引用本文
丁庆莉, 唐古生, 贺铮雯, 沈 茜, 秦阳华. 慢性乙型肝炎患者外周血Th17细胞比例和IL-17表达水平的临床意义. 检验医学, 2014, 29(1): 15[DING Qingli, TANG Gusheng, HE Zhengwen, SHEN Qian, QIN Yanghua.. The proportion of Th17 cells and IL-17 expression levels in peripheral blood of patients with chronic hepatitis B and their clinical significance. Labratory Medicine, 2014, 29(1): 15]  
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慢性乙型肝炎患者外周血Th17细胞比例和IL-17表达水平的临床意义
丁庆莉, 唐古生, 贺铮雯, 沈 茜, 秦阳华
第二军医大学附属长海医院实验诊断科, 上海 200433
摘要
目的 分析临床不同疾病程度慢性乙型肝炎 (CHB) 患者和正常对照者外周血辅助性T细胞17 (Th17) 的比例和其效应分子白细胞介素17 (IL-17) 水平的变化与疾病严重程度、乙型肝炎病毒 (HBV) DNA载量、肝脏损伤标志物等的关系, 以进一步证实Th17细胞在CHB患者疾病进程中的作用。方法 应用流式细胞术、实时荧光定量聚合酶链反应 (PCR) 和酶联免疫吸附试验 (ELISA) 等检测93例CHB患者 (其中轻度21例、中度37例、重度35例) 和28名正常对照者外周血Th17细胞比例、血清IL-17水平, 纯化CD4+T细胞经功能性抗CD3、抗CD28抗体刺激后IL-17和维甲酸相关孤儿核受体C (RORC) mRNA表达水平, 纯化CD4+T细胞刺激后培养液中IL-17水平。比较和分析上述检测数据在各组间的统计学差异及与HBV DNA载量、肝脏损伤标志物等的关系。结果 与正常对照组相比, CHB组外周血Th17细胞比例明显升高, 且随着疾病的加重, Th17细胞的比例也随之上升。CHB重度组Th17细胞比例、IL-17和RORC mRNA表达水平显著高于中度组、轻度组和正常对照组(P<0.05),各组间血清IL-17水平差异无统计学意义(P>0.05);CHB组纯化CD4+T细胞刺激后培养液中IL-17水平显著高于正常对照组(P<0.05);CHB重度组培养液IL-17水平明显高于中度组和轻度组(P<0.05) 。CHB组外周血Th17细胞比例与血清丙氨酸氨基转移酶 (ALT) 水平呈明显正相关(P<0.01),而与血清HBV DNA载量无相关性。结论 CHB患者体内增高的Th17细胞可能是造成肝脏炎症、肝细胞损伤的主要原因之一, 并与CHB的重症化密切相关。
关键词: 辅助性T细胞17; 白细胞介素 17; 肝功能; 慢性乙型肝炎
The proportion of Th17 cells and IL-17 expression levels in peripheral blood of patients with chronic hepatitis B and their clinical significance
DING Qingli, TANG Gusheng, HE Zhengwen, SHEN Qian, QIN Yanghua.
Department of Laboratory Diagnosis, Changhai Hospital, the Second Military Medical University, Shanghai 200433, China
Abstract
Objective To analyze T helper 17 (Th17) cell proportion and interleukin 17 (IL-17) levels in peripheral blood of patients with chronic hepatitis B (CHB) and healthy controls, and to evaluate their correlations with disease severity, serum hepatitis B virus (HBV) DNA load and liver injury markers, in order to investigate Th17 cells′ role in the pathogenesis of CHB.Methods The Th17 cell proportion and IL-17 levels in peripheral blood of 93 CHB patients (the mild, moderate and severe CHB patients had 21, 37 and 35 cases, respectively) and 28 healthy controls were determined by flow cytometry and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The mRNA expression levels of IL-17 and RAR-related orphan nuclear receptor C (RORC) of purified CD4+ T cells after stimulating with anti-CD3 and anti-CD28 antibodies were analyzed by real-time fluorescence polymerase chain reaction (PCR). The IL-17 levels in the supernatant of purified CD4+ T cells after stimulating with anti-CD3 and anti-CD28 antibodies were evaluated by ELISA. The data were analyzed statistically, and their relations with serum HBV DNA load, liver injury markers, and so on were analyzed.Results Compared with those of healthy control group, the proportion of Th17 cells in peripheral blood of CHB group was significantly higher, and increased with disease severity. The Th17 cell proportion, IL-17 levels and RORC mRNA levels in severe CHB group were significantly higher than those in moderate and mild CHB groups and healthy control group (P<0.05). There was no statistical significance in serum IL-17 levels among the groups(P>0.05). The IL-17 levels in the supernatant of purified CD4+ T cells after stimulating with anti-CD3 and anti-CD28 antibodies from CHB group were significantly higher than those from healthy control group(P<0.05), and the IL-17 levels in the supernatant from severe CHB group were higher than those from moderate and mild groups(P<0.05). The Th17 cell proportion in peripheral blood of CHB group showed a positive correlation with serum alanine aminotransferase (ALT) level (P<0.01), and showed no correlation with serum HBV DNA load.Conclusions The increased Th17 cell proportion in CHB patients may be the one of the factors for liver inflammatory response and liver injury and cause the progression of CHB.
Keyword: T helper 17 cell; Interleukin 17; Liver function; Chronic hepatitis B

