引用本文
王也飞, 周怡, 丁磊, 夏文权, 胡翊群. SYSMEX XN-1000全自动血液分析仪计数有核红细胞的准确性评价. 29(3): 0262-265[WANG Yefei, ZHOU Yi, DING Lei, XIA Wenquan, HU Yiqun.. The accuracy evaluation of nucleated red blood cell count determined by SYSMEX XN-1000 automatic hematology analyzer.Labratory Medicine, 29(3): 0262-265]  
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SYSMEX XN-1000全自动血液分析仪计数有核红细胞的准确性评价
王也飞, 周怡, 丁磊, 夏文权, 胡翊群
上海交通大学医学院附属瑞金医院检验系,上海 200025

王也飞,女,1974年生,硕士,讲师,主要从事临床血液学检验教学和研究。

摘要
目的

探讨SYSMEX XN-1000全自动血液分析仪(简称XN-1000)计数有核红细胞(NRBC)的准确性。

方法

应用XN-1000对66例外周血标本进行NRBC检测,同时用流式细胞仪(FCM)和显微镜(镜检法)对同一份外周血的NRBC百分率进行计数。以镜检法为金标准,比较不同方法的计数结果。

结果

XN-1000与镜检法检测NRBC有较好的相关性(r=0.927),但低于FCM与镜检法NRBC的相关性(r=0.956),XN-1000与FCM检测NRBC的相关性较高(r=0.994)。XN-1000、FCM计数结果与镜检法的结果间差异均无统计学意义(P>0.05)。XN-1000检测NRBC%较FCM法有更高的诊断特异性(95.7%)。

结论

XN-1000能快速、准确、有效地自动计数外周血NRBC。

关键词: Sysmex XN-1000全自动血液分析仪; 有核红细胞; 准确性
中图分类号:R446.11 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2014)03-0262-04
The accuracy evaluation of nucleated red blood cell count determined by SYSMEX XN-1000 automatic hematology analyzer
WANG Yefei, ZHOU Yi, DING Lei, XIA Wenquan, HU Yiqun.
Faculty of Medical Laboratory Science, Ruijin Hospital, Shanghai Jiaotong University School of Medicine, Shanghai 200025, China
Abstract
Objective

To investigate the accuracy of nucleated red blood cell(NRBC) count determined by SYSMEX XN-1000 automatic hematology analyzer(XN-1000).

Methods

A total of 66 peripheral blood samples were collected and determined for NRBC by XN-1000, and the results of NRBC% were compared with those by flow cytometry (FCM) and manual microscopy for the same sample. The manual microscopy was as golden standard.

Results

There was a good correlation for NRBC between XN-1000 and microscopy(r=0.927), but the correlation was lower than that between FCM and manual microscopy (r=0.956).The correlation between XN-1000 and FCM was the best (r=0.994). The results of XN-1000 and FCM with manual microscopy had no statistical significance(P>0.05). XN-1000 for NRBC% had a better specificity (95.7%) than FCM.

Conclusions

XN-1000 automatic hematology analyzer has good performance for detecting NRBC in peripheral blood rapidly, accurately and effectively.

Keyword: Sysmex XN-1000 automatic hematology analyzer; Nucleated red blood cell; Accuracy
引言

有核红细胞(nucleated red blood cell,NRBC)即幼稚红细胞。健康成年人外周血中无NRBC,但在胎儿外周血、新生儿或幼儿血液中可少量出现。成年人外周血中出现NRBC时,多为病理状态,常见于一些溶血性贫血、急性大量失血、严重的组织缺氧、急慢性白血病、恶性肿瘤、骨髓纤维化症等多种疾病。血液中的NRBC多为晚幼红细胞,也可见中幼红细胞或更幼稚的红细胞(如红血病、红白血病)[1]。目前,多种血液分析仪已能对NRBC出现的阳性标本进行提示和计数。国际实验血液学专家委员会及国内专家提出,对于出现NRBC的血液标本,应进行显微镜镜检,以避免NRBC干扰白细胞计数结果[2,3]。我们采用SYSMEX XN-1000全自动模块式血液体液分析仪(简称XN-1000)对外周血标本进行NRBC的检测,并与传统的显微镜形态学镜检方法(简称镜检法)及流式细胞术(flow cytometry,FCM)进行对比,对XN-1000在NRBC检测方面的性能进行评价。

