引用本文
郑岚, 杨海鸥, 胡洁, 傅启华. 0~7 d婴幼儿乙型肝炎表面抗原检测适用方法的选择. 2014, 29(10): 1004-1006[ZHENG Lan, YANG Haiou, HU Jie, FU Qihua.. Selection of the methods for detecting hepatitis B virus surface antigen in infants of 0-7 d. Labratory Medicine, 2014, 29(10): 1004-1006]  
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0~7 d婴幼儿乙型肝炎表面抗原检测适用方法的选择
郑岚, 杨海鸥, 胡洁, 傅启华
上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心检验科,上海 200127

作者简介:郑 岚,女,1967年生,主管技师,主要从事临床免疫学检验研究。

通讯作者:傅启华,联系电话:021-38626161-85158。

摘要

目的

探讨选择适合于检测0~7 d婴幼儿乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的方法。

方法

收集上海儿童医学中心临床送检的0~7 d婴幼儿血清标本137例,其中接受乙型肝炎疫苗接种者101例,未接受乙型肝炎疫苗接种者36例。用电化学发光法检测标本HBsAg,同时进行胆红素及血红蛋白测定。检测标本用酶联免疫吸附试验(ELISA)复测。通过查阅患儿病史资料,采用相关分析法分析注射乙型肝炎疫苗所致检测结果假阳性率的风险。

结果

接种疫苗组中55例为阳性,阳性率为54.5%;而未接种疫苗组中7例为阳性,阳性率为19.4%。风险性分析显示其比值比(OR)为4.953(95%可信区间1.987~12.350)。胆红素及溶血等因素并不影响假阳性的产生,而假阳性标本经ELISA复测后均为阴性。

结论

ELISA更合适用于0~7 d婴幼儿HBsAg的检测, 若用电化学发光法检测易造成一定的假阳性,应在注射乙型肝炎疫苗1周后检测,阳性结果则需在间隔数天后复测。

关键词: 乙型肝炎表面抗原; 电化学发光; 假阳性
中图分类号:R446.61 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2014)10-1004-03
Selection of the methods for detecting hepatitis B virus surface antigen in infants of 0-7 d
ZHENG Lan, YANG Haiou, HU Jie, FU Qihua.
Department of Clinical Laboratory, Shanghai Children's Medical Center, Shanghai Jiaotong University School of Medicine, Shanghai 200127, China
Abstract

Objective

To investigate the proper method for detecting hepatitis B virus surface antigen (HBsAg) in infants of 0-7 d.

Methods

A total of 137 serum samples from infants of 0-7 d were collected from Shanghai Children's Medical Center. The 101 of 147 cases had been injected with hepatitis B vaccine, and the other 36 cases had not been injected. Electro-chemiluminescence immunoassay was used to detect HBsAg. The bilirubin and hemoglobin were detected simultaneously. All the samples were detected and reviewed by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Moreover, the medical history and the percentage of hepatitis B vaccine injection were analyzed and calculated for false positive rate by correlation analysis.

Results

The 55 cases exhibited positive results in vaccine injection group, and the positive rate was 54.5%. A total of 7 cases in non vaccine injection group showed positive results, and the positive rate was 19.4%. Risk analysis showed that odds ratio (OR) was 4.953 (95% confidence interval: 1.987-12.350). Bilirubin and hemoglobin did not affect the false positivity. All of these false positive samples above were confirmed negatively by ELISA.

Conclusions

ELISA is the right way to detect HBsAg in infants of 0-7 d. Hepatitis B vaccine injection could result in false positivity by electro-chemiluminescence immunoassay, which should be performed after 1 week, and should be repeated if false positive result exhibits.

Keyword: Hepatitis B virus surface antigen; Electro-chemiluminescence immunoassay; False positivity

乙型肝炎在我国的发病率居全球之首,是当前严重危害人们身体健康的传染病之一。乙型肝炎表面抗原(hepatitis B virus surface antigen, HBsAg)是乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染的最主要病原标志和直接证据之一[ 1]。因此,临床上常利用HBsAg判断HBV是否感染、监测HBV复制及抗病毒疗效观察[ 2]。此外,在体检、输血、手术及产前筛查等方面,HBsAg往往是检查的项目之一。目前检测HBsAg的方法主要有胶体金标记法、酶联免疫吸附试验(ELISA)、放射免疫法及电化学发光免疫分析法等。电化学发光法除具有免疫学反应的高特异性外,还具备其特有的敏感性高、精密度高和准确度好等优点[ 3]。但该方法的高敏感性造成其检测结果可产生一定的假阳性。0~7 d婴幼儿HBsA的假阳性检测结果可引起对患儿进行二次标本送检及后续不必要的治疗。本研究利用临床送检用患儿血清进行HBsAg检测,结合临床病史资料,探讨适合于0~7 d婴幼儿HBsAg检测的方法,同时对电化学方法检测产生假阳性结果的因素进行分析,为进一步更好地服务于临床提供支持。

材料和方法
一、研究对象

收集2012年9月至2013年6月上海儿童医学中心住院患儿送检的检测HBsAg的血清标本101例,患儿均已接受乙型肝炎疫苗接种,其中男78例,女23例,年龄为0~7 d。36例未接受乙型肝炎疫苗接种的对照标本为同期上海儿童医学中心住院患儿送检的血清标本,患儿男28例,女8例,年龄为0~7 d。