乙型肝炎病毒 (hepatitis B virus, HBV) 感染引起的乙型病毒性肝炎是我国发病率较高的疾病。在感染HBV的大部分成年人中, 表现为一种急性、自限性的肝脏炎症, 病毒负荷的急剧下降, 长久的保护性体液和细胞免疫, 但在另一部分受染的成年人和大多数经垂直传播而致病的患者中, 持续的病毒感染会最终导致慢性乙型肝炎 (chronic hepatitis B, CHB)[ 1]。然而HBV在机体持续性感染致慢性肝炎发生的病理机制尚未完全阐明。HBV是一种非细胞毒性病毒, 当其进入机体后常引起一系列复杂的免疫反应, 而机体产生的免疫应答的强弱又与HBV感染所致的不同临床结果密切相关。在这一系列免疫应答中, 细胞免疫应答是决定HBV感染机体后转归的最重要因素。辅助性T细胞17 (T helper cell 17, Th17) 是近几年发现的辅助性T细胞 (CD4+T细胞) 新的功能亚群, 主要通过分泌大量的白细胞介素17 (interleukin 17, IL-17) 来发挥生物学效应。目前已证实Th17细胞是急性或慢性炎症环境中重要的效应细胞, 在自身免疫性疾病、炎症反应、肿瘤等的发生、发展中均发挥着重要的作用。至今, 有关Th17细胞与HBV致肝脏慢性免疫性炎症关系的研究在国内外已见少量报道[ 2, 3],研究结果均提示Th17细胞可能在病毒性肝炎慢性化过程中具有重要作用。基于上述原因, 本研究拟对临床不同疾病程度CHB患者和健康人外周血Th17细胞及其效应分子IL-17的水平进行检测, 分析这些变化与患者HBV DNA载量、肝脏损伤标志物等的关系, 旨在进一步证实Th17细胞在CHB慢性免疫炎症损伤过程中的作用。

材料和方法
一、研究对象

随机选取2007至2008年在长海医院感染科住院或门诊治疗的93例CHB患者, 男68例, 女25例, 平均年龄 (43±15) 岁, 其中轻度21例、中度37例、重度35例, 诊断依据2005年修订的“慢性乙型肝炎防治指南”标准[ 4]。所有患者没有并发丙型肝炎、丁型肝炎、戊型肝炎、人类免疫缺陷病毒感染和自身免疫性肝炎。28名健康者均为长海医院健康体检者, 其中男17名, 女11名, 平均年龄 (29±8) 岁, 无心、肝、肾等器质性疾病, 亦无乙型肝炎、丙型肝炎、丁型肝炎、戊型肝炎、人类免疫缺陷病毒感染和自身免疫性疾病。本研究经长海医院医学伦理委员会批准, 每位受试对象都签署了知情同意书。

