引用本文
吴磊, 杨阳, 唐振华, 章强强, 陆庭嫣, 金月兰, 胡伟忠, 徐明, 顾伟鸣. 改良免疫层析法检测泌尿生殖道沙眼衣原体感染的评价. 29(12): 1226-1229
WU Lei, YANG Yang, TANG Zhenhua, ZHANG Qiangqiang, LU Tingyan, JIN Yuelan, HU Weizhong, XU Ming, GU Weiming. Evaluation of an improved immuno-chromatographic assay to detect chlamydia trachomatis in genitourinary tract infection. Labratory Medicine, 29(12): 1226-1229  
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改良免疫层析法检测泌尿生殖道沙眼衣原体感染的评价
吴磊1, 杨阳1, 唐振华2, 章强强3, 陆庭嫣2, 金月兰1, 胡伟忠1, 徐明3, 顾伟鸣1
1.上海市皮肤病医院检验科,上海 200443
2. 上海交通大学医学院附属国际和平妇幼保健院检验科上海 200030
3.复旦大学附属华山医院性病实验室,上海 200040

通讯作者：顾伟鸣,联系电话：02161833177。

作者简介：吴磊,男,1978年生,硕士,主管技师,主要从事性病检测研究。

基金:上海市自然科学基金项目(06ZR14068)
摘要
目的

评价改良免疫层析法在泌尿生殖道沙眼衣原体(CT)感染的检测质量,探讨其临床应用价值。

方法

运用改良免疫层析法试剂盒(简称chemtrue-CT)对3家医院的261例性病门诊和健康体检者进行检测,同时以聚合酶链反应(PCR)试剂盒(简称PCR-CT)检测作为标准,分析chemtrue-CT的检测性能。

结果

chemtrue-CT阳性率21.8%,PCR-CT阳性率28.4%,PCR-CT阳性率高于chemtrue-CT( P<0.01)。chemtrue-CT敏感性和特异性分别是75.7%和99.5%,总体符合率92.7%。其中男性组2种方法总符合率88.8%,阳性率差异有统计学意义( P<0.01);女性组2种方法总符合率为97.4%,阳性率差异无统计学意义( P>0.05);女性中高危人群和健康人群2种试剂检测总符合率分别为96.8%和98.2%。

结论

改良衣原体免疫层析法与PCR之间的检测差异正在缩小,尤其对女性人群的检测性能接近PCR。

关键词: 免疫层析法; 聚合酶链反应; 方法评价; 衣原体
中图分类号:R446.11 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2014)12-1226-04
Evaluation of an improved immuno-chromatographic assay to detect chlamydia trachomatis in genitourinary tract infection
WU Lei1, YANG Yang1, TANG Zhenhua2, ZHANG Qiangqiang3, LU Tingyan2, JIN Yuelan1, HU Weizhong1, XU Ming3, GU Weiming1
1.Department of Clinical Laboratory, Shanghai Dermatology Hospital, Shanghai 200443, China
2.Department of Clinical Laboratory, International Peace Maternity and Child Health Hospital, Shanghai Jiaotong University School of Medicine, Shanghai 200030, China
3. Department of Sexually Transmited Disease, Huashan Hospital, Shanghai 200040, China
Abstract
Objective

To evaluate the performance of an improved immuno-chromatographic assay for the detection of chlamydia trachomatis (CT) in genitourinary tract infection, and then to assess the significance of clinical application.

Methods

A total of 261 patients from sexually transmited infection clinics and healthy subjects in 3 hospitals of Shanghai were enrolled and determined by an improved immuno-chromatographic assay kit (chemtrue-CT). The polymerase chain reaction (PCR) kit (PCR-CT) as a reference standard was used to analyze the performance of chemtrue-CT.

Results

The total positive rate of PCR-CT (28.4%) was higher than that of chemtrue-CT (21.8%, P<0.01). The sensitivity and specificity of chemtrue-CT were 75.7% and 99.5%, respectively. The overall coincidence rate between the 2 assays was 92.7% with male group's coincidence rate 88.8% ( P<0.01) and female group's coincidence rate 97.4% ( P>0.05). The 2 assay results were similar with an overall coincidence rate of 96.8% and 98.2% in female group.