二、仪器和试剂

罗氏公司Cobas E601电化学发光仪及配套HBsAg检测试剂盒;上海科华ST-360酶标仪及ELISA HBsAg试剂盒。

三、方法

电化学发光法检测操作严格按照仪器说明书进行。每天用上海市临床检验中心的HBsAg质控品进行室内质控[变异系数( CV)<10.00%,期间平均 CV为6.78%],阴、阳性结果按试剂说明书进行判读,Cut-off值<0.9判断为阴性,Cut-off值>1.0判断为阳性,Cut-off值0.9~1.0判定为临界值。所有标本均用ELISA复测,操作严格按照说明书进行,结果判读标准为:S/CO≥1.0判断为阳性,S/CO<1.0判断为阴性。

四、统计学方法

采用SPSS Statistics17软件进行统计分析,分析胆红素及血红蛋白对HBsAg测定影响时采用T-TEST。 P<0.05为差异有统计学意义。

结 果
一、电化学发光法检测0~7 d婴幼儿HBsAg水平

用电化学发光法检测0~7 d婴幼儿血清HBsAg常出现弱反应性结果。>7 d的婴幼儿血清标本该现象极少出现。137例标本中有62例阳性,其中3例结果在0.9~1.0之间、59例在1.0~10.0之间。第2次取样(间隔时间约2~4 d)复测后结果为阴性,前后双份标本用ELISA复测,结果均为阴性。考虑到患儿年龄均<7 d,与临床沟通及查阅患儿病史后,62例入组标本中2例患儿母亲有HBV感染史,其余60例患儿父母无HBV感染史,可排除出生时垂直传播引起的阳性。

二、黄疸血清、溶血血清对HBsAg检测的影响

为分析上述出现假阳性的原因,考虑到患儿年龄为0~7 d,其标本大多为黄疸和/或溶血的血清,因此为明确黄疸、溶血因素是否会对检测结果产生影响,本研究对62例假阳性标本(假阳性组)及75例阴性标本(阴性组)进行总胆红素、直接胆红素及血红蛋白测定,结果见图 1。由图1可以看出,假阳性组的总胆红素、直接胆红素平均值与阴性组相比,并无明显差异。同时,假阳性组与阴性组的血红蛋白也未见有明显差异。

图1 假阳性组和阴性组患儿总胆红素、直接胆红素及血红蛋白分布注:(a)总胆红素;(b)直接胆红素;(c)血红蛋白

三、乙型肝炎疫苗注射对电化学发法光检测HBsAg的影响

新生儿一出生均按乙型肝炎防治的相关规定注射乙型肝炎疫苗。101例接种疫苗的0~7 d婴幼儿中,55例为弱阳性,阳性率为54.5%;而36例未接种疫苗的0~7 d婴幼儿中,7例为阳性,阳性率为19.4%,风险性分析显示疫苗接种所致假阳性的比值比(odds ratio, OR)为4.953(95%可信区间1.987~12.350)。

讨 论

我国是乙型肝炎感染大国,感染者的血液中存在HBsAg[ 4]。HBsAg是首选的HBV感染免疫学标志物,可用于急、慢性乙型肝炎患者的病程监测及抗病毒疗效观察。此外,HBsAg还可用于产前筛查及输血、手术前必备检查项目之一。目前医疗机构主要采用胶体金标记法、ELISA、电化学发光免疫分析法及核酸定量等对HBsAg蛋白及表达水平进行检测[ 5]。胶体金试纸条法操作简便、快速,适用于急诊及健康人群的筛查。但由于胶体金法需要较高浓度的标志物,其敏感性受到一定的限制,检测低滴度HBsAg时易造成假阴性,此外该方法对血清要求较高,尽量避免对溶血标本进行检测[ 6]。ELISA较胶体金法具有敏感性高、特异性强、重复性好等优点,还可进行批量处理,是目前较常用的检测方法。但该方法易受加样时间、反应温度及时间、洗涤条件等影响,而且操作步骤较多,耗时长,故不适用于急诊等筛查[ 7]。核酸定量检测能更精确地反映病毒复制情况,现主要用于乙型肝炎患者病情监测及疗效观察[ 8]。电化学发光免疫分析法相比ELISA具有更高的敏感性及精密度,还具有更宽的检测线性范围。此外,由于采用全自动化操作,可避免人为因素的影响。该方法现为医疗机构较多采用的检测方法。

本研究所采用的Cobas E601电化学发光仪检测HBsAg Cut-off值为“0.9”,介于0.9~1.0之间判定为临界值。我们在实际工作中发现,该方法在检测年龄>7 d的患儿标本时未见有难以判断结果的现象,但部分0~7 d婴幼儿标本的检测值介于1.0~10.0之间,与临床进行沟通后间隔2~4 d再次抽血检测后其结果转为阴性(Cut-off值<0.9)。该双份标本经ELISA复测后均为阴性,提示采用电化学发光法检测0~7 d婴幼儿血清标本存在一定的假阳性。由于0~7 d婴幼儿血清主要为黄疸和/或溶血标本,将患儿血清进行胆红素和血红蛋白测定后发现,2种因素在假阳性组及阴性组中表现相似的结果。提示胆红素增高所致的黄疸及溶血并不是造成电化学发光法检测HBsAg出现假阳性的主要因素。通过查阅患儿病史发现,在我们所收集的101例接种疫苗患儿中,55例为阳性,阳性率为54.5%;而作为对照组的36例未接种疫苗患儿中7例为阳性,阳性率为19.4%。统计分析提示注射乙型肝炎疫苗增加了HBsAg检测呈假阳性结果的风险。该结果同时提示,电化学发光法可以真实地反映由于计划免疫而引起的生理状况,而敏感性相对低的ELISA因不能测出进入血液、低含量的疫苗中的HBsAg成分,所以未见假阳性现象。因此,ELISA更合适用于检测0~7 d婴幼儿HBsAg水平,电化学发光法应在注射乙型肝炎疫苗1周后进行检测,阳性结果则需在间隔数天后复测[ 9]。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
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