二、标本采集

采集CHB患者血液标本时, 有17例接受了核苷类抗病毒治疗, 11例未接受任何治疗, 其余均仅接受保肝降酶治疗, 均未接受甾体类药物治疗。以无菌方式采集各试验对象晨起空腹静脉血, 乙二胺四乙酸抗凝血5 mL用于流式细胞仪检测细胞成分分离;不抗凝血5 mL, 血清用于检测肝功能、HBV DNA、IL-17等。

三、外周血Th17细胞和辅助性T细胞 (T helper cell 1, Th1) 细胞的流式细胞仪检测

取乙二胺四乙酸抗凝血100μL, 用100μL含10%小牛血清的RPMI-1640培养液 (Gibco公司) 混合后接种于96孔培养板 (Costar公司),同时加入终浓度为50 ng/mL的佛波醇酯 (Sigma公司) 、1 μg/mL离子霉素 (Sigma公司) 和1 μL/mL布雷菲德菌素A (Becton Dickinson公司) 。在37 ℃、5%CO2培养箱刺激培养5 h。收集体外刺激活化的外周血, 用磷酸盐缓冲液 (phosphate-buffered saline, PBS) 洗涤2次。加入5 μL异硫氰酸荧光素 (fluorescein isothiocyanate, FITC)-抗人CD4 (eBioscience公司),室温避光温育30 min。加入1 mL红细胞裂解液 (BD公司) 室温作用10 min, 洗涤。加入固定穿膜剂500 μL (eBioscience公司),室温作用1 h, 洗涤。分别加入5 μL藻红蛋白 (phycoerythin, PE)-抗人IL-17 (eBioscience公司) 、5 μL别藻蓝蛋白 (allophycocyanin, APC)-抗人γ干扰素 (interferon-gamma, IFN-γ, eBioscience公司) 和同型对照抗体, 室温作用30 min, 洗涤后立即用FACSCalibur流式细胞仪 (BD公司) 检测。以CD4+T细胞设门, 至少计数20 000个细胞, 以CellQuest软件分别IL-17和IFN-γ表达阳性细胞占CD4+T细胞的比例。

四、外周血CD4+T细胞的分离和刺激培养

采用无柱免疫磁珠细胞分选外周血CD4+细胞, 试剂盒为RosetteSep (加拿大STEMCELL公司),方法为抗体标记和免疫密度离心负筛选法, 具体步骤:取5 mL抗凝全血, 加250 μL CD4+T细胞富集试剂后混匀, 室温作用20 min, 用等量PBS进行稀释并混匀。在另一试管内加入适量淋巴细胞分离液 (上海华精生物高科技公司),将处理好的标本沿管壁缓缓叠加于分层液上, 形成清晰界面。置水平离心机中, 400×g离心20 min。用滴管直接吸出CD4+T细胞层, 加入4倍量以上的Hank’s液, 充分混匀, 300×g离心10 min。用含10%小牛血清的RPMI 1640培养液配制细胞悬液, 将细胞悬液调整到106/mL。取样经FITC-抗人CD4抗体染色后流式细胞仪检测纯度, 代表性结果见图1, 纯度>95%进行下一步试验。按100 μL 2×105/孔的细胞接种96孔培养板, 同时加入终浓度为1 μg/mL CD3 和2 μg/mL CD28功能性抗体 (eBioscience公司),37 ℃、5% CO2孵箱刺激培养5 h进行细胞总RNA抽提, 培养72 h收集上清液进行酶联免疫吸附试验 (enzyme-linked immunoserbent assay, ELISA) 检测。

图1 外周血分选CD4+T细胞经抗CD4-FITC
抗体标记后流式细胞术检测结果

五、血清和培养上清液IL-17水平的检测

采用ELISA检测, 试剂盒购于eBioscience公司, 操作严格按试剂盒说明书进行。

六、血清HBV DNA和丙氨酸氨基转移酶 (alanine aminotransferase, ALT) 的检测

采用荧光实时定量聚合酶链反应 (polymerase chain reaction, PCR) 检测患者血清HBV DNA水平, 试剂盒购自深圳匹基生物工程公司。采用速率法检测血清ALT, 试剂盒购于科华生物工程公司, 仪器为日立7600型全自动生化分析仪。