Conclusions

The performance difference between chemtrue-CT and PCR-CT is narrowing. Particularly for female group, chemtrue-CT shows acceptable performance in comparison with PCR-CT.

Keyword: Immuno-chromatographic assay; Polymerase chain reaction; Methodology evaluation; Chlamydia

沙眼衣原体(chlamydia trachomatis, CT)是一种比病毒大、比细菌小的原核微生物, 它严格细胞内寄生, 是最常见的性传播感染(sexually transmitted infections, STIs)病原体。它除了能引起泌尿生殖道感染、性病淋巴肉芽肿等疾病, 还可导致尿道炎、盆腔炎及流产、死胎、不孕不育等并发症[1, 2]。CT感染在欧美地区已超过淋病与梅毒的总和, 每年至少有1亿新发感染[3]。在我国CT感染是五大监测STIs之一, 全国缺乏真实感染率的基础数据。由于CT引起感染的临床症状常常不典型、易漏诊, 因此实验室检测为诊断提供了可靠的依据。

世界卫生组织推荐在高危人群中采用床边检验快速检测方法筛查STIs, 以期达到早期诊断、及时治疗、阻断传染源的目的[4]。我国早在上世纪90年代普遍采用CT床边检验方法检测衣原体感染。2005年全国7个地区CT床边检验试剂临床评估发现女性患者宫颈样本检测敏感性仅为49.3%[5]。有学者同样发现床边检验敏感性低的问题[6, 7, 8]。为了攻克这一难题, 科研人员使用多种方法和手段进行了技术的创新和改进, 试图提高这类方法的敏感性, 以达到临床检验所需的高要求。而随着蛋白表达的优化、生产工艺的改进以及质控体系的完善, 新的免疫层析法衣原体感染检测试剂的质量也有了较大提高。

我们参照Yin等[5]的评估方案, 在3家三级医院对性病门诊就诊者和妇科健康体检者进行CT感染的筛查, 以期客观地评价改良免疫层析法在泌尿生殖道衣原体感染的检测质量, 探讨其临床应用价值。

材料和方法
一、研究对象

2013年12月至2014年5月在上海市皮肤病医院、国际和平妇幼保健院、华山医院的性病门诊和/或妇科体检的就诊者, 年龄18~65岁。女性患者排除怀孕、经期。采样前2周内无抗菌药物使用史。

二、 试剂和仪器

评估试剂是改良免疫层析法试剂盒(简称chemtrue-CT, 上海凯创生物技术有限公司产品, 批号B201401023); 参比试剂是聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)试剂盒[简称PCR-CT, 凯杰生物工程(深圳)有限公司产品, 批号20130904]。采用ABI 75000仪器进行检测。

三、方法

1.样本采集及处理 男性采集尿道分泌物, 采集前2 h应禁止排尿; 用尿道专用无菌拭子伸入男性尿道口2~3 cm, 轻轻转动并停留30 s后取出备用。女性采集宫颈分泌物, 用无菌拭子去除宫颈外多余的黏液后, 用第2根女性采样拭子插入宫颈口1~2 cm, 轻轻转动并停留30 s后取出备用。每例采集2份样本。

2.试验操作 1支用于PCR检测样本置于装有2 mL生理盐水无菌管中, 浸泡15 min; 在微量震荡仪上持续振荡10 min后, 旋转挤干拭子弃去, -30 ℃保存, 集中进行PCR检测。另外1份样本立即采用chemtrue-CT试剂检测, 按照试剂盒要求操作、读取结果并记录。

3.结果判断与质量控制 分别记录不同试剂检测结果, PCR-CT试剂按操作说明书, 阴、阳性对照在允许范围内判定为试验结果有效。chemtrue-CT试剂盒均进行阴、阳性对照检测, 对照结果与预期结果应相符, 否则本批(盒)试剂无效。PCR-CT方法作为诊断标准。

四、统计学方法

患者信息及检测结果输入Excel软件, 导入SPSS16.0软件。以PCR结果为标准, 统计分析chemtrue-CT试剂的敏感性和特异性。使用χ 2检验进行阳性率差异性分析。以P< 0.05为差异具有统计学意义。

