引用本文
胡可胜, 马艳华, 刘连红, 李伟, 罗建祥. 血清ox-LDL与非酒精性脂肪肝超声检查关系的探讨. 检验医学, 2014, 29(2): 118-121[HU Kesheng, MA Yanhua, LIU Lianhong, LI Wei, LUO Jianxiang. Investigation on the correlation of serum ox-LDL level with ultrasound image for nonalcoholic fatty liver disease. Labratory Medicine, 2014, 29(2): 118-121]  
Permissions
血清ox-LDL与非酒精性脂肪肝超声检查关系的探讨
胡可胜1, 马艳华1, 刘连红1, 李伟2, 罗建祥1
1. 武警广东总队医院检验科,广东 广州 510000
2. 武警广东总队医院消化科,广东 广州 510000
摘要
目的 探讨不同程度非酒精性脂肪肝(NAFLD)患者血清氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)水平及其与代谢指标的相关性。方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测79例NAFLD患者和23名正常对照者血清ox-LDL浓度,同时测定肝功能、代谢指标及血清同型半胱氨酸(Hcy)水平,根据B超检查结果将79例NAFLD患者分为轻(40例)、中(25例)、重度(14例)脂肪肝。分析ox-LDL与其他指标及脂肪肝程度的相关性。结果 NAFLD组丙氨酸氨基转移酶、γ谷氨酰基转移酶、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白B、载脂蛋白E、Hcy、尿酸、空腹血糖、纤维连接蛋白及ox-LDL水平均明显高于正常对照组(P均＜0.05)。中、重度脂肪肝组血清ox-LDL水平明显高于轻度脂肪肝组(P均＜0.05)。ox-LDL与Hcy、尿酸、总胆汁酸呈正相关关系[相关系数(r)为0.375、0.369和0.395,P值分别为0.007、0.013和0.029],ox-LDL水平与脂肪肝的分级呈正相关(r＝0.410,P＝0.011)。结论 随着脂肪肝程度的加重,NAFLD患者血清ox-LDL水平逐渐升高。ox-LDL是肝功能受损及脂肪肝进展过程中的重要因素,对临床诊断和病情监测有重要意义。
关键词: 氧化低密度脂蛋白; 脂肪肝程度; 同型半胱氨酸非; 酒精性脂肪肝
Investigation on the correlation of serum ox-LDL level with ultrasound image for nonalcoholic fatty liver disease
HU Kesheng1, MA Yanhua1, LIU Lianhong1, LI Wei2, LUO Jianxiang1
1. Department of Clinical Laboratory, Guangdong Province Hospital of the People′s Arms Corps of China, Guangdong Guangzhou 510000, China
2. Department of Gastroenterology,Guangdong Province Hospital of the People′s Arms Corps of China,Guangdong Guangzhou 510000, China
Abstract
Objective To investigate the correlation of serum oxidized-low density lipoprotein (ox-LDL) with metabolism parameters in different graded nonalcoholic fatty liver disease(NAFLD) patients.Methods Enzyme-linked immunosorbert assay (ELISA) was used to determine the levels of serum ox-LDL of 79 NAFLD patients and 23 healthy controls, and the liver functions,metabolism parameters and serum homocysteine (Hcy) were determined simultaneously. By ultrasound image as the diagnostic standard, NAFLD patients were classified into mild (40 cases), moderate (25 cases) and severe (14 cases) fatty liver groups. The correlation of ox-LDL with other parameters and fatty liver infiltration grade was analyzed.Results Alanine aminotransferase,gamma-glutamyltransferase,triglyceride,total cholesterol, low-density lipoprotein cholesterol, apolipoprotein B, apolipoprotein E, Hcy, uric acid, fasting blood glucose, fibronectin and ox-LDL were significantly higher in NAFLD group than in healthy control group(P<0.05). Serum ox-LDL levels in mild fatty liver group were significantly lower than those in moderate fatty liver group and severe fatty liver group(P<0.05). Serum ox-LDL was positively correlated with Hcy, uric acid and total bile acid levels [correlation coefficients (r)=0.375, 0.369 and 0.395;P=0.007, 0.013 and 0.029], and was positively correlated with fatty liver infiltration grade (r＝0.410,P＝0.011).Conclusions The serum ox-LDL level in NAFLD patients increases with the increasing of fatty liver infiltration grade,and ox-LDL is an important factor in liver function impairment and fatty liver disease progression.
Keyword: Oxidized-low density lipoprotein; Fatty Liver infiltration grade; Homocysteine; Nonalcoholic fatty liver disease

非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)是一种无过量饮酒史(每日酒精摄入量＜20 g),由多种致病因素导致的肝实质细胞脂肪变性和脂质贮积为特征的临床病理综合征。随着饮食结构的调整、肥胖和糖尿病(diaberes millitus, DM)的流行,其发病率逐渐上升,越来越受到人们的关注和重视。在排除酒精性肝病、病毒性肝炎、自身免疫性疾病、药物、毒物等造成的肝损伤的基础上,临床上主要依靠影像学检查诊断,特别是B超,并且B超扫描可以对脂肪肝情况进行分级[ 1, 2]。虽然肝活检仍是目前诊断NAFLD的金标准,但因其创伤性和风险性,临床应用较少。