七、实时荧光定量PCR检测IL-17和维甲酸相关孤儿核受体 (RAR-related orphan nuclear receptor C, RORC) mRNA表达

取1×106个经刺激或未刺激CD4+T细胞, 用Trizol试剂 (Invitrogen公司) 抽提细胞总RNA, 逆转录采用TaKaRa PrimeScriptTM RT试剂盒 (TaKaRa公司) 进行。再使用SYBR PrimeScriptTM RT-PCR试剂盒 (TaKaRa公司) 于LightCycler 定量PCR仪 (Roche公司) 进行实时荧光定量PCR。以3-磷酸甘油醛脱氢酶 (glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, GAPDH ) mRNA表达量为内参照, 根据待检基因和内参照基因扩增的循环数Ct值, 按照公式相对值=2-ΔΔCT计算出标本中待检基因相对于内参照基因的相对含量。引物序列采用Primer Premier 5.0软件设计, IL-17上、下游引物序列:F-TGTCCACCATGTGGCCTAA-GAG;R-GTCCGAAATGAGGCTGTCTTTGA。RORC上、下游引物序列:F-ACCTCACCGAGGCCATTCAG;R-TAGGCCCGGCACATCCTAAC。GAPDH上、下游引物序列:F-GCACCGTCAAGGCTGAG-AAC;R-ATGGTGGTGAAGACGCCAGT。

八、统计学方法

采用SPSS 17.0软件包进行分析。结果以±s表示, 各检测指标间的比较采用非参数Kruskal-WallisU rank sum test 进行分析, 指标间相关性采用Kendals tau-b进行分析,P<0.05为差异有统计学意义。

结 果
一、 CHB患者外周血Th17细胞比例

与正常对照组[(0.62±0.58)%]相比, CHB患者外周血CD4+IFN-γ-IL-17+T细胞 (Th17细胞) 的比例[(1.89±1.46)%]明显升高(P<0.05) 。随着疾病的加重, Th17细胞的比例也随之上升。重度组、中度组和轻度组外周血Th17细胞的比例分别为 (2.75±2.89)%、 (1.75±1.58)%和 (1.24±0.98)%,重度组Th17细胞的比例显著高于中度组、轻度组和正常对照组(P<0.05),见图2、图3 (a) 。CHB中度组Th17细胞的比例也显著高于正常对照组(P<0.05) 。然而, 中度组Th17细胞的比例与轻度组、轻度组与正常对照组间差异均无统计学意义(P>0.05) 。同时, 本研究还观察了CHB患者外周血CD4+IFN-γ+IL-17-T细胞 (Th1细胞) 的比例变化及与疾病严重度的关系。结果显示, 各组间Th1细胞占CD4+T细胞的比例差异无统计学意义(P>0.05) 。见图2、图3 (b) 。


注:图中右上角的数字代表其所占CD4+T细胞的比例 (为一次试验的代表图)

图2 流式细胞术检测不同疾病程度CHB患者和
正常对照组外周血Th17细胞和Th1细胞的比例


注:CD4+IFN-γ-IL-17+T细胞为Th17细胞;CD4+IFN-γ+IL-17-细胞为Th1细胞;(a) 各组Th17细胞比例比较,*P<0.05;(b) 各组Th1细胞比例比较.

图3 不同疾病程度CHB患者与正常对照组外周血Th17细胞和Th1细胞的比例变化

二、CHB患者外周血纯化CD4+T细胞IL-17和核转录因子RORC mRNA表达水平的变化

未经刺激的CD4+T细胞IL-17和RORC mRNA表达水平各组间差异无统计学意义。然而, CD4+T细胞经抗CD3和抗CD28单抗刺激后, CHB重度组IL-17和RORC mRNA表达水平明显高于轻度组和正常对照组(P<0.05),且IL-17 mRNA表达在中度组与正常对照组间也存在差异, 但CHB重度组与中度组之间、轻度组与正常对照组之间的差异无统计学意义(P>0.05),见图4。

