-POD测定不同血糖浓度的影响比较
2.剂量效应实验

当加入5 600 μmol/L尿酸时对GOD-POD测定血糖不产生明显干扰( P>0.05)。见表2:

表2 GOD-POD测定加入不同浓度尿酸干扰后的血糖浓度
3.患者标本分析

以患者血清尿酸浓度作为横坐标,GOD-POD测得的血糖浓度均值减去HK均值差值(偏倚)为纵坐标作图。不同尿酸浓度的患者标本2种方法所测结果的差值均匀分布在横坐标两侧。见图1:

图1 不同尿酸浓度患者血清标本GOD-POD和HK测定的散点图

三、讨论

在临床生物化学检测中,以H2O2为底物的POD指示系统应用颇为广泛。由于催化Trinder反应的POD对底物专一性较差,中间产物H2O2的多少与稳定是本类方法测定的关键所在。假如反应体系中存在一些还原性物质,能消耗H2O2,或与色原性物质竞争H2O2,就必将影响呈色反应强度,导致被测物的测定值偏低。

关于维生素C[ 3]、谷胱甘肽[ 4]的干扰评价已有诸多研究,也已达成了共识。在临床实践中,针对抗坏血酸的干扰,一些商品试剂中相应地加入了维生素C氧化酶(如双试剂测定尿酸),旨在能消除待测标本中维生素C的干扰。目前商品试剂中还没有加入抗尿酸氧化酶来消除尿酸的干扰。《临床生物化学检验实验指导》上写明尿酸的干扰物浓度为450和900 μmol/L[ 1]。如这个尿酸浓度能干扰POD指示系统检测结果准确性的话,那么临床上许多高尿酸血症的患者,利用Trinder反应的血糖、 尿酸、 胆固醇等生化指标的检测结果均受到影响。本研究配对差异实验结果显示加入1 400 μmol/L尿酸浓度对GOD-POD测定血糖浓度无明显影响。《全国临床检验操作规程》(第3版)有关GOD-POD测定血糖的注意事项中写明,尿酸浓度低于2.97 mmol/L对测定结果无影响。本研究剂量效应实验结果显示加入的尿酸浓度达5 600 μmol/L时对GOD-POD测定血糖同样不产生明显干扰。分析40例临床高尿酸(527~1 333 μmol/L)患者血糖测定结果显示,HK和GOD-POD 2种方法测得的血糖浓度无明显差异。

尿酸是嘌呤的代谢产物,其分子结构中的烯醇基具有弱还原性。从临床高值尿酸标本的分布情况及研究结果来看,临床标本中的高值尿酸不会对以Trinder反应为原理的检测指标产生干扰。如选用尿酸作为干扰物进行干扰试验评价,则应加大尿酸的干扰浓度;针对临床化学中利用POD指示系统的检测指标(如尿酸、血糖、胆固醇、肌酐等),在注意事项中无需将尿酸作为潜在的干扰物列出来。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] 郑铁生. 临床生物化学检验实验指导[M]. 第2版. 北京: 中国医药科技出版社, 2004: 121-122. [本文引用:1]
[2] 叶应妩, 王毓三, 申子瑜. 全国临床检验操作规程[M]. 第3版. 南京: 东南大学出版社, 2006: 361. [本文引用:1]
[3] 黎明新, 张惠敏. 维生素C对TRINDER反应结果的影响评价[J]. 中国冶金工业医学杂志, 2007, 24(5): 616-617. [本文引用:1]
[4] 唐吉斌, 陈继中, 吕明, 等. 还原型谷胱甘肽对氧化酶法检测项目的干扰[J]. 检验医学, 2007, 22(1): 25-27. [本文引用:1]