材料和方法
一、标本来源

选取上海瑞金医院溶血性贫血确诊患者以及瑞金医院门诊检验科Beckamn Coulter LH750全自动血液分析仪提示检测出NRBC患者的血液标本共66例[真空采集乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝静脉血2 mL]。

二、仪器与试剂

XN-1000及其配套试剂由日本Sysmex公司提供;BD FACS CANTO-II流式细胞仪及其配套荧光抗体标记试剂由美国BD公司和Sigma公司提供,;EDTA-K2真空采血管(紫盖);OLYMPUS光学显微镜;瑞氏染液等。

三、NRBC计数方法

1.XN-1000检测NRBC

XN-1000有WNR通道(即WBC/BASO和NRBC通道),针对白细胞数检测增加了NRBC的修正功能。在该通道中进行白细胞计数、白细胞分类、嗜碱性粒细胞计数和NRBC计数。所用试剂之一的Lysercell WNR,其中的表面活性剂使红细胞溶血的同时,透过白细胞的细胞膜。白细胞的外形和内部构造因各自的细胞特性而异。利用散射光(FSC、SSC)可捕捉其形态的差异,凭此将嗜碱性粒细胞和其它的白细胞区别;另一试剂Fluorocell WNR,对白细胞及NRBC的核酸和细胞器进行荧光染色。在Lysercell WNR试剂中白细胞比NRBC的染色部位多,在Fluorocell WNR试剂中其荧光强度也比NRBC强。根据荧光量的差异,将NRBC和其他的白细胞区别和计数(见图1,由Sysmex公司提供),得到NRBC绝对数(×109/L)及NRBC百分率(NRBC%),记录上述数据。

图1 Sysmex XN-1000检测NRBC

注:白色圈内为NRBC散点

2.FCM检测有核红细胞[4,5,6]

对待测抗凝全血标本进行相关处理后予以CD45/PI染色。碘化丙啶(propidium iodide,PI)是一种常用的对DNA染色的细胞核荧光染色剂。PI不能透过完整的细胞膜,但能透过凋亡中晚期的细胞和死细胞的膜而将细胞核染红。PI在540 nm绿色光激发下,在600 nm红色光处发出明亮的荧光;CD45-异硫氰酸荧光素(FITC)抗体设门圈出白细胞,NRBC具有CD45-/PI+

图2 FCM检测NRBC结果分析

注:P1为白细胞;P2为NRBC

3.镜检法

取5 μL外周血,做厚薄均匀的血涂片并进行瑞氏染色,然后在血膜体尾交界细胞分布均匀处用油镜分类400个白细胞,同时计数所见的NRBC数[7]。

四、统计学方法

采用SPSS 13.0和MedCalc统计软件对检测结果进行配对样本 t检验、线性回归分析及受试者工作特征(ROC)曲线分析。按照H26-A2建议,方法比较散点图用Bland-Altman偏移散点图,相关性统计采用Passing-Bablok回归法。 P<0.05为差异有统计学意义。

结果
一、XN-1000与镜检法计数NRBC百分率的相关性

对XN-1000和镜检法每分类100个白细胞所计数的NRBC百分率(NRBC%)结果采用Passing-Bablok回归法进行相关性分析。结果显示二者之间呈良好的线性相关。XN-1000测定值( Y)对镜检法测定值( X)的直线回归方程为 Y=-0.057 95+1.016 6 X, r=0.927, P<0.05,见图3:

图3 XN-1000与镜检法计数NRBC%的相关性

注:XNNRBCPER为XN-1000计数NRBC%

两者的Bland-Altman偏移散点图见图4:

图4 数NRBC%的Bland-Altman偏移散点图

注:XNNRBCPER为XN-1000计数NRBC%;AVERAGE of XNNRBCPER和镜检NRBC为XN-1000与镜检法计数NRBC%的均值

XN-1000与镜检法结果进行配对样本 t检验,差异无统计学意义( P=0.205)。

二、FCM与镜检法计数NRBC%的相关性

对FCM和镜检法所计数的NRBC%采用Passing-Bablok回归法进行相关性分析。FCM测定值( Y)对镜检法测定值( X)的直线回归方程为 Y=0.050 0+1.321 8 X, r=0.956, P<0.05。 FCM与镜检结果进行配对样本 t检验,差异无统计学意义( P=0.563)。

三、XN-1000与FCM计数NRBC%的相关性

对XN-1000与FCM所计数的NRBC%采用Passing-Bablok回归法进行相关性分析。XN-1000测定值( Y)对FCM测定值( X)的直线回归方程为 Y=-0.116 9+0.779 3 X, r=0.994, P<0.05。

2种方法与镜检法结果比较的ROC曲线见图5:

图5 XN-1000、FCM与镜检法结果比较的ROC曲线

XN-1000诊断敏感度为60.0%,诊断特异性为95.7%,曲线下面积(AUC)为0.732,检测的参考值临界点为0.4;FCM诊断敏感度为70.0%,诊断特异性为89.7%,AUC为0.838,检测的参考值临界点为0.8;以镜检法为金标准计数NRBC%,FCM和XN-1000 2种方法检测结果差异无统计学意义( P=0.316)。

讨论

本研究比较了XN-1000、FCM及镜检法NRBC的检测结果。由于大部分标本选择了异常细胞较为单一的溶血性贫血患者的EDTA-K2抗凝静脉血,其中含其他异常细胞较少,因此在形态学方面干扰也较少,所得结果的可靠性应较为理想。少部分标本选自瑞金医院门诊检验科BECKMAN-COULTER LH750全自动血液分析仪初筛为阳性的患者。

对上述标本总结发现,外周血中出现NRBC患者主要来自以下几个典型科室:血液科47.4%,儿科10.3%、感染科6.4%、肾脏科5.1%、皮肤科3.8%。其原因可能是:正常情况下新生儿或幼儿血液中存在NRBC,而成人体内出现NRBC多与溶血性贫血、急慢性白血病、感染等有关[8]。通过进一步研究发现,白血病、贫血者外周血易出现NRBC。当临床疑为血液病或已确诊为血液病患者,复查血细胞计数时应选择NRBC计数,以免漏诊[9]。有些标本外周血中白细胞极度减低,这对血液分析仪、流式细胞仪及手工法的测定产生一定误差。由本研究XN-1000和镜检法的计算方法可知,NRBC%得到需用WBC绝对计数值,上述原因也间接影响了NRBC%结果准确性。

通过对测定结果的统计分析显示,XN-1000在测定NRBC方面与镜检法结果差异无统计学意义( P>0.05),二者线性拟合情况也较好。以镜检法为金标准,XN-1000检测NRBC的诊断敏感度为60.0%,诊断特异性为95.7%,AUC为0.732。从上述情况来看,XN-1000检测NRBC有较高的诊断特异性。然而也有文献对手工操作的“金标准”有质疑。因其检测细胞数量少,人为主观性较大,部分标本客观存在白细胞数目极度减低的客观原因,有时作为对照的镜检法也无法完全得到十分准确的结果 。多数文献中,手工法NRBC%测定通过计数100个白细胞,同时计数所见的NRBC数来计算得到。本研究为了使结果更加准确,基本上每张涂片在尽可能的情况下已计数到400个白细胞,但仍不能排除误差的客观存在。加之在血液分析仪、流式细胞仪操作时,仪器本身对细胞荧光标记、检测方面的精度差异,导致了上述现象存在。