三、CHB患者血清和CD4+T细胞培养液IL-17水平的变化

各组间IL-17水平差异无统计学意义(P>0.05),见图5 (a) 。随后, 测定经纯化的CD4+T细胞刺激后的培养液的IL-17水平。与正常对照组相比, CHB患者CD4+T细胞刺激后的培养液中IL-17水平显著升高(P<0.05);且随疾病严重程度的增加, IL-17的表达水平亦随之增加。CHB重度组CD4+T细胞刺激后的培养液中IL-17的水平为 (4 535.69±1 857.31) pg/mL, 明显高于中度组[(2 472.01±1 139.43) pg/mL]、轻度组[(1 664.38±468.20 ) pg/mL]和正常对照组[(1 421.17±471.16) pg/mL](P<0.05),见图5 (b) 。虽然CHB中度组IL-17水平稍高于轻度组和正常对照组, 但差异无统计学意义(P>0.05);轻度组和正常对照组之间也无差异(P>0.05) 。


注:(a) 各组RORC mRNA表达水平的比较;(b) 各组IL-17 mRNA表达水平的比较;*P<0.05

图4 不同疾病程度CHB患者和正常对照组外周血纯化CD4+T细胞经功能性抗CD3和抗CD28单克隆抗体刺激后IL-17和RORC mRNA的表达水平


注:(a) 血清;(b) 培养上清液;*P<0.05

图5 不同疾病程度CHB患者与正常对照组血清和外周血纯化CD4+T细胞经功能性抗CD3和抗CD28单克隆抗体刺激72 h后培养液的IL-17表达水平

四、CHB患者外周血Th17比例与肝脏损伤的关系

CHB患者外周血Th17细胞比例与血清ALT水平呈明显正相关(P<0.01),见图6 (a),与血清HBV DNA载量无相关性(P>0.05),见图6 (b) 。


注:(a) Th17细胞比例与ALT的相关性分析;(b) Th17细胞比例与HBV DNA载量的相关性分析

图6 CHB患者外周血Th17细胞与
血清ALT水平及HBV DNA载量的相关性分析

讨 论

肝脏慢性炎症及继发性纤维化是CHB的特征。既往认为CHB患者机体清除病毒能力降低, 致使HBV可在体内持续存在, 导致HBV感染慢性化的免疫机制与Th1和Th2免疫应答失调有关。CHB患者体内的Th1细胞及其免疫应答降低, IFN-γ和IL-2等细胞因子减少, 造成Th1/Th2细胞比例失衡, 直接影响了细胞毒性T淋巴细胞 (cytotoxic T lymphocyte, CTL) 、自然杀伤 (natural killer, NK) 细胞和B细胞功能的正常发挥。本研究发现CHB组外周血Th1细胞比例与正常对照组无明显差异, 且与疾病的严重程度也无关系, 表明HBV感染慢性化不是单一因素作用的结果, 还存在其他的免疫机制。近来, 大量的研究已证实Th17细胞参与了多种肝脏疾病的发生机制, 在酒精性肝病、非酒精性脂肪性肝炎、原发性胆汁性肝硬化等疾病中, Th17细胞发挥了诱导固有免疫应答、中性粒细胞趋化激活、产生炎症反应等作用, 在对肝脏的损伤及疾病的进展中也均起到重要作用[ 5, 6] 。同时, 有文献报道Th17细胞不仅可以上调抗凋亡分子, 促进被病毒感染的细胞存活, 而且可以抑制CTL对靶细胞的破坏, 延长病毒持续感染的时间[ 7]。