结 果
一、 一般情况

本研究共招募261例研究对象, 男144例, 女117例(性病门诊患者62例, 健康体检者55名), 男女比例为1.23∶ 1。其中chemtrue-CT检测阳性57例, 阳性率21.8%(95%可信区间0.17~0.27)。PCR-CT阳性74例, 阳性率28.4% (95%可信区间0.23~0.34 )。PCR-CT阳性率高于chemtrue-CT(χ 2=13.47, P< 0.01)。

二、chemtrue-CT敏感性和特异性

以PCR-CT为标准, chemtrue-CT敏感性和特异性分别是75.7%和99.5%, 总体符合率92.7%。见表1。

表1 chemtrue-CT和PCR-CT检测结果比较
三、男女性研究对象的检测结果分析

男性组144例, chemtrue-CT敏感性和特异性分别为73.2%、98.9%, 共有16例样本2种试剂检测结果不一致, 总体符合率为88.8%, 阳性率差异有统计学意义(χ 2=10.56, P< 0.01)。女性组117例, chemtrue-CT敏感性和特异性分别为83.3%、100.0%, 共有3例样本2种试剂检测结果不一致, 总体符合率为97.4%, 阳性率差异无统计学意义(χ 2=1.33, P> 0.05)。见表2。

表2 不同性别的2种试剂检测情况
四、女性高危和健康人群的检测结果分析

性病门诊组为62例, 总体符合率96.8%; 健康体检组55名, 总体符合率98.2%。健康人群中chemtrue-CT未筛查出CT感染患者, 2种试剂的整体检测情况基本相近。见表3。

表3 不同门诊的女性检测情况
讨 论

传统上衣原体感染检测的金标准是细胞培养。但由于该方法操作繁琐、耗时、技术要求高, 且受样本采集、运送、保存的影响较大, 仅在少数实验室开展。近年核酸检测技术的突破和发展, PCR成为衣原体感染实验室诊断的金标准[5, 9], 假阳性情况较少见[10]。但是由于执行严格的技术准入管理, 在医疗机构普遍开展存在难度。因此, 在高危人群中采用免疫层析法来检测衣原体感染具有现实意义。Yin等[5]在2006年对女性宫颈和阴道样本的研究发现, 免疫层析法(Clearview Chlamydia MF)试剂对PCR(Roche Amplicor CT)的敏感性分别是49.7%和32.8%, 特异性都超过97%。长期以来免疫层析法敏感性问题一直是影响我国衣原体感染的诊断问题。本研究对男女性泌尿生殖道样本检测发现, chemtrue-CT改良衣原体感染免疫层析法检测试剂的敏感性有大幅提高, 女性组的检测敏感性接近PCR结果, 差异主要是由男性病例组引入。

免疫层析法检测衣原体感染的准确性受到多种因素影响, 如感染者症状和病程、样本采集是否规范、样本处理是否合理、试剂的检测性能、结果判读等。基因重组蛋白识别衣原体抗原的能力, 是提高免疫层析法敏感性的核心问题。本研究试剂采用衣原体种属特异性脂多糖抗原优势表位表达的多重嵌合重组蛋白, 将1个抗体用于包被、2个抗体标记胶体金探针, 提高了衣原体特异性抗原的捕捉能力。另外在抗原裂解液的离子强度和pH缓冲能力方面作了优化。

chemtrue-CT在女性组中检测阳性率与PCR-CT的差异无统计学意义(χ 2=0.157, P> 0.05), 敏感性较Yin[5]报道提高了33.6%, 凸显了该产品检测性能的明显改善。蒋娟等[11]将免疫层析试剂与核酸方法比较, 男性组敏感性在57.14%。本研究显示总体阳性率差异的原因主要来自男性组病例, 这种男女性检测结果明显不同, 我们推测与性别的解剖结构、采样拭子、采样量的差异有关。这个研究结果解答了为什么国外要求衣原体免疫层析试剂仅限女性检测的问题, 而国内普遍在男性人群开展检测仍然存在漏检的风险。何况老品牌还有敏感性低的技术问题。

由于女性健康人群样本量不足, chemtrue-CT未筛查出阳性者, 有待进一步扩大不同的人群和部位样本的验证。

综上所述, 本研究表明改良衣原体免疫层析检测试剂与PCR之间的差异正在缩小, 特别是对女性高危人群来说, 该产品的检测结果接近PCR。这为推进世界卫生组织倡导的采用免疫层析法进行衣原体感染检测提供了数据支持。

The authors have declared that no competing interests exist.

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