NAFLD的发病机制目前还不十分清楚,普遍接受的观点是以胰岛素抵抗为中心的学说,包括脂质氧化在内的氧化应激、炎症反应与其发病密切相关[ 3]。氧化低密度脂蛋白(oxidized-low density lipoprotein,ox-LDL)在动脉粥样硬化疾病中起着重要的作用,不仅是血管内皮损伤的重要起始因子,还参与了免疫炎症反应。同型半胱氨酸(homocysteine, Hcy)是引发心血管疾病的独立危险因素,能够直接引起血管内皮损伤,与机体的氧化应激密切相关[ 4]。NAFLD中不仅有血管内皮的损伤,还有内皮修复功能的下降[ 5, 6]。目前,关于ox-LDL在NAFLD进展中作用的报道较少。为此,我们检测了不同程度NAFLD患者的血清ox-LDL水平,并探讨ox-LDL与代谢指标的相关性。

材料和方法
一、对象

收集2012年7月至12月来武警广东总队医院就诊的NAFLD患者79例,男46例,女33例,年龄(42±13)岁。所有患者符合2006年2月中华医学会肝脏病学分会脂肪肝和酒精性肝病学组修订的《非酒精性脂肪肝病诊疗指南》标准,近1周未服用降脂药物、抗血小板药物或维生素E,根据B超检查结果分为轻度、中度和重度脂肪肝。选择同期健康对照者23名作为对照组,男13名,女10名,年龄39±12岁,无肝、肾、心、脑、肺等器质性疾病,排除肝炎病毒携带、糖尿病、高血脂、高血压等。2组性别分布及年龄差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。

二、仪器与试剂

日立7600型全自动生化分析仪。尿酸(UA)、空腹血糖(FPG)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、γ谷氨酰基转移酶(GGT)、总胆汁酸(TBA)、载脂蛋白E(apo E)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及Hcy试剂购自北京利德曼生化公司,载脂蛋白A1(apo A1)、载脂蛋白B(apo B)试剂购自浙江东瓯诊断产品公司,纤维连接蛋白(FN)试剂购自上海北加试剂公司。ox-LDL 酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒购自广州凯升生物公司,严格按照说明书操作,标准曲线r值≥0.99。

三、方法

1. B超检查 使用迈瑞DP9900plus超声诊断仪,探头频率3.5 MHz,检查前8 h禁水禁食。(1)轻度脂肪肝:肝肾反差增大,肝脏前场回声较同侧肾皮质增强,后场回声衰减不明显,肝内管状结构仍可见;(2)中度脂肪肝:肝肾反差增大,肝前场回声较肾皮质增强,后场衰弱,管状结构走行模糊,但尚可辨认;(3)重度脂肪肝:肝肾反差明显增大,肝前场回声明显增强,后场衰减明显,管状结构难以辨认[ 2]。所有脂肪肝均为均匀性脂肪肝,由2名主治医师共同确认。

2. 标本采集及检测 所有受试者均于清晨空腹采集肘静脉血,1 h内2 400×g离心5 min,取1 mL血清置于－20 ℃保存用于ox-LDL检测,其余血清当日2 h内检测。采用及相关配套试剂检测肝、肾功能和血糖、尿酸、血脂等,严格按照《全国临床检验操作规程》(第3版)进行实验。

四、统计学方法

采用SPSS 11.5统计软件进行分析。计量数据以±s表示,2组均数间采用独立样本t检验或Mann-Whitney检验,多组均数间比较采用单因素方差分析或Kruskal-Wallis检验,组间均数比较采用SNK法或者Bonferroni法调整α值后进行Wilcoxon检验。相关分析采用Pearson或Spearman等级相关。P<0.05为差异有统计学意义。

结 果
一、对照组及NAFLD组不同程度脂肪肝患者肝功能及代谢变化

对照组与NAFLD组的年龄及性别差异无统计学意义。NAFLD组血压、ALT、GGT、TG、TC、LDL-C、apo B、apo E、Hcy、UA、FBG、FN及ox-LDL水平均明显高于对照组(P均＜0.05),其余指标差异无统计学意义(P>0.05)。重度脂肪肝组ALT水平明显高于轻度脂肪肝组(P=0.001),中度及重度脂肪肝组GGT水平明显高于轻度组(调整后P值分别为0.035、0.047),提示肝脏脂肪累积越多肝损伤越严重。重度脂肪肝组Hcy水平明显高于轻度组(P=0.019)。ox-LDL随着脂肪肝严重程度的增加而增高,中度及重度组明显高于轻度脂肪肝组(P值分别为0.036、0.007)。见表1:

表1 对照组和NAFLD组的临床数据比较(±s)
注:与对照组比较,*P<0.05、**P<0.01;与轻度脂肪肝组比较,#P<0.05、##P<0.01.