有关CHB疾病过程中Th17细胞的变化、与疾病的关系等研究国内外已有一些报道, 但试验结果却不尽一致。杨波等[ 8]发现, CHB组和HBV相关慢加急性肝功能衰竭 (acute-on-chronic liver failure, ACLF) 组患者外周血Th17细胞频率均显著高于健康对照组, ACLF组又显著高于CHB组患者。ACLF患者外周血Th17细胞频率与国际标准化比值和终末期肝病模型评分均呈正相关, 而CHB患者外周血Th17细胞频率与ALT水平呈正相关, 与HBV DNA载量无关。Qi等[ 9]的研究也得到相似的结果, ACLF患者外周血Th17细胞频率和RORC mRNA表达水平显著高于CHB组, 而CHB组则显著高于健康对照组。然而, Zhang等[ 10]发现CHB患者外周血增加的Th17细胞频率与ALT水平及HBV DNA载量均呈正相关。林振忠等[ 11]也发现CHB患者Th17细胞的频数明显高于健康对照组, 但与总胆红素、直接胆红素和ALT无相关性。本研究结果显示CHB患者外周血Th17细胞比例明显高于正常对照组, 且随着疾病的加重, Th17细胞的比例也随之上升, 表现为重度组Th17细胞比例明显高于中度组、轻度组和正常对照组, 中度组Th17细胞比例也显著高于正常对照组。为了进一步明确CHB患者外周血Th17细胞比例的检测结果, 我们还对Th17细胞分化特异性核转录因子RORC mRNA的表达水平进行了检测, 所获的结果完全佐证上述发现。升高的Th17细胞比例是否与肝脏损伤存在一定的关联？我们发现CHB患者外周血Th17细胞的比例与血清ALT水平呈明显正相关, 而与血清HBV DNA载量无相关性, 这与杨波等[ 8]的报道完全一致。Ye等[ 12]已证实, CHB患者肝内Th17细胞数量与肝脏炎症活动度呈正相关, 该报道也是对本研究结果的有力支持。各文献报道结果有差异, 原因可能与CHB患者病例的入选条件不同有一定关系。在本研究和杨波等的报道中均将CHB按疾病严重程度进行分组, 其中重度组的病例数均﹥30例;而在林振忠等[ 11]的报道中均为CHB病例, 如均为轻度患者, 就较难观察到外周血Th17细胞比例与ALT变化的关联性。

IL-17是Th17细胞分泌的特征性炎性细胞因子, 具有广泛的细胞靶点, 可诱导其他炎性细胞因子、趋化因子和基质金属蛋白酶的表达, 参与中性粒细胞趋化, 引起炎性细胞浸润和组织损伤[ 5, 13]。国内外文献报道, CHB、肝硬化、原发性肝癌和慢性肝功能衰竭患者血清IL-17和外周血单个核细胞IL-17 mRNA水平均比正常对照显著升高, 在CHB和肝硬化患者的肝组织中IL-17的表达也明显增多[ 8, 10, 11, 12, 14]。然而, 这些结果并未获得一致的支持, 一些研究发现CHB患者血清IL-17水平与正常对照者比较无明显差异[ 15, 16]。本研究结果也显示CHB患者血清IL-17水平与正常对照者比较无明显差异。但分析试验对象纯化CD4+T细胞刺激后的培养液时发现, CHB患者CD4+T细胞刺激后的培养液中IL-17的水平明显高于正常对照者, 且随疾病严重程度的增加而增高。试验对象纯化CD4+T细胞经功能性抗CD3和抗CD28单克隆抗体模拟T细胞抗原受体激活CD4+T细胞时, CHB尤其是CHB重度和中度组患者CD4+T细胞趋向于分化更多的Th17细胞, 致培养液中IL-17的水平高于正常对照组和CHB轻度组。关于CHB患者血清中IL-17检测结果的差异, 我们认为可能与Th17细胞在血循环中所占比例甚少, 及CHB患者多存在T细胞免疫功能抑制有关。

综上所述, 本研究的结果提示CHB患者体内增高的Th17细胞可能是造成肝脏炎症、促进肝细胞损伤的主要原因之一, 并与CHB的重症化密切相关。调节性T细胞从CD4+T细胞分化而来, 在分化中所需的部分细胞因子与Th17细胞比较类似, 然而生物学功能却存在一定的拮抗。若能增加未治疗患者病例数, 按治疗与否和不同治疗方案分组, 并做治疗前后相关指标的比较, 则可分析不同治疗方案对相关指标的影响, 以期探讨可用于评价治疗效果的指标。如果在本研究中能够同时分析调节性T细胞的比例及相关转录因子、效应分子等的变化, 将有助于更全面地了解CHB患者的机体免疫状态。外周血Th17细胞比例升高可否作为CHB患者疾病进展的标记？Th17细胞是否可成为治疗CHB的一个新靶点？哪些因素驱动或参与了CHB患者Th17细胞的分化？这些问题均有待于进一步探索。