目前,运用流式细胞仪测定NRBC相关数据不作为临床检验的常规方法。本研究引入了FCM,旨在从另一个方面对XN-1000的测定结果进行比对;同时,鉴于镜检法因计数细胞总数远低于全自动血液分析仪,故要比较这2种在方法学上完全不同而造成精密度差异较大的方法,可能不够恰当。因此,用FCM来替换镜检法进行细胞计数,从而能达到和全自动血液分析仪相似的精密度[10]。从统计结果来看,FCM与镜检法的测定结果差异亦无统计学意义( P>0.05),二者线性相关较好( r=0.956), r值高于XN-1000与镜检法的 r值(0.927)。FCM的诊断敏感性为70.0%,但特异性却较XN-1000差,为89.7%,AUC为0.838,检测参考值临界点为0.8。XN-1000与FCM的检测结果具有极佳的相关性。从两者的ROC曲线来看,其AUC均在0.7~0.9之间,表示测定具有一定的准确性。其中FCM检测结果具有更大的AUC,为0.838。若不考虑操作可行性、检测成本等因素,FCM是比血液分析仪更好的方法。XN-1000的灵敏度(真阳性率)为60.0%,低于FCM,但特异性为95.7%,高于FCM,其检测参考值临界点为0.4。这2种方法的临界点均较靠近左上角,说明假阳性和假阴性的总数较少,准确性较高。

外周血中出现NRBC是多种疾病过程中可出现的一种病理状态,进行NRBC检测有较为广泛临床意义。XN-1000测定外周血NRBC的特异性和准确性较高,方法简便,值得在临床推广。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] 赵 燕, 蔡朝阳, 王雪迎, 等. XE-2100全自动血细胞分析仪计数有核红细胞的准确性评价[J]. 临床输血与检验, 2010, 12(3): 221-224. [本文引用:1]
[2] Barnes PW, McFadden SL, Maehin SJ, et al. The international consensus group for hematology review: suggested criteria for action following automated CBC and WBC differential analysis[J]. Lab Hematol, 2005, 11(2): 83-90. [本文引用:1] [JCR: 1.293]
[3] 中华医学会检验分会全国血液学复检专家小组, 中华检验医学杂志编辑委员会. 全国血液学复检专家小组工作会议纪要暨血细胞自动计数复检标准释义[J]. 中华检验医学杂志, 2007, 30(4): 380-382. [本文引用:1]
[4] Igout J, Fretigny M, Vassee M, et al. Evaluation of the coulter LH 750 haematology analyzer compared with flow cytometry as the reference method for WBC, platelet and nucleated RBC count[J]. Clin Lab Haematol, 2004, 26(1): 1-7. [本文引用:1] [JCR: 1.304]
[5] Larghero J, Rea D, Brossard Y, et al. Prospective flow cytometric evaluation of nucleated red blood cells in cord blood units and relationship with nucleated and CD34(+) cell quantification[J]. Transfusion, 2006, 46(3): 403-406. [本文引用:1] [JCR: 3.526]
[6] Tsuji T, Sakata T, Hamaguchi Y, et al. New rapid flow cytometric method for the enumeration of nucleated red blood cells[J]. Cytometry, 1999, 37(4): 291-301. [本文引用:1]
[7] Kim SJ, Kim YJ, Shin S, et al. Comparison study of the rates of manual peripheral blood smear review from 3 automated hematology analyzers, unicel DxH 800, ADVIA 2120i, and XE 2100, using international consensus group guidelines[J]. Arch Pathol Lab Med, 2012, 136(11): 1408-1413. [本文引用:1] [JCR: 2.781]
[8] 慕悦意, 李筱梅, 李 勇, 等. XE-5000血液分析仪检测有核红细胞的评价[J]. 检验医学, 2012, 27(8): 667-670. [本文引用:1]
[9] 李建英. 血细胞分析仪自动计数外周血有核红细胞的应用研究[J]. 中华检验医学杂志, 2005, 28(6): 606-609. [本文引用:1]
[10] Fernand es BJ. Identification and enumeration of nucleated red blood cells in peripheral blood[J]. Sysmex J International, 2002, 12(2): 56-62. [本文引用:1]