二、ox-LDL与代谢指标及脂肪肝分级的相关性.

相关分析显示ox-LDL与Hcy、UA水平呈正相关(Pearson相关系数分别为0.375和0.369,P值分别为0.007和0.013),与TBA水平呈正相关[Spearman等级相关系数＝0.395,P＝0.029]。等级相关分析显示ox-LDL水平与脂肪肝的分级明显相关(Spearman等级相关系数=0.410,P=0.011),说明ox-LDL是疾病进展过程中的重要因素。

讨 论

脂肪肝并非是一种独立性疾病,而是多种因素引起的肝脏脂肪蓄积过多的一种病理状态,其发病机制至今尚未清楚。许多的学者认为NAFLD可被看作是代谢综合征的肝脏表型。为了探索血脂成分及Hcy等在NAFLD超声学进展过程中的作用,在患者组年龄及性别匹配的基础上,我们检测了肝脏不同程度脂肪累积情况下的血清肝脏酶学、血脂及Hcy等表达情况。本研究证实,NAFLD患者有许多代谢综合征的特点,包括高FBG、高脂血症、高UA、血压偏高、高Hcy等。包括ALT及GGT在内的肝脏酶学指标明显高于对照组,这与文献[ 7]报道相一致。同时,随着肝脏脂肪累积的加重,这2个酶学指标明显上升。据报道NAFLD中只有23%的患者存在ALT异常[ 8]。本研究中有20.0%(8/40)轻度脂肪肝、28.0%(7/25)中度脂肪肝和42.8%(6/14)重度脂肪肝患者存在ALT异常。FN是一种广泛存在于多种组织器官的糖蛋白,参与了机体的损伤修复。FN是血浆调理素之一,在血浆中的含量反映调节网状内皮系统(RES)吞噬免疫复合物的吞噬功能[ 9],NAFLD中高表达的FN可能是脂肪肝时机体损伤修的指标之一,提示RES活性增高。

TBA是胆固醇在肝脏分解代谢的产物,其生成和代谢与肝脏关系密切。TBA异常反映了肝脏的损害程度[ 10]。NAFLD患者血清TBA水平明显高于正常对照者,这与之前的研究结果[ 11]一致;同时 ox-LDL与TBA呈等级正相关(Spearman等级相关系数=0.395,P＝0.029),反映了胆固醇代谢与低密度脂蛋白(LDL)氧化之间有相关。本研究推测:当胆固醇代谢出路受阻时,包括LDL在内的血胆固醇水平升高,可能升高氧化应激水平[ 12],使得脂质中的LDL氧化增加;另一方面,脂肪肝情况下升高的ox-LDL使机体血管内皮受损,加重胆固醇代谢障碍。

Hcy是蛋氨酸分解代谢的中间产物,主要在肝脏进行合成和分解,其中85％的Hcy转硫作用在肝脏中进行。基础与流行病学研究显示其水平升高是心血管病的危险因素[ 13]。Hcy可直接造成血管内皮细胞损伤和血管功能异常,可引起内皮细胞衰老,自由基产生增多。本研究发现NAFLD组血清Hcy水平明显高于对照组,这与之前的文献[ 7, 14]报道相似;同时还发现在NAFLD患者中,重度者血清Hcy水平明显高于轻度者(P=0.015);也稍高于中度者,但差异无统计学意义(P=0.076),ox-LDL与Hcy呈正相关。体外实验证实,Hcy在抑制内皮细胞生长的同时可以使ox-LDL水平上升[ 15]。本研究推测高Hcy会促进LDL氧化为ox-LDL,这可能是NAFLD中ox-LDL升高的原因之一;另一方面,ox-LDL、LDL-C、HDL-C等血脂成分变化会改变血液流变学[ 16],通过包括高血压机械学及ox-LDL作用在内的多条途径损伤血管,使得机体氧化应激加剧,Hcy水平升高。值得注意的是,NAFLD患者的血压、血脂、UA水平等升高,且Hcy、UA及脂肪肝分级与ox-LDL呈正相关。提示ox-LDL参与了脂肪肝的超声学进展。当然,本研究也有局限性,一是研究属于小样本,特别是中重度脂肪肝患者的例数偏少;二是超声诊断脂肪肝分型没有量化标准,一定程度上影响病例分型的准确性;三是没有脂肪肝及对照者的BMI数据,有研究表明BMI与Hcy水平相关[ 17]。

概言之,ox-LDL是公认的血管内皮损伤重要起始因子,在NAFLD患者中明显升高,与肝脏损害的敏感指标之一的TBA水平、心血管疾病的独立危险因素Hcy、血UA水平及肝脏超声学脂肪累积程度密切相关,是NAFLD疾病进展中的重要因素。ox-LDL可能成为NAFLD诊断和病情监测的重要指标之一,但是具体的致病途径有待进一步的探索。

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