参考文献
[1] Rehermann B, Nascimbeni M. Immunology of hepatitis B virus and hepatitis C virus infection[J]. Nat Rev Immunol, 2005, 5(3): 215-229. [本文引用:1] [JCR: 33.129]
[2] Wu W, Li J, Chen F, et al. Circulating Th17 cells frequency is associated with the disease progression in HBV infected patients[J]. J Gastroenterol Hepatol, 2010, 25(4): 750-757. [本文引用:1] [JCR: 3.325]
[3] Yang W, Ding X, Deng J, et al. Interferon-gamma negatively regulates Th17-mediated immunopathology during mouse hepatitis virus infection[J]. J Mol Med （Berl), 2011, 89(4): 399-409. [本文引用:1]
[4] 中华医学会肝病学分会, 中华医学会感染病学分会. 慢性乙型肝炎防治指南（2010年版）[J]. 肝脏, 2011, 16(1): 2-16. [本文引用:1]
[5] Bian Z, Guo Y, Ha B, et al. Regulation of the inflammatory response: enhancing neutrophil infiltration under chronic inflammatory conditions[J]. J Immunol, 2012, 188(2): 844-853. [本文引用:2] [JCR: 5.52]
[6] Korn T, Bettelli E, Oukka M, et al. IL-17 and Th17 cells[J]. Annu Rev Immunol, 2009, 27: 485-517. [本文引用:1] [JCR: 36.556]
[7] Hou W, Kang HS, Kim BS. Th17 cells enhance viral persistence and inhibit T cell cytotoxicity in a model of chronic virus infection[J]. J Exp Med, 2009, 206(2): 313-328. [本文引用:1] [JCR: 13.214]
[8] 杨 波, 赵彩彦, 王亚东, 等. Th17细胞在慢性乙型肝炎及其重症化中的变化[J]. 中华传染病杂志, 2012, 30(8): 472-477. [本文引用:3]
[9] Qi ZX, Wang LY, Fan YC, et al. Increased peri-pheral ROR α and ROR γ mRNA expression is associated with acute-on-chronic hepatitis B liver failure[J]. J Viral Hepat, 2012, 19(11): 811-822. [本文引用:1] [JCR: 3.082]
[10] Zhang JY, Zhang Z, Lin F, et al. Interleukin-17-producing CD4（+) T cells increase with severity of liver damage in patients with chronic hepatitis B[J]. Hepatology, 2010, 51(1): 81-91. [本文引用:2]
[11] 林振忠, 余雪平, 苏智军, 等. 慢性乙型肝炎患者外周血TregTh17比率的检测及其与肝功能的相关性研究[J]. 中国免疫学杂志, 2012, 28(11): 1036-1040. [本文引用:3]
[12] Ye Y, Xie X, Yu J, et al. Involvement of Th17 and Th1 effector responses in patients with hepatitis B[J]. J Clin Immunol, 2010, 30(4): 546-555. [本文引用:2] [JCR: 3.382]
[13] 徐维家, 李 志, 杨婷婷, 等. 系统性红斑狼疮患者Th17和Th1细胞及其细胞因子水平的变化及临床意义[J]. 检验医学, 2013, 28(5): 396-399. [本文引用:1]
[14] Du WJ, Zhen JH, Zeng ZQ, et al. Expression of interleukin-17 associated with disease progression and liver fibrosis with hepatitis B virus infection: IL-17 in HBV infection[J]. Diagn Pathol, 2013, 8: 40. [本文引用:1] [JCR: 1.85]
[15] 陈 捷, 王兰兰, 付 阳, 等. IL-17、IL-23、TGF-β和IL-10在乙型肝炎病毒感染中的表达分析[J]. 免疫学杂志, 2012, 28(3): 231-236. [本文引用:1]
[16] 陈晓黎, 吴 玮, 侯青顺, 等. T细胞亚群及IL-17与慢性HBV感染结局的关系[J]. 中国医疗前沿, 2012, 7(5): 1-2. [本文引用:1]